Kvalita bílkovin fava fazolí a medové chlorelly u lidí (Giant Leaps)

Cílem je zjistit nutriční kvalitu bílkovin z medové chlorelly a náhražky masa faba fazolí u zdravých lidí, zejména z hlediska stravitelnosti bílkovin a aminokyselin a také retence dusíku. Ileální stravitelnost se stanovuje v ileální trávenině odebrané postprandiálně naso-ileální sondou. Zdroje bílkovin jsou vnitřně označeny 15N, aby bylo možné ve vzorcích sledovat dietní dusík a aminokyseliny.

Etické a regulační aspekty:

Protokol byl schválen Etické komisi a schválen Francouzskou agenturou pro drogy a zdraví. Správa osobních údajů bude probíhat v souladu s nařízením o ochraně osobních údajů („nařízení č. 2018-493 ze dne 20. června 2018“).

Jídlo:

Jídlo bude sestávat buď z nápoje obsahujícího 40 g medové chlorelly, nebo ze směsného jídla obsahujícího 80 g náhražky masa, aby bylo zajištěno 20 g bílkovin. Pro optimalizaci organoleptických vlastností pokrmu budou realizovány senzorické testy.

Dobrovolníci:

Do studie bude zahrnuto šestnáct předmětů. Vyšetřovatelé plánují naverbovat asi 40 dobrovolníků, aby se vyhověli obvyklým 60% výpadkům.

Čtyři dny před experimentem budou dobrovolníci dodržovat standardní dietu přizpůsobenou jejich tělesné hmotnosti, aby kontrolovali příjem bílkovin (1,3 g bílkovin/kg tělesné hmotnosti).

Dobrovolníci dorazí do Centra pro výzkum lidské výživy v nemocnici Avicenne ráno před dnem experimentu. Budou vybaveny střevní trubicí s dvojitým lumenem, které bude umožněno postupovat střevním traktem po dobu 24 hodin. Jeden z lumen je rentgenově neprůhledný a slouží k perfuzi nevstřebatelného maker ve střevě (metoda pomalého markeru). Druhý lumen je určen pro kontinuální aspiraci efluentů, 15 cm pod perfuzním místem. Měření neabsorbovatelného markeru v odpadních vodách umožňuje stanovení průtoku odpadních vod.

Večer před experimentálním dnem požijí 3 orální dávky 99% deuterované vody, aby dosáhli 5 g/kg celkové tělesné vody, aby označili střevní endogenní proteiny.

V den experimentu bude poloha trubice zkontrolována rentgenově, aby se ověřilo její umístění na terminálním ileu. Do žíly na předloktí bude zaveden katétr pro odběr krve. Perfuze neabsorbovatelného markeru, PEG-4000 (20 g/l), začne při průtoku 1 ml/min. Střevní průtok a bazální ileální vzorek budou odebírány během 30 minut. Bude odebrán vzorek bazální plazmy.

Poté, v t=0, dobrovolníci vypijí testovací jídlo. Až do t=8h bude střevní obsah nepřetržitě shromažďován aspirací a každých 30 minut shromažďován. Krev bude odebírána každých 30 minut během 4 hodin a poté každou hodinu. Moč bude shromažďována každé 2 hodiny po dobu 8 hodin.

Měření:

V ilel digestu:

PEG-4000 turbidimetrickou metodou, celkové obohacení N a 15N pomocí EA-IRMS, koncentrace aminokyselin pomocí UPLC (po kyselé hydrolýze HCl 6N při 110°C po dobu 24h), obohacení o 15N aminokyselin pomocí GC-c-IRMS (po čištění na kationtoměničová pryskyřice a derivatizace), obohacení o 2H aminokyseliny pomocí GC-c-IRMS, analýza mikrobiomu (sekvenování DNA), analýza peptidů (LC-MS).

V plazmě:

Glukóza, močovina (kolorimetrické metody), inzulín (ELISA), koncentrace aminokyselin (UPLC), 15N obohacení plazmatických proteinů, močoviny a volných aminokyselin (EA-IRMS, po purifikaci na katexu a derivatizaci).

V moči:

Močovina (kolorimetrická metoda) a 15N močovina (EA-IRMS, po čištění na kationtoměničové pryskyřici a derivatizaci).

Hlavní výsledky jsou:

Skutečná ileální stravitelnost bílkovin a aminokyselin (trávicí ztráty), postprandiální deaminace (metabolické ztráty), čistá postprandiální utilizace bílkovin