LINC01844 som en diagnostisk biomarkør for POCD hos eldre pasienter

Prøvedesign Denne observasjonsstudien med ett senter vil bli utført under elektiv lumbal dekompresjon og fusjon ved Zhongshan Hospital Fudan University, Shanghai, Kina. Skriftlig informert samtykke innhentes fra alle deltakerne. Innen 21. februar 2024 ble forsøket godkjent for Zhongshan Hospital, Fudan University (Kina) med godkjenningsnummeret B2024-063R.

Anestesi Etter at pasientene kom inn på operasjonsstuen, overvåkes vitale tegn, pasientene får oksygeninnånding (> 8L/min). Generell anestesi induseres med sufentanil (0,2 ug/kg), propofol [målkontrollert infusjon (TCI) ved plasmakonsentrasjon på 3 ug/ml), remifentanil (TCI ved plasmakonsentrasjon på 3 ng/ml) og rokuronium (0,6 mg/kg) . De narkotiske og vasoaktive medikamentene brukes under operasjonen i henhold til anestesidybde, blodtrykk og respirasjonsparametere. En pasientkontrollert intravenøs analgesi (PCIA) pumpe (sufentanil 250 ug og ramosetron 0,6 mg) kobles til etter operasjonen.

Påvisning og klargjøring av LINC01844 Total RNA ekstraheres fra perifere blodprøver ved bruk av TRIzol LS (Invitrogen, USA) i henhold til instruksjonene fra produsenten. Kort fortalt, etter homogenisering av blodprøven (250 μL) med TRIzol LS-regent (750 μL), tilsettes kloroform (200 μL) for videre analyse. Prøven sentrifugeres ved 12 000 × g, 4˚C i 15 minutter, deretter overføres den vandige fasen som inneholder RNA til et nytt rør og isopropanol (0,5 ml) tilsettes for RNA-utfelling. RNA-pelleten vaskes med 75 % etanol (1 mL), og resuspenderes til slutt i RNase-fritt vann (10-20 μL), RNA-kvaliteten bestemmes med NanoDrop2000. Et optisk tetthetsforhold på 260/280 >1,80 er en indikasjon på at prøven kan brukes i etterfølgende eksperimenter. Deretter bruker vi M-MLV revers transkriptase (Promega, USA) for syntese av cDNA. En sanntids kvantitativ polymerasekjedereaksjon (qRT-PCR) ble brukt for den endelige analysen i henhold til instruksjonene fra SYBR Green PCR Master Mix Kit (Qiagen). PCR-parametrene: 95˚C i 10 min; 45 sykluser ved 95˚C i 15 s, 60˚C i 30 s og 72˚C 30 s. GAPDH er valgt som et referansegen, fold endring (2 -44Ct ) brukes til å analysere LINC01844 relative nivåer.

Nevropsykologisk testevaluering og POCD-vurdering Én dag før operasjonen vil pasienter bli vurdert for depresjon ved hjelp av pasientens helsespørreskjema-9 (PHQ-9), mens pasienter med tidligere alvorlig kognitiv svikt ekskluderes ved bruk av mini mental tilstandsundersøkelse (MMSE) (MMSE) score <24). Et batteri med nevropsykologiske tester vil bli utført 1 dag før operasjon og 1., 3. og 5. dag etter operasjon for å evaluere pasientens kognitive funksjon, inkludert Hopkins auditive learning test-revidert (HALT-R), kort visuospatial memory test-revidert (BVMT) -R), trail making test (TMT), digit span test (DST), digital symbol substitution test (DSST) og verb og graf recall test. Alle disse testene utføres i rolige omgivelser av en utdannet lege som er blindet for det kirurgiske inngrepet og blodprøven. Samtidig skal 20 friske frivillige uten operasjon rekrutteres som kontrollgruppe, med alder, kjønn og utdanningsår matchet. Den nevropsykologiske testen vil bli utført i kontrollgruppe for å bestemme normal referanseverdi for kognitiv funksjon, med samme intervall. Baseline-skårer og læringsutbytte ble trukket fra hver nevropsykologisk testskåre i henhold til de internasjonale retningslinjene for studiet av postoperativ kognitiv svikt, og delt på standardavviket til baseline-skårene i kontrollgruppen. Resultatet ble betegnet som en Z-score. Når minst to Z-skalaer er større enn 1,961, ble POCD vurdert.

Studiebesøk og datainnsamling Pasienter vil bli besøkt preoperativt og postoperativt dag (POD) 1 og 3 og 5. Pasientene vil bli screenet i henhold til inklusjonskriteriene. Alle pasienter som oppfyller inklusjonskriteriene vil bli registrert i en screeningsloggfil. Undersøkerne vil forklare forløpet og formålet med studien og gi skriftlig informasjon om studien. Pasienter som er villige til å delta i studien vil bli pålagt å gi skriftlig informert samtykke.

Data vil bli registrert i både papirsaksrapportskjemaet (CRF) og det elektroniske saksrapportskjemaet (eCRF) på elektronisk datafangst (EDC)-system av forsøk eller klinisk personell under tilsyn av forsøksstedets etterforskere. Ved inkonsekvens vil papir-CRF bli brukt som gullstandard.

