Qualidade da proteína da fava e da clorela do mel em humanos (Giant Leaps)

O objetivo é determinar a qualidade nutricional da proteína do mel chlorella e do análogo da carne de fava em humanos saudáveis, especialmente em termos de digestibilidade de proteínas e aminoácidos, bem como retenção de nitrogênio. A digestibilidade ileal é determinada na digesta ileal coletada pós-prandialmente com um tubo naso-ileal. As fontes de proteína são intrinsecamente rotuladas em 15N para rastrear nitrogênio dietético e aminoácidos nas amostras.

Aspectos éticos e regulatórios:

O protocolo foi aprovado pelo Comitê de Ética e autorizado pela Agência Francesa de Medicamentos e Saúde. A gestão dos dados pessoais estará de acordo com o regulamento sobre proteção de dados pessoais (“regulamento n° 2018-493 de 20 de junho de 2018”).

Refeição:

A refeição consistirá em uma bebida contendo 40 g de chlorella de mel ou em uma refeição mista contendo 80 g de análogo de carne, para fornecer 20 g de proteína. Serão realizados testes sensoriais para optimizar as propriedades organolépticas da refeição.

Voluntários:

Dezesseis sujeitos serão incluídos no estudo. Os investigadores planejam recrutar cerca de 40 voluntários para acomodar os habituais 60% de desistências.

Quatro dias antes do experimento, os voluntários seguirão uma dieta padrão adaptada ao peso corporal para controlar a ingestão de proteínas (1,3 g de proteína/kg de peso corporal).

Os voluntários chegarão ao Centro de Pesquisa em Nutrição Humana do Hospital Avicenne na manhã anterior ao dia do experimento. Eles serão equipados com um tubo intestinal de duplo lúmen que poderá progredir pelo trato intestinal por 24h. Um dos lúmens é radiopaco e serve para perfundir um marcador não absorvível no intestino (método de marcador lento). O outro lúmen é dedicado à aspiração contínua dos efluentes, 15 cm abaixo do local de perfusão. A medição do marcador não absorvível nos efluentes permite a determinação da vazão do efluente.

Na noite anterior ao dia experimental, eles ingerirão 3 doses orais de água deuterada 99% para atingir 5g/kg de água corporal total, para marcar as proteínas endógenas intestinais.

No dia do experimento, a posição do tubo será verificada por radiografia para verificar sua localização no íleo terminal. Um cateter será inserido na veia do antebraço para coleta de sangue. A perfusão do marcador não absorvível, PEG-4000 (20g/l), começará com fluxo de 1ml/min. O fluxo intestinal e a amostra basal ileal serão coletados durante 30 min. Amostra de plasma basal será amostrada.

Então, em t=0, os voluntários beberão a refeição teste. Até t=8h, o conteúdo intestinal será coletado continuamente por aspiração e reunido a cada 30 minutos. O sangue será coletado a cada 30 minutos durante 4h e depois de hora em hora. A urina será coletada a cada 2 horas durante 8 horas.

Medidas:

No resumo do Ilel:

PEG-4000 pelo método turbidimétrico, enriquecimento total de N e 15N por EA-IRMS, concentrações de aminoácidos por UPLC (após hidrólise ácida HCl 6N a 110°C por 24h), enriquecimento de aminoácidos 15N por GC-c-IRMS (após purificação em resina de troca catiônica e derivatização), enriquecimento de aminoácidos 2H por GC-c-IRMS, análise de microbioma (sequenciamento de DNA), análise de peptídeos (LC-MS).

No plasma:

Glicose, uréia (métodos colorimétricos), insulina (ELISA), concentrações de aminoácidos (UPLC), enriquecimento de 15N em proteínas plasmáticas, uréia e aminoácidos livres (EA-IRMS, após purificação em resina de troca catiônica e derivatização).

Na urina:

Uréia (método colorimétrico) e uréia 15N (EA-IRMS, após purificação em resina de troca catiônica e derivatização).

Os principais resultados são:

Digestibilidade ileal real de proteínas e aminoácidos (perdas digestivas), Desaminação pós-prandial (perdas metabólicas), Utilização líquida de proteína pós-prandial