MicroRNA-profiili erityyppisten maksanluovuttajien maksavaurioiden biomarkkerina.
Perfil De MicroRNA Como Biomarcador De Daño Hepático En Diferentes Tipos De Donantes De Hígado (MicroRNA-profiili erityyppisten maksanluovuttajien maksavaurioiden biomarkkerina).
Tämän havainnointitutkimuksen tavoitteena on analysoida maksasta peräisin olevien miRNA:iden ilmentymistä erityyppisissä maksanluovuttajissa saadakseen syvällistä tietoa luovuttajien erityisistä fysiologisista ominaisuuksista ja löytääkseen mahdollisia biomarkkereita siirteen laadun arviointiin. Tärkeimmät kysymykset, joihin se pyrkii vastaamaan, ovat:
Onko aivorunkokuoleman jälkeisten luovuttajien ja verenkiertokuoleman jälkeisten luovuttajien välillä erottuva miRNA-profiili?
Onko heparinaasi I -hoito tarpeen miRNA:n kvantifiointihäiriön voittamiseksi heparinisoiduissa maksanluovuttajanäytteissä?
Tutkijat vertaavat miRNA-ilmentymistä luovuttajilla aivorunkokuoleman jälkeen ja verenkiertokuoleman jälkeen luovuttajilla I) luovuttajien alaryhmään, joilla on käyttökelvottomia siirteitä merkittävän steatoosin vuoksi, 2) ja terveiden kontrollien alaryhmään, joille tehdään elektiivinen kolekystektomia määrittääkseen vertailumiRNA-profiilit. äärimmäisissä olosuhteissa.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Lokakuun 2019 ja toukokuun 2021 välisenä aikana perfusaatteja, maksabiopsioita ja seeruminäytteitä kerättiin prospektiivisesti aikuisilta kuolleilta elinluovuttajilta Vall d'Hebronin yliopistollisessa sairaalassa Barcelonassa, Espanjassa.
Näytteet aikuisilta ihmisaivokuoleman luovuttajilta (n=10) ja verenkiertokuoleman jälkeisiltä luovuttajilta (n=10) analysoitiin miR-122-, miR-148-, miR-155-, miR-22-, miR-222- ja miR122-suhteen suhteen. /miR222, maksavaurion kohdebiomarkkereita, jotka on valittu kirjallisuudesta.
Viite-miRNA-profiilien asettamiseksi analysoitiin alaryhmä luovuttajia, joilla oli käyttökelvottomat siirteet merkittävän steatoosin vuoksi (n = 3).
Luovuttajat uudelleensiirtoa, lapsia ja jakamista varten jätettiin pois biopsiaan liittyvien vammojen välttämiseksi.
Koska elävien luovuttajien inkluusiota ei ollut tutkimusjakson aikana, seeruminäytteet terveiden kontrollien alaryhmästä, joille tehtiin elektiivinen kolekystektomia (n = 7), analysoitiin.
Tämä tutkimus on osa väitöskirjatyötä ja tiedonkeruun suoritti päätutkija elinluovuttajien saatavuuteen perustuen yhdessä korkea-asteen sairaalakeskuksessa Barcelonassa, Espanjassa. Resurssirajoitusten perusteella otoskoko rajoitettiin kahden vuoden aikana saatuihin peräkkäisiin näytteisiin.
Kirjallinen tietoinen suostumus saatiin tutkimukseen osallistuneilta potilailta ja luovuttajien sukulaisilta. Potilaiden näytteet ja tiedot toimitti Vall d'Hebron University Hospital Biobank (PT20/00107), joka on integroitu Espanjan kansalliseen biopankkiverkostoon, ja ne käsiteltiin tavanomaisten toimintamenetelmien mukaisesti. Tutkimusprotokolla on Vall d'Hebronin yliopistollisen sairaalan lääketieteellisen eettisen komitean hyväksymä [PR(AG)46/2019] ja se on Helsingin julistuksessa esitettyjen periaatteiden mukainen.
