Qualité des protéines de la fève et du miel chlorelle chez l'homme (Giant Leaps)

L'objectif est de déterminer la qualité nutritionnelle des protéines issues du miel de chlorelle et de l'analogue de la viande de féverole chez l'homme en bonne santé, notamment en termes de digestibilité des protéines et des acides aminés ainsi que de rétention d'azote. La digestibilité iléale est déterminée dans le digesta iléal collecté après le repas avec une sonde naso-iléale. Les sources de protéines sont intrinsèquement marquées en 15N afin de suivre l'azote alimentaire et les acides aminés présents dans les échantillons.

Aspects éthiques et réglementaires :

Le protocole a été approuvé par le Comité d'éthique et autorisé par l'Agence française du médicament et de la santé. La gestion des données personnelles sera conforme au règlement sur la protection des données personnelles (« règlement n° 2018-493 du 20 juin 2018 »).

Repas:

Le repas consistera soit en une boisson contenant 40 g de miel chlorelle, soit en un repas mixte contenant 80 g d'analogue de viande, pour apporter 20 g de protéines. Des tests sensoriels seront réalisés pour optimiser les propriétés organoleptiques du repas.

Bénévoles:

Seize sujets seront inclus dans l'étude. Les enquêteurs prévoient de recruter une quarantaine de volontaires pour répondre aux abandons habituels de 60 %.

Quatre jours avant l'expérimentation, les volontaires suivront un régime alimentaire standard adapté à leur poids corporel pour contrôler leur apport en protéines (1,3 g de protéines/kg de poids corporel).

Les volontaires arriveront au Centre de Recherche en Nutrition Humaine de l'Hôpital Avicenne la veille du jour de l'expérimentation. Ils seront équipés d'un tube intestinal à double lumière qui pourra progresser dans le tractus intestinal pendant 24h. L'une des lumières est radio-opaque et sert à perfuser un agent non résorbable dans l'intestin (méthode du marqueur lent). L'autre lumière est dédiée à l'aspiration continue des effluents, 15 cm sous le site de perfusion. La mesure du marqueur non résorbable dans les effluents permet de déterminer le débit des effluents.

La veille du jour expérimental, ils ingéreront 3 doses orales d'eau deutérée à 99 % pour atteindre 5 g/kg d'eau corporelle totale, pour marquer les protéines endogènes intestinales.

Le jour de l'expérience, la position du tube sera vérifiée par radiographie pour vérifier sa localisation au niveau de l'iléon terminal. Un cathéter sera inséré dans la veine de l'avant-bras pour un prélèvement sanguin. La perfusion du marqueur non résorbable, PEG-4000 (20 g/l), débutera à un débit de 1 ml/min. Le flux intestinal et l'échantillon iléal basal seront collectés pendant 30 min. Un échantillon de plasma basal sera échantillonné.

Ensuite, à t=0, les volontaires boiront le repas test. Jusqu'à t=8h, le contenu intestinal sera collecté en continu par aspiration et regroupé toutes les 30 minutes. Le sang sera prélevé toutes les 30 minutes pendant 4 heures et toutes les heures par la suite. L'urine sera collectée toutes les 2 h pendant 8 h.

Des mesures:

Dans le digesta ilel :

PEG-4000 par méthode turbidimétrique, enrichissement en N total et 15N par EA-IRMS, concentrations en acides aminés par UPLC (après hydrolyse acide HCl 6N à 110°C pendant 24h), enrichissement en acides aminés 15N par GC-c-IRMS (après purification sur résine échangeuse de cations et dérivatisation), enrichissement en acides aminés 2H par GC-c-IRMS, analyse du microbiome (séquençage d'ADN), analyse peptidique (LC-MS).

Dans le plasma :

Glucose, urée (méthodes colorimétriques), insuline (ELISA), concentrations d'acides aminés (UPLC), enrichissement en 15N en protéines plasmatiques, urée et acides aminés libres (EA-IRMS, après purification sur résine échangeuse de cations et dérivatisation).

Dans les urines :

Urée (méthode colorimétrique) et urée 15N (EA-IRMS, après purification sur résine échangeuse de cations et dérivatisation).

Les principaux résultats sont :

Digestibilité iléale réelle des protéines et des acides aminés (pertes digestives), Désamination postprandiale (pertes métaboliques), Utilisation nette des protéines postprandiale