Calidad de la proteína de las habas y la clorella de miel en humanos (Giant Leaps)

El objetivo es determinar la calidad nutricional de la proteína de la miel chlorella y el análogo de la carne de habas en humanos sanos, especialmente en términos de digestibilidad de proteínas y aminoácidos, así como de retención de nitrógeno. La digestibilidad ileal se determina en la digesta ileal recogida posprandial con una sonda nasoileal. Las fuentes de proteínas están intrínsecamente marcadas en 15N para rastrear el nitrógeno y los aminoácidos de la dieta en las muestras.

Aspectos éticos y regulatorios:

El protocolo ha sido aprobado por el Comité Ético y autorizado por la Agencia Francesa del Medicamento y de la Salud. La gestión de los datos personales se realizará de conformidad con el reglamento sobre protección de datos personales ("reglamento n° 2018-493 del 20 de junio de 2018").

Comida:

La comida consistirá en una bebida que contenga 40 g de miel chlorella o una comida mixta que contenga 80 g de análogo de carne, para proporcionar 20 g de proteína. Se realizarán pruebas sensoriales para optimizar las propiedades organolépticas de la comida.

Voluntarios:

Se incluirán dieciséis sujetos en el estudio. Los investigadores planean reclutar alrededor de 40 voluntarios para dar cabida al habitual 60% de abandonos.

Cuatro días antes del experimento, los voluntarios seguirán una dieta estándar adaptada a su peso corporal para controlar su ingesta proteica (1,3 g de proteína/kg de peso corporal).

Los voluntarios llegarán al Centro de Investigación en Nutrición Humana del Hospital Avicenne la mañana anterior al día del experimento. Estarán equipados con un tubo intestinal de doble luz que se permitirá avanzar a través del tracto intestinal durante 24 horas. Una de las luces es radioopaca y sirve para perfundir un agente no absorbible en el intestino (método de marcador lento). El otro lumen está dedicado a la aspiración continua de los efluentes, 15 cm por debajo del lugar de perfusión. La medición del marcador no absorbible en los efluentes permite determinar el caudal del efluente.

La noche anterior al día experimental, ingerirán 3 dosis orales de agua deuterada al 99 % para alcanzar 5 g/kg de agua corporal total, para etiquetar las proteínas endógenas intestinales.

El día del experimento, se comprobará mediante radiografía la posición del tubo para verificar su ubicación en el íleon terminal. Se insertará un catéter en la vena del antebrazo para tomar muestras de sangre. La perfusión del marcador no absorbible, PEG-4000 (20 g/l), se iniciará con un caudal de 1 ml/min. El flujo intestinal y la muestra ileal basal se recolectarán durante 30 min. Se tomará una muestra de plasma basal.

Luego, en t=0, los voluntarios beberán la comida de prueba. Hasta t = 8 h, el contenido intestinal se recogerá continuamente mediante aspiración y se combinará cada 30 minutos. Se tomarán muestras de sangre cada 30 minutos durante 4 horas y posteriormente cada hora. La orina se recolectará cada 2 h durante 8 h.

Mediciones:

En la digesta ilel:

PEG-4000 por método turbidimétrico, enriquecimiento de N total y 15N por EA-IRMS, concentraciones de aminoácidos por UPLC (después de hidrólisis ácida HCl 6N a 110°C durante 24 h), enriquecimiento de aminoácidos 15N por GC-c-IRMS (después de purificación en resina de intercambio catiónico y derivatización), enriquecimiento de aminoácidos 2H mediante GC-c-IRMS, análisis de microbioma (secuenciación de ADN), análisis de péptidos (LC-MS).

En el plasma:

Glucosa, urea (métodos colorimétricos), insulina (ELISA), concentraciones de aminoácidos (UPLC), enriquecimiento 15N en proteína plasmática, urea y aminoácidos libres (EA-IRMS, previa purificación en resina de intercambio catiónico y derivatización).

En la orina:

Urea (método colorimétrico) y urea 15 N (EA-IRMS, previa purificación sobre resina de intercambio catiónico y derivatización).

Los principales resultados son:

Digestibilidad ileal real de proteínas y aminoácidos (pérdidas digestivas), Deaminación posprandial (pérdidas metabólicas), Utilización neta de proteínas posprandiales