MicroRNA-Profil als Biomarker für Leberschäden bei verschiedenen Arten von Leberspendern.
Perfil De MicroRNA Como Biomarcador De Daño Hepático En Diferentes Tipos De Donantes De Hígado (MicroRNA-Profil als Biomarker für Leberschäden bei verschiedenen Arten von Leberspendern).
Ziel dieser Beobachtungsstudie ist es, die Expression von aus der Leber stammenden miRNAs bei verschiedenen Arten von Leberspendern zu analysieren, um umfassende Kenntnisse über charakteristische physiologische Merkmale bei Spendern zu gewinnen und potenzielle Biomarker für die Beurteilung der Transplantatqualität zu finden. Die wichtigsten Fragen, die beantwortet werden sollen, sind:
Gibt es ein charakteristisches miRNA-Profil zwischen Spendern nach Hirnstammtod und Spendern nach Kreislauftod?
Ist eine Behandlung mit Heparinase I erforderlich, um Störungen der miRNA-Quantifizierung in heparinisierten Leberspenderproben zu überwinden?
Die Forscher vergleichen die miRNA-Expression bei Spendern nach Hirnstammtod und bei Spendern nach Kreislauftod mit I) einer Untergruppe von Spendern mit unbrauchbaren Transplantaten aufgrund einer signifikanten Steatose, 2) und mit einer Untergruppe gesunder Kontrollpersonen, die sich einer elektiven Cholezystektomie unterziehen, um die Referenz-miRNA-Profile festzulegen unter extremen Bedingungen.
Studienübersicht
Status
Bedingungen
Intervention / Behandlung
Detaillierte Beschreibung
Zwischen Oktober 2019 und Mai 2021 wurden prospektiv Perfusate, Leberbiopsien und Serumproben von erwachsenen verstorbenen Organspendern im Universitätskrankenhaus Vall d'Hebron, Barcelona, Spanien, entnommen.
Proben von erwachsenen hirntoten menschlichen Spendern (n=10) und Spendern nach Kreislauftod (n=10) wurden auf das Vorhandensein von miR-122, miR-148, miR-155, miR-22, miR-222 und das Verhältnis miR122 analysiert /miR222, aus der Literatur ausgewählte Zielbiomarker für Leberschäden.
Um die Referenz-miRNA-Profile festzulegen, wurde eine Untergruppe von Spendern mit unbrauchbaren Transplantaten aufgrund einer signifikanten Steatose (n=3) analysiert.
Spender für Retransplantationen, Kinder- und Split-Spender wurden ausgeschlossen, um biopsiebedingte Verletzungen zu vermeiden.
Da es im Untersuchungszeitraum keine Einschlüsse von Lebendspendern gab, wurden Serumproben einer Untergruppe gesunder Kontrollpersonen analysiert, die sich einer elektiven Cholezystektomie unterzogen (n=7).
Diese Studie ist Teil einer Doktorarbeit und die Datenerhebung wurde vom Hauptforscher auf der Grundlage der Organspenderverfügbarkeit in einem tertiären Krankenhauszentrum in Barcelona, Spanien, durchgeführt. Aufgrund von Ressourcenbeschränkungen wurde die Stichprobengröße auf die aufeinanderfolgenden Stichproben beschränkt, die in einem Zeitraum von zwei Jahren entnommen wurden.
Von den in die Studie einbezogenen Patienten und Angehörigen der Spender wurde eine schriftliche Einverständniserklärung eingeholt. Proben und Daten von Patienten wurden von der Biobank des Universitätskrankenhauses Vall d'Hebron (PT20/00107) bereitgestellt, die in das spanische nationale Biobanken-Netzwerk integriert ist, und sie wurden gemäß den Standardarbeitsanweisungen verarbeitet. Das Studienprotokoll wurde von der medizinischen Ethikkommission des Universitätskrankenhauses Vall d'Hebron [PR(AG)46/2019] genehmigt und entspricht den in der Deklaration von Helsinki dargelegten Grundsätzen.
Statistische Analyse:
Um die Datenqualität zu optimieren, wurden Messwerte mit extremen Ct-Werten (Ct unter 11 oder Ct über 39) verworfen. Der Mittelwert der Cts und die Standardabweichung für jede der miRNAs in den verschiedenen analysierten Proben (technische Triplikate) wurden berechnet. Um die Qualität der analysierten Daten zu verbessern, wurde in Dreifachproben mit hoher Standardabweichung (Ct SD größer als 0,3) der Ct-Wert, der am weitesten vom Mittelwert entfernt war, eliminiert, sodass insgesamt mindestens zwei Werte pro miRNA und Probe übrig blieben. Ebenso wurden für jede miRNA Proben mit weniger als zwei gültigen Replikaten ausgeschlossen. Um potenzielle RNA-Input- oder RT-Effizienzverzerrungen zu korrigieren, wurden die Ct-Werte unter Verwendung des durchschnittlichen Ct endogener Referenzen (miR-103a, miR-191, miR-30c, miR-16 und let7a) normalisiert. Die relativen miRNA-Quantifizierungsniveaus (RQ) wurden unter Verwendung von Livak et al. analysiert. Methode 2^(-ΔΔCt), berechnet wie folgt: ΔCt (miRNA-Ct-Ziel – gemittelter endogener Kontroll-Ct) und die Differenz (ΔΔCt) zwischen Vergleichsgruppen (ΔCt-Vergleich – ΔCt-Referenzprobe). Gruppenvergleiche wurden unter Verwendung des T-Tests oder U-Mann Whitney (nicht parametrisch) für kontinuierliche Daten und des Fisher-Tests für qualitative Daten durchgeführt. P-Werte unter 0,05 wurden als signifikant angesehen.
