LINC01844 como biomarcador de diagnóstico de POCD en pacientes de edad avanzada

Diseño del ensayo Este ensayo observacional de un solo centro se llevará a cabo durante la descompresión y fusión lumbar electiva en el Hospital Zhongshan de la Universidad Fudan, Shanghai, China. Se obtiene el consentimiento informado por escrito de todos los participantes. El 21 de febrero de 2024, el ensayo fue aprobado para el Hospital Zhongshan de la Universidad de Fudan (China) con el número de aprobación B2024-063R.

Anestesia Después de que los pacientes ingresan al quirófano, se monitorean los signos vitales y se les administra oxígeno por inhalación (> 8 l/min). La anestesia general se induce con sufentanilo (0,2 ug/kg), propofol [infusión controlada objetivo (TCI) a una concentración plasmática de 3 ug/ml), remifentanilo (TCI a una concentración plasmática de 3 ng/ml) y rocuronio (0,6 mg/kg). . Los narcóticos y vasoactivos se utilizan durante la operación de acuerdo con la profundidad de la anestesia, la presión arterial y los parámetros respiratorios. Después de la cirugía se conecta una bomba de analgesia intravenosa (PCIA) controlada por el paciente (sufentanilo 250 ug y ramosetrón 0,6 mg).

Detección y preparación de LINC01844 El ARN total se extrae de muestras de sangre periférica utilizando TRIzol LS (Invitrogen, EE. UU.) según las instrucciones del fabricante. Brevemente, después de homogeneizar la muestra de sangre (250 μL) con el regente TRIzol LS (750 μL), se agrega cloroformo (200 μL) para su posterior análisis. La muestra se centrifuga a 12.000 × g, 4ºC durante 15 minutos, luego la fase acuosa que contiene el ARN se transfiere a un tubo nuevo y se añade isopropanol (0,5 ml) para la precipitación del ARN. El sedimento de ARN se lava con etanol al 75 % (1 ml) y finalmente se resuspende en agua libre de RNasa (10-20 µL); la calidad del ARN se determina con NanoDrop2000. Una relación de densidad óptica de 260/280 >1,80 es una indicación de que la muestra podría usarse en experimentos posteriores. A continuación, utilizamos la transcriptasa inversa M-MLV (Promega, EE. UU.) para la síntesis de ADNc. Se utilizó una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) para el análisis final de acuerdo con las instrucciones del kit SYBR Green PCR Master Mix (Qiagen). Los parámetros de la PCR: 95˚C durante 10 min; 45 ciclos a 95˚C durante 15 s, 60˚C durante 30s y 72˚C 30s. Se elige GAPDH como gen de referencia, se utiliza el cambio de veces (2 -44Ct) para analizar los niveles relativos de LINC01844.

Evaluación de pruebas neuropsicológicas y evaluación POCD Un día antes de la cirugía, los pacientes serán evaluados para detectar depresión utilizando el Cuestionario de salud del paciente-9 (PHQ-9), mientras que los pacientes con deterioro cognitivo severo previo se excluyen mediante el mini examen del estado mental (MMSE) (MMSE puntuación < 24). Se realizará una batería de pruebas neuropsicológicas 1 día antes de la operación y 1.º, 3.º y 5.º día después de la operación para evaluar la función cognitiva de los pacientes, incluida la prueba de aprendizaje auditivo de Hopkins revisada (HALT-R), la prueba breve de memoria visuoespacial revisada (BVMT -R), prueba de creación de rastros (TMT), prueba de intervalo de dígitos (DST), prueba de sustitución de símbolos digitales (DSST) y prueba de recuperación de verbos y gráficos. Todas estas pruebas las realiza en un ambiente tranquilo un médico capacitado que no conoce el procedimiento quirúrgico ni la muestra de sangre. Al mismo tiempo, se reclutará a 20 voluntarios sanos sin cirugía como grupo de control, con edad, sexo y años de educación coincidentes. La prueba neuropsicológica se realizará en el grupo de control para determinar el valor de referencia normal de la función cognitiva, con el mismo intervalo. Las puntuaciones iniciales y los resultados del aprendizaje se restaron de cada puntuación de la prueba neuropsicológica de acuerdo con las directrices internacionales para el estudio del deterioro cognitivo posoperatorio y se dividieron por la desviación estándar de las puntuaciones iniciales en el grupo de control. El resultado fue designado puntuación Z. Cuando al menos dos escalas Z son mayores a 1,961, se consideró POCD.

Visitas de estudio y recopilación de datos Los pacientes serán visitados antes de la operación y los días postoperatorios (POD) 1, 3 y 5. Los pacientes serán evaluados según los criterios de inclusión. Todos los pacientes que cumplan con los criterios de inclusión se registrarán en un archivo de registro de detección. Los investigadores explicarán el curso y el propósito del estudio y proporcionarán información escrita sobre el estudio. Los pacientes que deseen participar en el estudio deberán proporcionar su consentimiento informado por escrito.

