LINC01844 jako biomarker diagnostyczny POCD u pacjentów w podeszłym wieku

Projekt badania To jednoośrodkowe badanie obserwacyjne zostanie przeprowadzone podczas planowej dekompresji i zespolenia odcinka lędźwiowego w szpitalu Zhongshan Fudan University w Szanghaju w Chinach. Od wszystkich uczestników uzyskuje się pisemną świadomą zgodę. Do 21 lutego 2024 r. zatwierdzono badanie w szpitalu Zhongshan na Uniwersytecie Fudan (Chiny) pod numerem B2024-063R.

Znieczulenie Po wejściu pacjenta na salę operacyjną monitoruje się parametry życiowe, podaje się mu inhalację tlenu (> 8 l/min). Znieczulenie ogólne indukuje się za pomocą sufentanylu (0,2 ug/kg), propofolu [wlew kontrolowany docelowo (TCI) w stężeniu w osoczu 3 ug/ml), remifentanylu (TCI w stężeniu w osoczu 3 ng/ml) i rokuronium (0,6 mg/kg). . Podczas operacji stosuje się leki odurzające i wazoaktywne, w zależności od głębokości znieczulenia, ciśnienia krwi i parametrów oddechowych. Po operacji podłączana jest kontrolowana przez pacjenta dożylna pompa przeciwbólowa (PCIA) (sufentanyl 250 µg i ramosetron 0,6 mg).

Wykrywanie i przygotowanie LINC01844 Całkowity RNA ekstrahuje się z próbek krwi obwodowej przy użyciu TRIzol LS (Invitrogen, USA) zgodnie z instrukcjami producenta. W skrócie, po homogenizacji próbki krwi (250 µl) za pomocą regenta TRIzol LS (750 µl), do dalszej analizy dodaje się chloroform (200 µl). Próbkę wiruje się przy 12 000 x g, 4˚C przez 15 minut, następnie fazę wodną zawierającą RNA przenosi się do nowej probówki i dodaje się izopropanol (0,5 ml) w celu wytrącenia RNA. Osad RNA przemywa się 75% etanolem (1 ml) i na koniec ponownie zawiesza w wodzie wolnej od RNazy (10–20 µl). Jakość RNA określa się za pomocą NanoDrop2000. Stosunek gęstości optycznej wynoszący 260/280 > 1,80 wskazuje, że próbkę można wykorzystać w kolejnych eksperymentach. Następnie do syntezy cDNA wykorzystujemy odwrotną transkryptazę M-MLV (Promega, USA). Do końcowej analizy wykorzystano ilościową reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym (qRT-PCR) zgodnie z instrukcjami z zestawu SYBR Green PCR Master Mix Kit (Qiagen). Parametry PCR: 95˚C przez 10 min; 45 cykli w temperaturze 95˚C przez 15 s, 60˚C przez 30 s i 72˚C przez 30 s. GAPDH wybrano jako gen referencyjny, krotność zmiany (2-44Ct) wykorzystano do analizy względnych poziomów LINC01844.

