Qualità proteica della fava e della clorella del miele negli esseri umani (Giant Leaps)

L'obiettivo è determinare la qualità nutrizionale delle proteine ​​derivanti dalla clorella del miele e dall'analogo della carne di fave negli esseri umani sani, soprattutto in termini di digeribilità delle proteine ​​e degli aminoacidi, nonché di ritenzione di azoto. La digeribilità ileale viene determinata nel contenuto gastrointestinale ileale raccolto postprandialmente con una sonda naso-ileale. Le fonti proteiche sono intrinsecamente etichettate in 15N per tenere traccia dell'azoto alimentare e degli aminoacidi nei campioni.

Aspetti etici e normativi:

Il protocollo è stato approvato dal Comitato Etico e autorizzato dall'Agenzia francese del farmaco e della salute. La gestione dei dati personali sarà conforme al regolamento sulla protezione dei dati personali ("regolamento n° 2018-493 du 20 juin 2018").

Pasto:

Il pasto consisterà in una bevanda contenente 40 g di miele clorella o in un pasto misto contenente 80 g di analogo della carne, per fornire 20 g di proteine. Verranno realizzati test sensoriali per ottimizzare le proprietà organolettiche del pasto.

Volontari:

Sedici soggetti saranno inclusi nello studio. Gli investigatori prevedono di reclutare circa 40 volontari per far fronte al consueto 60% di abbandoni.

Quattro giorni prima dell'esperimento, i volontari seguiranno una dieta standard adattata al loro peso corporeo per controllare l'apporto proteico (1,3 g di proteine/kg di peso corporeo).

I volontari arriveranno al Centro di ricerca sulla nutrizione umana dell'ospedale di Avicenne la mattina prima del giorno dell'esperimento. Saranno dotati di un tubo intestinale a doppio lume che potrà progredire attraverso il tratto intestinale per 24 ore. Uno dei lumi è radioopaco e serve a perfondere un produttore non assorbibile nell'intestino (metodo con marcatore lento). L'altro lume è dedicato all'aspirazione continua degli effluenti, 15 cm sotto il sito di perfusione. La misurazione del marcatore non assorbibile negli effluenti consente la determinazione della portata dell'effluente.

La sera prima del giorno sperimentale, ingeriranno 3 dosi orali di acqua deuterata al 99% per raggiungere 5 g/kg di acqua corporea totale, per marcare le proteine ​​endogene intestinali.

Il giorno dell'esperimento, la posizione del tubo verrà controllata mediante radiografia per verificarne la posizione nell'ileo terminale. Verrà inserito un catetere nella vena dell'avambraccio per il prelievo di sangue. La perfusione del marcatore non assorbibile, PEG-4000 (20 g/l), inizierà a una velocità di flusso di 1 ml/min. Il flusso intestinale e il campione ileale basale verranno raccolti durante 30 minuti. Verrà prelevato il campione di plasma basale.

Quindi, a t=0, i volontari berranno il pasto di prova. Fino a t=8h, il contenuto intestinale verrà raccolto continuamente mediante aspirazione e riunito ogni 30 minuti. Il sangue verrà prelevato ogni 30 minuti durante le 4 ore e successivamente ogni ora. L'urina verrà raccolta ogni 2 ore per 8 ore.

Misure:

Nell'ilel digesta:

PEG-4000 mediante metodo turbidimetrico, arricchimento di N totale e 15N mediante EA-IRMS, concentrazioni di aminoacidi mediante UPLC (dopo idrolisi acida HCl 6N a 110°C per 24 ore), arricchimento di aminoacidi 15N mediante GC-c-IRMS (dopo purificazione su resina a scambio cationico e derivatizzazione), arricchimento di aminoacidi 2H mediante GC-c-IRMS, analisi del microbioma (sequenziamento del DNA), analisi dei peptidi (LC-MS).

Nel plasma:

Glucosio, urea (metodi colorimetrici), insulina (ELISA), concentrazioni di aminoacidi (UPLC), arricchimento di 15N nelle proteine ​​plasmatiche, urea e aminoacidi liberi (EA-IRMS, dopo purificazione su resina a scambio cationico e derivatizzazione).

Nelle urine:

Urea (metodo colorimetrico) e urea 15N (EA-IRMS, dopo purificazione su resina a scambio cationico e derivatizzazione).

I principali risultati sono:

Digeribilità ileale reale delle proteine ​​e degli aminoacidi (perdite digestive), Deaminazione postprandiale (perdite metaboliche), Utilizzo netto delle proteine ​​postprandiali