LINC01844 diagnostisena biomarkkerina POCD:lle iäkkäillä potilailla

Kokeen suunnittelu Tämä yhden keskuksen havainnointikoe suoritetaan elektiivisen lannerangan dekompression ja fuusion aikana Zhongshanin sairaalassa Fudanin yliopistossa Shanghaissa, Kiinassa. Kirjallinen tietoinen suostumus saadaan kaikilta osallistujilta. 21. helmikuuta 2024 mennessä koe hyväksyttiin Zhongshanin sairaalalle Fudanin yliopistossa (Kiina) hyväksyntänumerolla B2024-063R.

Anestesia Kun potilaat ovat tulleet leikkaussaliin, elintoimintoja seurataan, potilaille annetaan happihengitys (> 8L/min). Yleisanestesia indusoidaan sufentaniililla (0,2 ug/kg), propofolilla [tavoitekontrolloitu infuusio (TCI) plasmapitoisuudella 3 ug/ml), remifentaniililla (TCI plasmakonsentraatiolla 3 ng/ml) ja rokuronilla (0,6 mg/kg) . Narkoottisia ja vasoaktiivisia lääkkeitä käytetään leikkauksen aikana anestesian syvyyden, verenpaineen ja hengitysparametrien mukaan. Potilasohjattu suonensisäinen analgesia (PCIA) pumppu (sufentaniili 250 ug ja ramosetron 0,6 mg) liitetään leikkauksen jälkeen.

LINC01844:n havaitseminen ja valmistus Totaali-RNA uutetaan ääreisverinäytteistä käyttämällä TRIzol LS:ää (Invitrogen, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Lyhyesti sanottuna, sen jälkeen kun verinäyte (250 μL) on homogenoitu TRIzol LS -regentillä (750 μL), kloroformia (200 μL) lisätään jatkoanalyysiä varten. Näytettä sentrifugoidaan 12 000 x g, 4 ˚C 15 minuuttia, sitten RNA:n sisältävä vesifaasi siirretään uuteen putkeen ja isopropanolia (0,5 ml) lisätään RNA:n saostusta varten. RNA-pelletti pestään 75-prosenttisella etanolilla (1 ml) ja lopuksi suspendoidaan uudelleen RNaasi-vapaaseen veteen (10-20 µl). RNA:n laatu määritetään NanoDrop2000:lla. Optinen tiheyssuhde 260/280 > 1,80 on osoitus siitä, että näytettä voitaisiin käyttää myöhemmissä kokeissa. Seuraavaksi käytämme M-MLV-käänteistranskriptaasia (Promega, USA) cDNA:n synteesiin. Loppuanalyysissä käytettiin reaaliaikaista kvantitatiivista polymeraasiketjureaktiota (qRT-PCR) SYBR Green PCR Master Mix Kitin (Qiagen) ohjeiden mukaisesti. PCR-parametrit: 95˚C 10 min; 45 sykliä 95 ˚C 15 s, 60 ˚C 30 s ja 72 ˚C 30 s. GAPDH valitaan vertailugeeniksi, kertamuutosta (2 -44Ct) käytetään LINC01844:n suhteellisten tasojen analysointiin.