Ocena testów neuropsychologicznych i ocena POCD Na dzień przed operacją pacjenci zostaną poddani ocenie pod kątem depresji za pomocą Kwestionariusza Zdrowia Pacjenta-9 (PHQ-9), natomiast pacjenci z wcześniejszymi poważnymi zaburzeniami funkcji poznawczych są wykluczani za pomocą mini badania stanu psychicznego (MMSE) (MMSE) wynik < 24). Na 1 dzień przed operacją oraz 1, 3 i 5 dnia po operacji zostanie przeprowadzony zestaw testów neuropsychologicznych, w celu oceny funkcji poznawczych pacjentów, w tym powtórny test uczenia się słuchowego Hopkinsa (HALT-R), krótki test pamięci wzrokowo-przestrzennej (BVMT) -R), test tworzenia śladów (TMT), test rozpiętości cyfr (DST), test podstawienia symboli cyfrowych (DSST) oraz test przypominania czasowników i wykresów. Wszystkie te badania są wykonywane w cichym otoczeniu przez przeszkolonego lekarza, który nie jest świadomy zabiegu chirurgicznego i próbki krwi. Jednocześnie 20 zdrowych ochotników bez operacji zostanie zatrudnionych jako grupa kontrolna, z dobranym wiekiem, płcią i rokiem wykształcenia. W grupie kontrolnej zostanie wykonane badanie neuropsychologiczne w celu ustalenia prawidłowej wartości referencyjnej funkcji poznawczych, w tym samym przedziale. Wyjściowe wyniki i efekty uczenia się odjęto od każdego wyniku testu neuropsychologicznego zgodnie z międzynarodowymi wytycznymi dotyczącymi badania pooperacyjnych zaburzeń poznawczych i podzielono przez odchylenie standardowe wyjściowych wyników w grupie kontrolnej. Wynik oznaczono jako wynik Z. Gdy co najmniej dwie skale Z są większe niż 1,961, rozważano POCD.

Wizyty studyjne i gromadzenie danych Pacjenci będą odwiedzani przed operacją oraz w dniu pooperacyjnym (POD) w 1., 3. i 5. dniu. Pacjenci zostaną poddani badaniu przesiewowemu zgodnie z kryteriami włączenia. Wszyscy pacjenci spełniający kryteria włączenia zostaną zarejestrowani w pliku dziennika badań przesiewowych. Badacze wyjaśnią przebieg i cel badania oraz przekażą pisemne informacje na temat badania. Pacjenci chcący wziąć udział w badaniu będą zobowiązani do przedstawienia pisemnej świadomej zgody.

Dane będą rejestrowane zarówno w papierowym formularzu raportu przypadku (CRF), jak i w elektronicznym formularzu raportu przypadku (eCRF) w elektronicznym systemie gromadzenia danych (EDC) przez personel badawczy lub kliniczny pod nadzorem badaczy z ośrodka badawczego. W przypadku niespójności, jako złoty standard zostanie zastosowany papierowy CRF.

Postępowanie z danymi Dwóch członków zespołu badawczego będzie monitorować badanie. Przeprowadzane będzie zdalne monitorowanie w celu wczesnego sygnalizowania nieprawidłowych wzorców, problemów ze spójnością, wiarygodnością i innych anomalii. Dane pacjenta będą zbierane w formie pseudonimowej z wykorzystaniem numeru pacjenta (identyfikacyjnego) składającego się z czterech trzycyfrowych cyfr. Dane z badania będą gromadzone i zarządzane przy użyciu narzędzi do badania EDC inicjowanego przez badacza (IIT-EDC). IIT-EDC to chroniona hasłem aplikacja intranetowa przeznaczona do obsługi gromadzenia danych do badań naukowych (strona internetowa: http://10.15.7.137). Pełny dostęp do końcowego zbioru danych z badania zostanie przyznany wybranym badaczom. Wszystkie oryginalne zapisy, w tym formularze zgody, raporty dotyczące podejrzeń niespodziewanych poważnych zdarzeń niepożądanych (SAE) i odpowiednia korespondencja, będą archiwizowane w ośrodkach badawczych przez 10 lat. Czysty plik bazy danych wersji próbnej zostanie zanonimizowany i utrzymywany przez 10 lat.

