LINC01844 как диагностический биомаркер ПОКД у пожилых пациентов

Схема исследования Это одноцентровое обсервационное исследование будет проводиться во время плановой поясничной декомпрессии и спондилодеза в больнице Чжуншань при университете Фудань, Шанхай, Китай. От всех участников получено письменное информированное согласие. К 21 февраля 2024 г. исследование было одобрено для больницы Чжуншань Университета Фудань (Китай) с номером одобрения B2024-063R.

Анестезия. После поступления пациентов в операционную контролируют жизненные показатели, проводят ингаляцию кислорода (> 8 л/мин). Общую анестезию вызывают суфентанилом (0,2 мкг/кг), пропофолом (целевая контролируемая инфузия (TCI) при концентрации в плазме 3 мкг/мл), ремифентанилом (TCI при концентрации в плазме 3 нг/мл) и рокуронием (0,6 мг/кг). . Наркотические и вазоактивные препараты во время операции применяют в зависимости от глубины наркоза, артериального давления и параметров дыхания. После операции подключают помпу для внутривенной анальгезии под контролем пациента (PCIA) (суфентанил 250 мкг и рамосетрон 0,6 мг).

Детекция и приготовление LINC01844 Тотальную РНК экстрагируют из образцов периферической крови с помощью TRIzol LS (Invitrogen, США) согласно инструкции производителя. Вкратце, после гомогенизации образца крови (250 мкл) с реагентом TRIzol LS (750 мкл) для дальнейшего анализа добавляют хлороформ (200 мкл). Образец центрифугируют при 12000×g, 4˚C в течение 15 мин, затем водную фазу, содержащую РНК, переносят в новую пробирку и добавляют изопропанол (0,5 мл) для осаждения РНК. Осадок РНК промывают 75% этанолом (1 мл) и, наконец, ресуспендируют в воде, свободной от РНКазы (10-20 мкл), качество РНК определяют с помощью NanoDrop2000. Отношение оптической плотности 260/280 >1,80 указывает на то, что образец можно использовать в последующих экспериментах. Далее для синтеза кДНК мы используем обратную транскриптазу M-MLV (Promega, США). Для окончательного анализа использовали количественную полимеразную цепную реакцию в реальном времени (qRT-PCR) в соответствии с инструкциями из набора SYBR Green PCR Master Mix Kit (Qiagen). Параметры ПЦР: 95°С, 10 мин; 45 циклов при 95°C в течение 15 с, 60°C в течение 30 с и 72°C в течение 30 с. GAPDH выбран в качестве эталонного гена, изменение кратности (2-44Ct) используется для анализа относительных уровней LINC01844.

Оценка нейропсихологического теста и оценка ПОКД. За день до операции пациенты будут оцениваться на наличие депрессии с использованием Анкеты здоровья пациента-9 (PHQ-9), тогда как пациенты с предшествующими тяжелыми когнитивными нарушениями исключаются с помощью мини-обследования психического состояния (MMSE) (MMSE). оценка <24). За 1 день до операции и на 1-й, 3-й и 5-й день после операции будет выполнен ряд нейропсихологических тестов для оценки когнитивных функций пациентов, включая пересмотренный тест слухового обучения Хопкинса (HALT-R), пересмотренный краткий тест зрительно-пространственной памяти (BVMT). -R), тест на создание следов (TMT), тест на диапазон цифр (DST), тест на замену цифровых символов (DSST) и тест на запоминание глаголов и графиков. Все эти тесты проводятся в тихой обстановке обученным врачом, который не знает хирургической процедуры и образца крови. В то же время в качестве контрольной группы будут набраны 20 здоровых добровольцев, не прошедших хирургическое вмешательство, соответствующего возраста, пола и года образования. В контрольной группе будет проведен нейропсихологический тест для определения нормального эталонного значения когнитивной функции с тем же интервалом. Исходные баллы и результаты обучения вычитались из каждого балла нейропсихологического теста в соответствии с международными рекомендациями по изучению послеоперационных когнитивных нарушений и делились на стандартное отклонение исходных баллов в контрольной группе. Результату был присвоен балл Z. Если хотя бы две шкалы Z превышают 1,961, считали ПОКД.

Учебные визиты и сбор данных. Пациентов будут посещать в предоперационный и послеоперационный день (POD) 1, 3 и 5. Пациенты будут проверены в соответствии с критериями включения. Все пациенты, соответствующие критериям включения, будут зарегистрированы в файле журнала скрининга. Исследователи объяснят ход и цель исследования и предоставят письменную информацию об исследовании. Пациенты, желающие принять участие в исследовании, должны будут предоставить письменное информированное согласие.