Teilstudie zur Methodik:
Eine Untergruppe erwachsener hirntoter menschlicher Spender (n=4) und Spender nach Kreislauftod (n=4) wurde auf das Vorhandensein von miR-122 und miR-148 analysiert. Es ist bekannt, dass Heparin eine hemmende Wirkung bei der RNA-qPCR-Analyse hat und Leberspenderproben neigen dazu, Heparinspuren zu enthalten, da es verwendet wird, um die Thrombusbildung bei der Organentnahme zu verhindern. Heparinase-I wurde in der Literatur verwendet, um die Heparin-hemmende Wirkung zu überwinden.
In dieser Teilstudie wurden die Proben mit 0 IU, 6 IU oder 12 IU Heparinase-I behandelt, um die entgegenwirkende Wirkung von Heparinase I auf die miRNA-Nachweisniveaus durch RT-qPCR zu bewerten.
Studientyp
Einschreibung (Tatsächlich)
Kontakte und Standorte
Studienorte
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Barcelona, Spanien, 08035
- Vall d Hebron University Hospital
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Teilnahmekriterien
Zulassungskriterien
Studienberechtigtes Alter
- Erwachsene
- Älterer Erwachsener
Akzeptiert gesunde Freiwillige
Probenahmeverfahren
Studienpopulation
Vierzehn kombinierte Perfusate, Leberbiopsien und Serumproben wurden prospektiv von Spendern mit Hirntod (DBD, n=14) und Spendern nach Kreislauftod (DCD, n=14) gesammelt.
Drei kombinierte Perfusate, Leberbiopsien und Serumproben wurden prospektiv von hirntoten Spendern entnommen, die aufgrund einer signifikanten Steatose (DBDd, n=3) zur Transplantation verworfen wurden.
Sieben Serumproben wurden prospektiv von gesunden Kontrollpersonen entnommen, die sich einer elektiven Cholezystektomie unterzogen (Kontrolle, n=7).
Einzelzentrumsstudie mit Proben, die zwischen Oktober 2019 und Mai 2021 am Universitätskrankenhaus Vall d'Hebron, Spanien, entnommen wurden.
Beschreibung
I) Hauptspendergruppen (DBD und DCD):
Einschlusskriterien:
- Erwachsene verstorbene Leberspender
Ausschlusskriterien:
- Pädiatrische Spender (unter 18 Jahre alt)
- Spender für Retransplantationsfälle
- Spender, die sich einer Leberspaltungs- oder Teilungstechnik unterzogen haben, um zwei kleine Transplantate für zwei Empfänger (Erwachsene und Kinder) zu erhalten.
II) Entsorgte DBD-Transplantate:
Einschlusskriterien:
- Unbrauchbare Transplantate für eine Transplantation aufgrund mittelschwerer (30 % bis 60 %) oder schwerer (mehr als 60 %) Steatose in Leberbiopsien.
Ausschlusskriterien:
- Aus anderen Gründen werden unbrauchbare Transplantate entsorgt.
- Pädiatrische Spender (unter 18 Jahre alt)
- Spender für Retransplantationsfälle
- Spender, die sich einer Leberspaltungs- oder Teilungstechnik unterzogen haben, um zwei kleine Transplantate für zwei Empfänger (Erwachsene und Kinder) zu erhalten.
III) Kontrollgruppe:
Einschlusskriterien:
- Gleiche Einschlusskriterien wie beim Lebendleberspenderprogramm in unserem Zentrum: 18 bis 60 Jahre alt, normale Leberfunktion, Ultraschall ohne Anzeichen einer Lebererkrankung und Steatose von weniger als 30 %.
Ausschlusskriterien:
- Patienten mit präoperativ gestörten Leberfunktionstests.
Studienplan
Wie ist die Studie aufgebaut?
Designdetails
Kohorten und Interventionen
Gruppe / Kohorte |
Intervention / Behandlung |
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Todeshirnspender (DBD)
Lebertransplantate von hirntoten Spendern unterliegen während der Spendererhaltung aufgrund der Unterbrechung der Hirnstammaktivität systemischen hämodynamischen, entzündlichen und endokrinen Veränderungen.
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Beobachtungsstudie mit Probenentnahme von Serum, Lebergewebe und Perfusatflüssigkeit von Leberspendern. Im Rahmen der Studie wurden bei den Spendern keine spezifischen Eingriffe vorgenommen. Die Proben wurden mittels RT-qPCR auf spezifische microNA-Expression analysiert. *Kontrollgruppe: Von dieser Gruppe wurden nur Serumproben entnommen. |
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Spender nach Kreislauftod (DCD)
Spender mit Kreislauftod leiden nicht unter den physiologischen Merkmalen eines Hirntodes, was fast einer Lebendspende gleicht.
