다양한 유형의 간 기증자에서 간 손상의 바이오마커로서의 MicroRNA 프로필.

2019년 10월부터 2021년 5월 사이에 스페인 바르셀로나의 Vall d'Hebron University Hospital에서 사망한 성인 장기 기증자로부터 관류액, 간 생검 및 혈청 샘플을 전향적으로 수집했습니다.

성인 뇌사 기증자(n=10)와 순환기 사망 후 기증자(n=10)의 샘플에서 miR-122, miR-148, miR-155, miR-22, miR-222 및 miR122 비율의 존재 여부를 분석했습니다. /miR222, 문헌에서 선택된 간 손상의 표적 바이오마커.

참조 miRNA 프로필을 설정하기 위해 상당한 지방증으로 인해 사용할 수 없는 이식편이 있는 기증자의 하위 그룹(n=3)을 분석했습니다.

재이식, 소아 및 분할 기증자는 생검 관련 부상을 피하기 위해 제외되었습니다.

연구 기간 동안 살아있는 기증자가 포함되지 않았기 때문에 선택적 담낭 절제술을 받은 건강한 대조군 하위 그룹(n=7)의 혈청 표본을 분석했습니다.

이 연구는 박사 학위 논문의 일부이며 데이터 수집은 스페인 바르셀로나에 있는 한 3차 병원 센터의 장기 기증 가용성을 기반으로 주요 연구자가 수행했습니다. 자원 제한 제약에 따라 표본 크기는 2년 동안 얻은 연속 표본으로 제한되었습니다.

연구에 포함된 환자 및 기증자의 친척으로부터 서면 동의서를 얻었습니다. 환자의 샘플과 데이터는 스페인 국립 바이오뱅크 네트워크에 통합된 Vall d'Hebron University Hospital Biobank(PT20/00107)에서 제공되었으며 표준 운영 절차에 따라 처리되었습니다. 연구 프로토콜은 Vall d'Hebron 대학 병원 [PR(AG)46/2019]의 의료 윤리 위원회의 승인을 받았으며 헬싱키 선언에 설명된 원칙을 준수합니다.

통계 분석:

데이터 품질을 최적화하기 위해 극단적인 Ct 값(11보다 작은 Ct 또는 39보다 큰 Ct)이 있는 판독값은 삭제되었습니다. 분석된 서로 다른 샘플(기술적 삼중)의 각 miRNA에 대한 Ct의 평균과 표준 편차를 계산했습니다. 분석된 데이터의 품질을 향상시키기 위해 높은 표준 편차(0.3보다 큰 Ct SD)를 사용하여 3중으로 평균에서 가장 먼 Ct 값을 제거하여 샘플당 miRNA당 총 2개 이상의 값을 남겼습니다. 마찬가지로, 각 miRNA에 대해 유효한 복제물이 2개 미만인 샘플은 제외되었습니다. 잠재적인 RNA 입력 또는 RT 효율성 편향을 수정하기 위해 내인성 참조(miR-103a, miR-191, miR-30c, miR-16 및 let7a)의 평균 Ct를 사용하여 Ct 값을 정규화했습니다. miRNA 상대 정량화(RQ) 수준은 Livak et al. 방법 2^(-ΔΔCt), ΔCt(miRNA Ct 표적 - 평균 내생 대조 Ct) 및 비교 그룹 간의 차이(ΔΔCt)(ΔCt 비교 - ΔCt 참조 샘플)로 계산됩니다. 그룹 비교는 연속 데이터의 경우 T-테스트 또는 U-Mann Whitney(비모수적)를 사용하고 정성적 데이터의 경우 Fisher 테스트를 사용하여 수행되었습니다. 0.05 미만의 P-값은 유의미한 것으로 간주되었습니다.

방법론 하위 연구:

성인 인간 뇌사 기증자(n=4)와 순환기 사망 후 기증자(n=4)의 하위 그룹에서 miR-122 및 miR-148의 존재를 분석했습니다. 헤파린은 RNA qPCR 분석에서 억제 효과가 있는 것으로 알려져 있으며 간 기증자 샘플은 장기 조달 중 혈전 형성을 방지하는 데 사용되므로 헤파린 흔적을 남기기 쉽습니다. 헤파린 억제 효과를 극복하기 위해 헤파리나제-I이 문헌에서 사용되었습니다.

이 하위 연구에서는 RT-qPCR에 의한 miRNA 검출 수준에 대한 헤파리나제 I의 상쇄 효과를 평가하기 위해 샘플을 0 IU, 6 IU 또는 12 IU의 헤파리나제-I로 처리했습니다.