Bezpieczeństwo Wszystkie zdarzenia niepożądane (AE), które zostaną uznane za związane z badaniem, zostaną zgłoszone do ośrodka koordynującego badanie. Zgodnie z lokalnymi przepisami i regulacjami uczestnicy mogą otrzymać bezpłatne leczenie zapewniane przez naszą jednostkę lub otrzymać odszkodowanie, jeśli wystąpią jakiekolwiek obrażenia związane z tym badaniem, a wszystkie podejrzane nieoczekiwane SAE zostaną zgłoszone Komisji ds. Monitorowania Danych i Bezpieczeństwa (DMSC). DMSC jest niezależny od badaczy badania i będzie przeprowadzał bieżący przegląd parametrów bezpieczeństwa i ogólnego przebiegu badania. W skład DMSC wchodzi dwóch niezależnych ekspertów zajmujących się badaniami klinicznymi na dużą skalę oraz jeden niezależny statystyk. DMSC będzie odpowiedzialne za ochronę interesów uczestników badania, ocenę bezpieczeństwa i skuteczności interwencji podczas badania oraz monitorowanie ogólnego przebiegu badania klinicznego. Aby zwiększyć integralność badania, DMSC może również formułować zalecenia dotyczące rekrutacji/zatrzymania uczestników, zarządzania nimi, poprawy przestrzegania schematów określonych w protokole i zatrzymywania uczestników, a także procedur zarządzania danymi i kontroli jakości.

Analiza statystyczna Wielkość próbki - Aby zweryfikować wartość przewidywaną względnego poziomu LINC01844 we krwi dla POCD osób starszych po operacji, pole pod krzywą (AUC) mierzone za pomocą krzywej charakterystyki operacyjnej odbiornika (ROC) musi być większe niż 0,5. Na podstawie wyników wstępnego badania AUC wyniosło 0,73, a częstość występowania POCD 33,3%. Wielkość próby obliczono metodą PASS (wersja 11.0). Aby uzyskać moc 80% i poziom istotności 5% względem jednostronnej hipotezy alternatywnej, potrzeba 57 uczestników. Oczekując, że uczestnicy porzucą badanie na poziomie 10%, wymagana jest wielkość próby wynosząca 63 osoby.

Analiza - do oceny rozkładu normalnego danych ciągłych zostanie wykorzystany test Kołmogorowa-Smirnowa. Charakterystyka wyjściowa zostanie wyrażona, odpowiednio, jako liczebność i wartości procentowe, średnie i odchylenia standardowe lub mediany i rozstępy międzykwartylowe. Niezależne predyktory POCD analizowano za pomocą binarnej regresji logistycznej, a wyniki wyrażono jako iloraz szans (OR). Skuteczność przewidywania LINC01844 dla POCD będzie mierzona za pomocą ROC, a wyniki określono na podstawie 95% przedziałów ufności i AUC. Przewiduje się brak lub minimalne straty w obserwacji wyników pierwotnych i wtórnych. Do analizy wszystkich wyników wykorzystuje się populację, która ma zamiar leczyć (ITT, wszystkie losowo przydzielone przypadki). Analiza pomocnicza opiera się na pełnym zestawie analiz (FAS, wszyscy losowo przydzieleni pacjenci, którzy otrzymali dekompresję i zespolenie odcinka lędźwiowego). Dla wszystkich wyników zostanie przeprowadzona analiza całego przypadku. Jeśli jednak dla głównego wyniku zostanie znalezionych więcej niż 1% brakujących danych, zostanie przeprowadzona analiza wrażliwości z wykorzystaniem wielokrotnych imputacji i metod równań szacowania.

Czyszczenie i blokowanie bazy danych Zbiory danych wykorzystane i/lub przeanalizowane podczas bieżącego badania zostaną udostępnione na uzasadnione żądanie odpowiedniego autora. Baza danych zostanie zablokowana natychmiast po wprowadzeniu wszystkich danych i usunięciu wszystkich rozbieżności lub brakujących danych, lub alternatywnie, jeśli dołożono wszelkich starań i uznamy, że pozostałych problemów nie da się naprawić. Na tym etapie dane zostaną sprawdzone przed zablokowaniem bazy danych. Baza danych badania zostanie następnie zablokowana i wyeksportowana do analizy statystycznej. Na tym etapie wszystkim badaczom zostaną odebrane uprawnienia dostępu do bazy danych, a baza danych zostanie zarchiwizowana.