Neuropsykologisen testin arviointi ja POCD-arviointi Päivää ennen leikkausta potilaiden masennus arvioidaan potilaan terveyskyselyllä 9 (PHQ-9), kun taas potilaat, joilla on aiemmin ollut vakava kognitiivinen vajaatoiminta, suljetaan pois minimental state -tutkimuksen (MMSE) (MMSE) avulla. pisteet < 24). Joukko neuropsykologisia testejä suoritetaan 1 päivä ennen leikkausta ja 1., 3. ja 5. päivä leikkauksen jälkeen potilaiden kognitiivisten toimintojen arvioimiseksi, mukaan lukien Hopkinsin kuulooppimistesti-tarkistettu (HALT-R), lyhyt visuospatiaalinen muistitesti (BVMT). -R), jäljentekotesti (TMT), numerovälitesti (DST), digitaalisten symbolien korvaustesti (DSST) ja verbien ja graafien palautustesti. Kaikki nämä testit suorittaa rauhallisessa ympäristössä koulutetun lääkärin toimesta, joka on sokea kirurgiselle toimenpiteelle ja verinäytteelle. Samaan aikaan verrokkiryhmäksi rekrytoidaan 20 tervettä vapaaehtoista ilman leikkausta iän, sukupuolen ja koulutusvuosien kanssa. Neuropsykologinen testi suoritetaan kontrolliryhmässä kognitiivisten toimintojen normaalin viitearvon määrittämiseksi samalla aikavälillä. Peruspisteet ja oppimistulokset vähennettiin kustakin neuropsykologisesta testipisteestä leikkauksen jälkeisen kognitiivisen heikentymisen tutkimista koskevien kansainvälisten ohjeiden mukaisesti ja jaettiin vertailuryhmän peruspisteiden keskihajonnalla. Tulos nimettiin Z-pisteeksi. Kun vähintään kaksi Z-asteikkoa on suurempi kuin 1,961, POCD otettiin huomioon.

Opintokäynnit ja tiedonkeruu Potilaiden luona käydään ennen leikkausta ja postoperatiivisena päivänä (POD) 1 ja 3 ja 5. Potilaat seulotaan mukaanottokriteerien mukaan. Kaikki osallistumiskriteerit täyttävät potilaat rekisteröidään seulontalokitiedostoon. Tutkijat selittävät tutkimuksen kulun ja tarkoituksen sekä antavat kirjallista tietoa tutkimuksesta. Potilaiden, jotka haluavat osallistua tutkimukseen, on annettava kirjallinen tietoinen suostumus.

Tutkimushenkilöstö tai kliininen henkilökunta rekisteröi tiedot sekä paperille tapausraporttilomakkeelle (CRF) että sähköiselle tapausraporttilomakkeelle (eCRF) sähköiseen tiedonkeruujärjestelmään (EDC) tutkimuspaikan tutkijoiden valvonnassa. Jos epäjohdonmukaisuus on epäjohdonmukaista, CRF-paperia käytetään kultastandardina.

Tietojen käsittely Kaksi tutkimusryhmän jäsentä suorittaa tutkimusseurantaa. Etävalvonta suoritetaan varhaisten poikkeavien kuvioiden, johdonmukaisuuden, uskottavuuden ja muiden poikkeavuuksien ilmoittamiseksi. Potilastiedot kerätään pseudonyymimuodossa käyttämällä neljästä kolmesta numerosta koostuvaa potilasnumeroa (tunniste). Tutkimustiedot kerätään ja hallitaan käyttämällä tutkijan aloitteita kokeilu-EDC (IIT-EDC) -työkaluja. IIT-EDC on salasanasuojattu, intranet-pohjainen sovellus, joka on suunniteltu tukemaan tutkimusten datatallenteita (verkkosivusto: http://10.15.7.137). Valituille tutkijoille myönnetään täysi pääsy lopulliseen kokeen tietojoukkoon. Kaikki alkuperäiset tietueet, mukaan lukien suostumuslomakkeet, raportit epäillyistä odottamattomista vakavista haittatapahtumista (SAE) ja asiaankuuluvat kirjeenvaihdot, arkistoidaan kokeilupaikoilla 10 vuoden ajan. Puhdas kokeilutietokantatiedosto anonymisoidaan ja sitä ylläpidetään 10 vuoden ajan.