Данные будут регистрироваться как в бумажной форме отчета о случае (CRF), так и в электронной форме отчета о случае (eCRF) в системе электронного сбора данных (EDC) персоналом исследования или клиническим персоналом под наблюдением исследователей исследовательского центра. В случае несоответствия бумажный CRF будет использоваться в качестве золотого стандарта.

Обработка данных Два члена исследовательской группы будут осуществлять мониторинг исследования. Дистанционный мониторинг будет осуществляться для выявления ранних отклонений от нормы, проблем с согласованностью, достоверностью и других аномалий. Данные о пациентах будут собираться в псевдонимной форме с использованием идентификационного номера пациента, состоящего из четырех трех цифр. Данные исследования будут собираться и обрабатываться с использованием инструментов EDC (IIT-EDC), инициированных исследователем. IIT-EDC — это защищенное паролем приложение в интранете, предназначенное для поддержки записи данных для научных исследований (веб-сайт: http://10.15.7.137). Полный доступ к окончательному набору данных исследования будет предоставлен избранным исследователям. Все исходные записи, включая формы согласия, отчеты о предполагаемых неожиданных серьезных нежелательных явлениях (СНЯ) и соответствующая переписка, будут архивироваться в местах проведения испытаний в течение 10 лет. Файл базы данных чистого пробного исследования будет анонимным и будет храниться в течение 10 лет.

Безопасность Обо всех нежелательных явлениях (НЯ), которые предположительно связаны с исследованием, будет сообщено в координирующий центр исследования. В соответствии с местными законами и правилами участники могут получить бесплатное лечение, предоставляемое нашим отделением, или получить компенсацию в случае возникновения какой-либо травмы, связанной с этим исследованием, а обо всех подозреваемых неожиданных СНЯ будет сообщено в комитет по мониторингу данных и безопасности (DMSC). DMSC независим от исследователей и будет проводить постоянный анализ параметров безопасности и общего проведения исследования. В состав DMSC входят два независимых эксперта по крупномасштабным клиническим исследованиям и один независимый статистик. DMSC будет отвечать за защиту интересов участников исследования, оценку безопасности и эффективности вмешательств во время исследования, а также мониторинг общего проведения клинического исследования. Чтобы повысить целостность исследования, DMSC может также сформулировать рекомендации, касающиеся набора/удержания участников, их управления, улучшения соблюдения установленных протоколом схем и удержания участников, а также процедур управления данными и контроля качества.

Статистический анализ Размер выборки. Чтобы проверить прогнозируемую ценность относительного уровня LINC01844 в крови при ПОКД у пожилых людей после операции, площадь под кривой (AUC), измеренная с помощью кривой рабочей характеристики приемника (ROC), должна быть больше 0,5. По результатам предварительного исследования AUC составила 0,73, а частота ПОКД — 33,3%. Размер выборки рассчитывался с помощью PASS (версия 11.0). Для мощности 80% и уровня значимости 5% против односторонней альтернативной гипотезы требуется 57 участников. Учитывая, что 10% участников откажутся, размер выборки составит 63 человека.

Анализ. Критерий Колмогорова-Смирнова будет использоваться для оценки нормального распределения непрерывных данных. Базовые характеристики будут выражаться в виде количества и процентов, средних и стандартных отклонений или медиан и межквартильных размахов, в зависимости от обстоятельств. Независимые предикторы ПОКД были проанализированы с помощью бинарной логистической регрессии, а результаты были выражены в виде отношения шансов (ОШ). Эффективность прогнозирования LINC01844 для POCD будет измеряться с использованием ROC, а результаты определялись с помощью 95% доверительных интервалов и AUC. Не ожидается никаких или минимальных потерь для последующего наблюдения по первичным и вторичным результатам. Популяция, получающая лечение (ITT, все случайные случаи), используется для анализа всех исходов. Поддерживающий анализ основан на полной выборке анализа (FAS, все случайно выбранные пациенты, получившие поясничную декомпрессию и спондилодез). Полный анализ случая будет выполнен для всех исходов. Однако если для основного результата обнаружено более 1% недостающих данных, будет проведен анализ чувствительности с использованием множественных вменений и методов оценочных уравнений.

Очистка и блокировка базы данных. Наборы данных, использованные и/или проанализированные в ходе текущего исследования, будут предоставлены соответствующим автором по обоснованному запросу. База данных будет заблокирована сразу после того, как все данные будут введены и все несоответствующие или недостающие данные будут устранены, или, альтернативно, если были приложены все усилия и мы считаем, что оставшиеся проблемы не могут быть устранены. На этом этапе данные будут проверены перед блокировкой базы данных. Затем база данных исследования будет заблокирована и экспортирована для статистического анализа. На этом этапе всем следователям будет снято разрешение на доступ к базе данных, а база данных будет заархивирована.