Los datos se registrarán tanto en el formulario de informe de caso en papel (CRF) como en el formulario de informe de caso electrónico (eCRF) en el sistema de captura electrónica de datos (EDC) por parte del personal clínico o del ensayo bajo la supervisión de los investigadores del sitio del ensayo. En caso de inconsistencia, se utilizará el CRF en papel como estándar de oro.

Manejo de datos Dos miembros del equipo de investigación realizarán el seguimiento del estudio. Se realizará un monitoreo remoto para señalar patrones aberrantes tempranos, problemas de coherencia, credibilidad y otras anomalías. Los datos del paciente se recopilarán de forma seudónima utilizando un número (identificación) del paciente compuesto por cuatro y tres dígitos. Los datos del estudio se recopilarán y gestionarán utilizando herramientas EDC (IIT-EDC) de ensayo iniciadas por un investigador. IIT-EDC es una aplicación de intranet protegida con contraseña diseñada para respaldar el registro de datos para estudios de investigación (sitio web: http://10.15.7.137). Se otorgará acceso completo al conjunto de datos final del ensayo a los investigadores seleccionados. Todos los registros originales, incluidos los formularios de consentimiento, los informes de sospechas de eventos adversos graves inesperados (SAE) y la correspondencia relevante, se archivarán en los sitios del ensayo durante 10 años. El archivo limpio de la base de datos de prueba se anonimizará y se mantendrá durante 10 años.

Seguridad Todos los eventos adversos (EA) que se crean que están relacionados con el ensayo se informarán al centro coordinador del ensayo. De acuerdo con las leyes y regulaciones locales, los participantes pueden recibir tratamiento gratuito proporcionado por nuestra unidad o ser compensados ​​si ocurre alguna lesión relacionada con este estudio, y todos los AAG inesperados sospechosos se informarán al comité de seguridad y monitoreo de datos (DMSC). El DMSC es independiente de los investigadores del ensayo y realizará una revisión continua de los parámetros de seguridad y la realización general del estudio. El DMSC está compuesto por dos expertos independientes en ensayos clínicos a gran escala y un estadístico independiente. El DMSC será responsable de salvaguardar los intereses de los participantes del ensayo, evaluar la seguridad y eficacia de las intervenciones durante el ensayo y monitorear la realización general del ensayo clínico. Para mejorar la integridad del ensayo, el DMSC también puede formular recomendaciones relacionadas con el reclutamiento/retención de participantes, su gestión, la mejora del cumplimiento de los regímenes especificados en el protocolo y la retención de participantes, y procedimientos para la gestión de datos y el control de calidad.

Análisis estadístico Tamaño de la muestra: para verificar el valor de predicción del nivel relativo de LINC01844 en sangre para POCD de personas mayores después de la cirugía, el área bajo la curva (AUC) medida mediante la curva característica operativa del receptor (ROC) debe ser superior a 0,5. Según los resultados del ensayo preliminar, el AUC fue de 0,73 y la incidencia de POCD fue del 33,3 %. El tamaño de la muestra se calculó mediante PASS (versión 11.0). Para un poder del 80% y un nivel de significancia del 5% frente a la hipótesis alternativa unilateral, se requieren 57 participantes. Si se espera un abandono del 10% de los participantes, se requiere un tamaño de muestra de 63.

Análisis: se utilizará la prueba de Kolmogorov-Smirnov para evaluar la distribución normal de datos continuos. Las características iniciales se expresarán como recuentos y porcentajes, medias y desviaciones estándar, o medianas y rangos intercuartílicos, según corresponda. Los predictores independientes de POCD se analizaron mediante regresión logística binaria y los resultados se expresaron como odds ratios (OR). El rendimiento de predicción de LINC01844 para POCD se medirá mediante ROC y los resultados se determinarán mediante los intervalos de confianza del 95 % y el AUC. Se prevén pérdidas mínimas o nulas durante el seguimiento de los resultados primarios y secundarios. Para todos los análisis de resultados se utiliza la población por intención de tratar (ITT, todos los casos asignados al azar). El análisis de apoyo se basa en un conjunto de análisis completo (FAS, todos los pacientes asignados al azar que reciben descompresión y fusión lumbar). Se realizará un análisis de caso completo para todos los resultados. Sin embargo, si se encuentra más del 1% de los datos faltantes para el resultado primario, se llevará a cabo un análisis de sensibilidad utilizando imputaciones múltiples y métodos de ecuaciones de estimación.

Limpieza y bloqueo de la base de datos Los conjuntos de datos utilizados y/o analizados durante el estudio actual estarán disponibles a través del autor correspondiente previa solicitud razonable. La base de datos se bloqueará inmediatamente después de que se ingresen todos los datos y se resuelvan todos los datos discrepantes o faltantes o, alternativamente, si se han empleado todos los esfuerzos y consideramos que los problemas restantes no se pueden solucionar. En este paso, los datos se revisarán antes de bloquear la base de datos. Luego, la base de datos del estudio se bloqueará y exportará para análisis estadístico. En esta etapa, se eliminará el permiso de acceso a la base de datos para todos los investigadores y se archivará la base de datos.