Turvallisuus Kaikki haittatapahtumat (AE), joiden uskotaan liittyvän tutkimukseen, ilmoitetaan tutkimusta koordinoivalle keskukselle. Paikallisten lakien ja määräysten mukaan osallistujat voivat saada yksikkömme tarjoamaa maksutonta hoitoa tai saada korvausta, jos tutkimukseen liittyvä vamma sattuu, ja kaikista epäillyistä odottamattomista vammoista ilmoitetaan tietojen seuranta- ja turvallisuuskomitealle (DMSC). DMSC on riippumaton kokeiden tutkijoista ja suorittaa jatkuvan turvallisuusparametrien ja yleisen tutkimuksen suorittamisen arvioinnin. DMSC:ssä on kaksi riippumatonta laajamittaisten kliinisten tutkimusten asiantuntijaa ja yksi riippumaton tilastotieteilijä. DMSC on vastuussa tutkimukseen osallistuneiden etujen turvaamisesta, interventioiden turvallisuuden ja tehokkuuden arvioinnista tutkimuksen aikana sekä kliinisen tutkimuksen yleisen toiminnan seurannasta. Kokeen eheyden parantamiseksi DMSC voi myös laatia suosituksia, jotka liittyvät osallistujien rekrytointiin/säilyttämiseen, heidän hallintaan, protokollakohtaisten hoito-ohjelmien noudattamisen ja osallistujien säilyttämisen parantamiseen sekä tiedonhallinta- ja laadunvalvontamenettelyihin.

Tilastollinen analyysi Näytteen koko - Jotta voidaan varmistaa LINC01844:n suhteellisen tason ennustearvo veressä ikääntyneiden ihmisten POCD:lle leikkauksen jälkeen, vastaanottimen toimintakäyrän (ROC) kautta mitatun käyrän alla olevan alueen (AUC) on oltava suurempi kuin 0,5. Alustavan tutkimuksen tulosten perusteella AUC oli 0,73 ja POCD:n ilmaantuvuus 33,3 %. Näytteen koko laskettiin PASS:lla (versio 11.0). Jotta teho on 80 % ja merkitsevyystaso 5 % yksipuolista vaihtoehtoista hypoteesia vastaan, vaaditaan 57 osallistujaa. Jos osallistujista jää pois 10 %, otoksen koko on 63.

Analyysi - Kolmogorov-Smirnov-testillä arvioidaan jatkuvan datan normaalijakaumaa. Perustason ominaisuudet ilmaistaan ​​luvuina ja prosenttiosuuksina, keskiarvoina ja standardipoikkeamina tai mediaaneina ja kvartiilivälinä tarpeen mukaan. POCD:n riippumattomat ennustajat analysoitiin binäärisellä logistisella regressiolla ja tulokset ilmaistiin odds-suhteina (OR). LINC01844:n ennustekyky POCD:lle mitataan ROC:n avulla, ja tulokset määritettiin 95 %:n luottamusvälien ja AUC:n perusteella. Ensisijaisten ja toissijaisten tulosten seurannassa ei ole odotettavissa lainkaan tai minimaalisia tappioita. Kaikkien tulosten analysointiin käytetään hoitotarkoituksen mukaista populaatiota (ITT, kaikki satunnaisesti määritetyt tapaukset). Tukianalyysi perustuu täydelliseen analyysisarjaan (FAS, kaikki satunnaisesti määrätyt potilaat, jotka saavat lannerangan dekompressiota ja fuusiota). Kaikille tuloksille tehdään täydellinen tapausanalyysi. Jos kuitenkin yli 1 % puuttuvista tiedoista löytyy ensisijaiselle tulokselle, suoritetaan herkkyysanalyysi käyttämällä useita imputaatioita ja estimoivia yhtälömenetelmiä.

Tietokannan puhdistaminen ja lukitseminen Tämän tutkimuksen aikana käytetyt ja/tai analysoidut aineistot toimitetaan vastaavan tekijän saataville kohtuullisesta pyynnöstä. Tietokanta lukitaan heti, kun kaikki tiedot on syötetty ja kaikki ristiriitaiset tai puuttuvat tiedot on korjattu, tai vaihtoehtoisesti, jos kaikki on käytetty ja katsomme, että jäljellä olevia ongelmia ei voida korjata. Tässä vaiheessa tiedot tarkistetaan ennen tietokannan lukitsemista. Tutkimustietokanta lukitaan ja viedään tilastollista analyysiä varten. Tässä vaiheessa tietokannan käyttöoikeudet poistetaan kaikilta tutkijoilta ja tietokanta arkistoidaan.