Nach Abzug lebenserhaltender Maßnahmen erleiden diese Transplantate jedoch Schäden durch schwere Ischämie.
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Beobachtungsstudie mit Probenentnahme von Serum, Lebergewebe und Perfusatflüssigkeit von Leberspendern. Im Rahmen der Studie wurden bei den Spendern keine spezifischen Eingriffe vorgenommen. Die Proben wurden mittels RT-qPCR auf spezifische microNA-Expression analysiert. *Kontrollgruppe: Von dieser Gruppe wurden nur Serumproben entnommen. |
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Verworfener DBD (dDBD)
Lebertransplantate von hirntoten Spendern, die aufgrund einer mittelschweren bis schweren Steatose unbrauchbar waren.
Fettleber sind anfällig für Erhaltungsschäden, was zu einer höheren Rate an primärer Funktionsstörung, früher Allotransplantat-Dysfunktion und vaskulären und biliären Komplikationen nach der Transplantation führt
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Beobachtungsstudie mit Probenentnahme von Serum, Lebergewebe und Perfusatflüssigkeit von Leberspendern. Im Rahmen der Studie wurden bei den Spendern keine spezifischen Eingriffe vorgenommen. Die Proben wurden mittels RT-qPCR auf spezifische microNA-Expression analysiert. *Kontrollgruppe: Von dieser Gruppe wurden nur Serumproben entnommen. |
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Kontrollgruppe
Vor der Inzision wurden Serumproben von gesunden Patienten entnommen, die sich aufgrund symptomatischer Gallensteine einer elektiven Cholezystektomie unterzogen hatten.
Die eingeschlossenen Patienten hatten ähnliche Merkmale gemäß der Richtlinie des Zentrums für lebende Leberspender: 18 bis 60 Jahre alt, normale Leberfunktion und keine Steatose im Ultraschall.
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Beobachtungsstudie mit Probenentnahme von Serum, Lebergewebe und Perfusatflüssigkeit von Leberspendern. Im Rahmen der Studie wurden bei den Spendern keine spezifischen Eingriffe vorgenommen. Die Proben wurden mittels RT-qPCR auf spezifische microNA-Expression analysiert. *Kontrollgruppe: Von dieser Gruppe wurden nur Serumproben entnommen. |
Was misst die Studie?
Primäre Ergebnismessungen
Ergebnis Maßnahme |
Maßnahmenbeschreibung |
Zeitfenster |
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miRNA-Expressionsprofil bei verschiedenen Arten von Leberspendern.
Zeitfenster: Datenerfassung von regionalen Spendern in einem Zeitraum von zwei Jahren basierend auf der Verfügbarkeit der Spender und der Verfügbarkeit des Hauptforschers (Datensammlers). Die Proben wurden während der Organentnahme gesammelt, was bei jedem Spender mehr als 4 bis 6 Stunden dauert.
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Vergleichen Sie das miRNA-Expressionsprofil (miR-122 und miR-148a, miR-222, miR-22 und miR-155) von Spendern des Todeshirns und Spendern des Kreislauftodes in Leberbiopsien, Serum und Perfusionslösung
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Datenerfassung von regionalen Spendern in einem Zeitraum von zwei Jahren basierend auf der Verfügbarkeit der Spender und der Verfügbarkeit des Hauptforschers (Datensammlers). Die Proben wurden während der Organentnahme gesammelt, was bei jedem Spender mehr als 4 bis 6 Stunden dauert.
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Mitarbeiter und Ermittler
Sponsor
Mitarbeiter
Ermittler
- Studienleiter: Ramon Charco, MD, PhD, Chief of HPB surgery and Transplant Department in Vall d Hebron University Hospital
- Studienleiter: Concepción Gómez-Gavara, MD, PhD, HPB surgery and Liver Transplant consultant in Vall d Hebron University Hospital
Studienaufzeichnungsdaten
Haupttermine studieren
Studienbeginn (Tatsächlich)
Primärer Abschluss (Tatsächlich)
Studienabschluss (Tatsächlich)
Studienanmeldedaten
Zuerst eingereicht
Zuerst eingereicht, das die QC-Kriterien erfüllt hat
Zuerst gepostet (Tatsächlich)
Studienaufzeichnungsaktualisierungen
Letztes Update gepostet (Tatsächlich)
Letztes eingereichtes Update, das die QC-Kriterien erfüllt
Zuletzt verifiziert
Mehr Informationen
Begriffe im Zusammenhang mit dieser Studie
Schlüsselwörter
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- PR(AG)46/2019
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Arzneimittel- und Geräteinformationen, Studienunterlagen
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Arzneimittelprodukt
Studiert ein von der US-amerikanischen FDA reguliertes Geräteprodukt
Produkt, das in den USA hergestellt und aus den USA exportiert wird
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