Håndtering av data To medlemmer av forskerteamet skal utføre studieovervåking. Fjernovervåking vil bli utført for å signalisere tidlige avvikende mønstre, problemer med konsistens, troverdighet og andre uregelmessigheter. Pasientdata vil bli samlet inn i pseudonym form ved bruk av et pasientnummer (identifikasjons-) bestående av fire tre sifre. Studiedata vil samles inn og administreres ved hjelp av et etterforsker-initiert EDC-verktøy (IIT-EDC). IIT-EDC er en passordbeskyttet, intranettbasert applikasjon designet for å støtte dataregistrering for forskningsstudier (nettsted: http://10.15.7.137). Full tilgang til det endelige prøvedatasettet vil bli gitt til utvalgte etterforskere. Alle originale poster, inkludert samtykkeskjemaer, rapporter om mistenkte uventede alvorlige bivirkninger (SAE) og relevante korrespondanser, vil bli arkivert på prøvestedene i 10 år. Den rene prøvedatabasefilen vil bli anonymisert og vedlikeholdt i 10 år.

Sikkerhet Alle uønskede hendelser (AE) som antas å være relatert til forsøket vil bli rapportert til prøvekoordineringssenteret. I henhold til lokale lover og forskrifter kan deltakerne motta gratis behandling gitt av vår enhet eller bli kompensert hvis det oppstår skade relatert til denne studien, og alle mistenkte uventede SAE-er vil bli rapportert til dataovervåkings- og sikkerhetskomiteen (DMSC). DMSC er uavhengig av forsøksutforskerne og vil foreta en løpende gjennomgang av sikkerhetsparametere og generell studiegjennomføring. DMSC består av to uavhengige eksperter i store kliniske studier og en uavhengig statistiker. DMSC vil være ansvarlig for å ivareta interessene til forsøksdeltakerne, vurdere sikkerheten og effekten av intervensjonene under forsøket, og overvåke den generelle gjennomføringen av den kliniske studien. For å forbedre integriteten til forsøket kan DMSC også formulere anbefalinger knyttet til rekruttering/behold av deltakere, deres ledelse, forbedring av overholdelse av protokollspesifiserte regimer og oppbevaring av deltakere, og prosedyrer for datahåndtering og kvalitetskontroll.

Statistisk analyse Prøvestørrelse -For å verifisere prediksjonsverdien av det relative nivået av LINC01844 i blod for POCD hos eldre mennesker etter operasjon, må arealet under kurven (AUC) målt via mottakeroperasjonskarakteristikken (ROC) være mer enn 0,5. Basert på resultater fra foreløpig studie var AUC 0,73 og forekomsten av POCD var 33,3 %. Prøvestørrelse ble beregnet med PASS (versjon 11.0). For makt på 80 % og signifikansnivå på 5 % mot den ensidige alternative hypotesen kreves det 57 deltakere. Forventer 10 % frafall av deltakere, en prøvestørrelse på 63 kreves.

Analyse - Kolmogorov-Smirnov-testen vil bli brukt til å vurdere normalfordelingen av kontinuerlige data. Grunnlinjekarakteristikkene vil bli uttrykt som tellinger og prosenter, gjennomsnitt og standardavvik, eller medianer og interkvartilområder, etter behov. De uavhengige prediktorene for POCD ble analysert ved binær logistisk regresjon, og resultatene ble uttrykt som oddsforhold (OR). Prediksjonsytelsen til LINC01844 for POCD vil bli målt ved hjelp av ROC, og resultatene ble bestemt av 95 % konfidensintervaller og AUC. Det forventes ingen eller minimale tap ved oppfølging av primær- og sekundærutfall. Intention-to-treat-populasjonen (ITT, alle tilfeldig tildelte tilfeller) brukes for alle utfallsanalyser. Den støttende analysen er basert på fullstendig analysesett (FAS, alle tilfeldig tildelte pasienter som får lumbal dekompresjon og fusjon). Komplett case-analyse vil bli utført for alle utfall. Imidlertid, hvis mer enn 1 % av manglende data blir funnet for det primære resultatet, vil en sensitivitetsanalyse ved bruk av flere imputasjoner og estimering av ligningsmetoder bli utført.

Rengjøring og låsing av databasen Datasettene som er brukt og/eller analysert under den nåværende studien vil bli gjort tilgjengelig fra den tilsvarende forfatteren etter rimelig forespørsel. Databasen vil bli låst umiddelbart etter at alle data er lagt inn og alle avvikende eller manglende data er løst, eller, alternativt, hvis alle tiltak har blitt brukt og vi vurderer at de resterende problemene ikke kan fikses. I dette trinnet vil dataene bli gjennomgått før databaselåsing. Studiedatabasen vil da bli låst og eksportert for statistisk analyse. På dette stadiet vil tillatelsen til tilgang til databasen bli fjernet for alle etterforskere, og databasen vil bli arkivert.