인간의 파바빈과 허니 클로렐라의 단백질 품질 (Giant Leaps)

목표는 건강한 사람의 꿀 클로렐라 및 파바콩 고기 유사체에서 추출한 단백질의 영양적 품질, 특히 단백질 및 아미노산 소화율과 질소 보유 측면에서 결정하는 것입니다. 회장 소화율은 비회장관을 사용하여 식후에 수집된 회장 소화물에서 결정됩니다. 단백질 공급원은 샘플의 식이성 질소와 아미노산을 추적하기 위해 15N으로 본질적으로 라벨링되어 있습니다.

윤리적 및 규제적 측면:

이 프로토콜은 윤리위원회의 승인을 받았으며 프랑스 의약품 보건청의 승인을 받았습니다. 개인 데이터 관리는 개인 데이터 보호에 관한 규정("2018년 6월 20일 규정 n° 2018-493")에 따릅니다.

식사:

식사는 40g의 허니 클로렐라가 함유된 음료 또는 80g의 육류 유사체가 함유된 혼합 식사로 구성되어 20g의 단백질을 제공합니다. 식사의 감각적 특성을 최적화하기 위해 감각 테스트가 실현됩니다.

자원봉사자:

16명의 피험자가 연구에 포함될 것입니다. 조사관은 일반적인 중퇴자 60%를 수용하기 위해 약 40명의 자원봉사자를 모집할 계획입니다.

실험 4일 전, 지원자들은 단백질 섭취량을 조절하기 위해 체중에 맞는 표준 식단을 따릅니다(1.3g 단백질/kg 체중).

자원봉사자들은 실험 전날 오전에 아비센 병원 인간영양연구센터에 도착할 예정이다. 그들은 24시간 동안 장을 통과할 수 있는 이중 루멘 장 튜브를 갖추고 있습니다. 내강 중 하나는 방사선 불투과성이며 장에 비흡수성 메이커를 관류시키는 역할을 합니다(느린 마커 방법). 다른 루멘은 관류 부위 아래 15cm에서 폐수의 지속적인 흡입에 사용됩니다. 폐수에서 비흡수성 표지를 측정하면 폐수 유속을 결정할 수 있습니다.

실험일 전날 저녁, 총 체수분 5g/kg에 도달할 때까지 99% 중수소를 3회 경구 섭취하여 장 내인성 단백질에 라벨을 붙입니다.

실험 당일 튜브의 위치를 ​​방사선 촬영으로 확인하여 회장 말단에서의 위치를 ​​확인합니다. 혈액 채취를 위해 팔뚝 정맥에 카테터를 삽입합니다. 비흡수성 마커인 PEG-4000(20g/l)의 관류는 1ml/min의 유속으로 시작됩니다. 장 흐름과 기초 회장 샘플은 30분 동안 수집됩니다. 기초 혈장 샘플을 채취합니다.

그런 다음 t=0에서 자원봉사자는 테스트 식사를 마십니다. t=8h까지 장내 내용물은 흡인을 통해 지속적으로 수집되고 30분마다 모아집니다. 4시간 동안은 30분마다, 그 이후에는 1시간마다 혈액 샘플을 채취합니다. 소변은 8시간 동안 2시간마다 수집됩니다.

측정:

일렐 다이제스타에서:

탁도법에 의한 PEG-4000, EA-IRMS에 의한 총 N 및 15N 농축, UPLC에 의한 아미노산 농도(110°C에서 24시간 동안 산 가수분해 HCl 6N 후), GC-c-IRMS에 의한 15N 아미노산 농축(정제 후) 양이온 교환 수지 및 유도체화), GC-c-IRMS를 통한 2H 아미노산 농축, 미생물 분석(DNA 서열분석), 펩타이드 분석(LC-MS).

플라즈마에서:

포도당, 요소(비색 방법), 인슐린(ELISA), 아미노산 농도(UPLC), 혈장 단백질, 요소 및 유리 아미노산의 15N 농축(EA-IRMS, 양이온 교환 수지에서 정제 및 유도체화 후).

소변에서:

요소(비색법) 및 15N 요소(EA-IRMS, 양이온 교환 수지에서 정제 및 유도체화 후).

주요 결과는 다음과 같습니다.

단백질 및 아미노산의 실제 회장 소화율(소화 손실), 식후 탈아미노화(대사 손실), 순 식후 단백질 이용률