Jakość białka fasoli fava i miodowej chlorelli u ludzi (Giant Leaps)

Celem pracy było określenie wartości odżywczej białka pochodzącego z chlorelli miodowej i analogu mięsa bobiku u zdrowego człowieka, zwłaszcza pod kątem strawności białka i aminokwasów oraz retencji azotu. Strawność jelita krętego określa się w treści pokarmowej jelita krętego pobranej po posiłku przez sondę nosowo-jelitową. Źródła białka są samoistnie znakowane w 15N w celu śledzenia azotu w diecie i aminokwasów w próbkach.

Aspekty etyczne i regulacyjne:

Protokół został zatwierdzony przez Komisję Etyczną i autoryzowany przez Francuską Agencję Leków i Zdrowia. Zarządzanie danymi osobowymi będzie odbywać się zgodnie z rozporządzeniem o ochronie danych osobowych („rozporządzenie nr 2018-493 z dnia 20 czerwca 2018 r.”).

Posiłek:

Posiłek będzie się składał z napoju zawierającego 40 g chlorelli miodowej lub posiłku mieszanego zawierającego 80 g analogu mięsa, co zapewni 20 g białka. Przeprowadzane będą badania sensoryczne mające na celu optymalizację właściwości organoleptycznych posiłku.

Wolontariusze:

Badaniem objętych zostanie szesnaście przedmiotów. Badacze planują zatrudnić około 40 ochotników, aby uwzględnić typową liczbę 60% osób, które porzuciły naukę.

Cztery dni przed eksperymentem ochotnicy będą przestrzegać standardowej diety dostosowanej do ich masy ciała, aby kontrolować spożycie białka (1,3 g białka/kg masy ciała).

Ochotnicy przybędą do Centrum Badań nad Żywieniem Człowieka w szpitalu w Avicenne rano w dniu poprzedzającym dzień eksperymentu. Zostaną wyposażone w rurkę jelitową o podwójnym świetle, która będzie mogła przechodzić przez przewód pokarmowy przez 24 godziny. Jedno ze świateł jest nieprzezroczyste dla promieni rentgenowskich i służy do perfuzji niewchłanialnego czynnika w jelicie (metoda powolnego markera). Drugi prześwit przeznaczony jest do ciągłego zasysania ścieków, 15 cm poniżej miejsca perfuzji. Pomiar niewchłanialnego znacznika w ściekach pozwala na określenie natężenia przepływu ścieków.

Wieczorem poprzedzającym dzień eksperymentu przyjmą 3 doustne dawki 99% wody deuterowanej, aby osiągnąć całkowitą zawartość wody w organizmie wynoszącą 5 g/kg, w celu oznakowania endogennych białek jelitowych.

W dniu badania położenie rurki zostanie sprawdzone radiologicznie w celu sprawdzenia jej umiejscowienia w końcowym odcinku jelita krętego. Do żyły przedramienia zostanie wprowadzony cewnik w celu pobrania krwi. Perfuzja niewchłanialnego markera, PEG-4000 (20 g/l), rozpocznie się przy szybkości przepływu 1 ml/min. Wypływ jelitowy i próbkę podstawy jelita krętego będą pobierane w ciągu 30 minut. Pobrana zostanie podstawowa próbka osocza.

Następnie w t=0 ochotnicy wypiją posiłek testowy. Do t=8h treść jelit będzie w sposób ciągły zbierana poprzez aspirację i zbierana co 30 minut. Próbki krwi będą pobierane co 30 minut przez 4 godziny, a następnie co godzinę. Mocz będzie zbierany co 2 godziny przez 8 godzin.

Wymiary:

W jelitach trawiennych:

PEG-4000 metodą turbidymetryczną, wzbogacenie w całkowity N i 15N metodą EA-IRMS, stężenia aminokwasów metodą UPLC (po hydrolizie kwasowej HCl 6N w 110°C przez 24h), wzbogacenie w 15N aminokwasy metodą GC-c-IRMS (po oczyszczeniu na żywica kationowymienna i derywatyzacja), wzbogacanie aminokwasów 2H metodą GC-c-IRMS, analiza mikrobiomu (sekwencjonowanie DNA), analiza peptydów (LC-MS).

W plazmie:

Glukoza, mocznik (metody kolorymetryczne), insulina (ELISA), stężenia aminokwasów (UPLC), wzbogacenie 15N w białko osocza, mocznik i wolne aminokwasy (EA-IRMS, po oczyszczeniu na żywicy kationowymiennej i derywatyzacji).

W moczu:

Mocznik (metoda kolorymetryczna) i mocznik 15N (EA-IRMS, po oczyszczeniu na żywicy kationowymiennej i derywatyzacji).

Główne wyniki to:

Rzeczywista strawność białek i aminokwasów w jelicie krętym (straty trawienne), Deaminacja poposiłkowa (straty metaboliczne), Poposiłkowe wykorzystanie białka netto