Tilastollinen analyysi:
Tietojen laadun optimoimiseksi lukemat, joissa oli äärimmäisiä Ct-arvoja (Ct alle 11 tai Ct suurempi kuin 39), hylättiin. Ct:iden keskiarvo ja standardipoikkeama kullekin miRNA:lle eri analysoiduissa näytteissä (tekniset kolminkertaiset) laskettiin. Analysoitujen tietojen laadun parantamiseksi kolminkertaisissa testeissä, joissa oli suuri standardipoikkeama (Ct SD suurempi kuin 0,3), keskiarvosta kauimpana oleva Ct-arvo poistettiin, jolloin jäi yhteensä vähintään kaksi arvoa miRNA:ta kohden näytettä kohti. Samoin jokaisesta miRNA:sta jätettiin pois näytteet, joissa oli vähemmän kuin kaksi kelvollista kopiota. Mahdollisten RNA-syötteen tai RT-tehokkuuspoikkeamien korjaamiseksi Ct-arvot normalisoitiin käyttämällä endogeenisten referenssien (miR-103a, miR-191, miR-30c, miR-16 ja let7a) keskimääräistä Ct:tä. miRNA:n suhteellisen kvantifioinnin (RQ) tasot analysoitiin käyttämällä Livak et ai. menetelmä 2^(-ΔΔCt), laskettuna seuraavasti ΔCt (miRNA Ct -kohde - keskiarvo endogeeninen kontrolli-Ct) ja ero (ACt) vertailuryhmien välillä (ACt-vertailu - ACt-referenssinäyte). Ryhmävertailut suoritettiin käyttämällä T-testiä tai U-Mann Whitneyä (ei-parametrista) jatkuvaa dataa varten ja Fisher-testiä kvalitatiivisille tiedoille. P-arvoja alle 0,05 pidettiin merkittävinä.
Metodologian alatutkimus:
Alaryhmästä aikuisten ihmisen aivokuoleman luovuttajia (n=4) ja verenkiertokuoleman jälkeisiä luovuttajia (n=4) analysoitiin miR-122:n ja miR-148:n esiintymisen suhteen. Hepariinilla tiedetään olevan estovaikutus RNA:n qPCR-analyysissä, ja maksan luovuttajanäytteissä on taipumus olla hepariinijäämiä, koska sitä käytetään estämään veritulpan muodostumista elinten hankinnan aikana. Heparinaasi-I:tä on käytetty kirjallisuudessa hepariinia estävän vaikutuksen voittamiseksi.
Tässä alatutkimuksessa näytteitä käsiteltiin 0 IU:lla, 6 IU:lla tai 12 IU:lla heparinaasi-I:tä heparinaasi I:n vastavaikutuksen arvioimiseksi miRNA:n havaitsemistasoihin RT-qPCR:llä.
Opintotyyppi
Ilmoittautuminen (Todellinen)
Yhteystiedot ja paikat
Opiskelupaikat
-
-
-
Barcelona, Espanja, 08035
- Vall d Hebron University Hospital
-
-
Osallistumiskriteerit
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
- Aikuinen
- Vanhempi Aikuinen
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Näytteenottomenetelmä
Tutkimusväestö
Aivokuoleman luovuttajilta (DBD, n = 14) ja verenkiertokuoleman jälkeisiltä luovuttajilta (DCD, n = 14) kerättiin 14 yhdistettyä perfusaattia, maksabiopsiaa ja seeruminäytettä.
Kolme yhdistettyä perfusaattia, maksabiopsiaa ja seeruminäytettä kerättiin prospektiivisesti aivokuoleman luovuttajilta, jotka hylättiin siirtoa varten merkittävän steatoosin vuoksi (DBDd, n = 3).
Seitsemän seeruminäytettä kerättiin prospektiivisesti terveistä kontrolleista, joille tehtiin elektiivinen kolekystektomia (kontrolli, n = 7).
Yhden keskuksen tutkimus, jossa näytteitä kerättiin Vall d'Hebronin yliopistollisessa sairaalassa Espanjassa lokakuun 2019 ja toukokuun 2021 välisenä aikana.
Kuvaus
I) Tärkeimmät luovuttajaryhmät (DBD ja DCD):
Sisällön kriteerit:
- Aikuiset kuolleet maksanluovuttajat
Poissulkemiskriteerit:
- Lasten luovuttajat (alle 18-vuotiaat)
- Luovuttaja uudelleensiirtotapauksiin
- Luovuttajat, joille tehtiin maksan jakautumis- tai jakautumistekniikka kahden pienen siirteen saamiseksi kahdelle vastaanottajalle (aikuisille ja lapsille).
II) Hylätyt DBD-siirteet:
Sisällön kriteerit:
- Käyttökelvottomat siirrännäiset siirrettä varten maksabiopsioiden keskivaikean (30–60 %) tai vakavan (yli 60 %) steatoosin vuoksi.
Poissulkemiskriteerit:
- Käyttämättömät siirteet hylätty muista syistä.
- Lasten luovuttajat (alle 18-vuotiaat)
- Luovuttaja uudelleensiirtotapauksiin
- Luovuttajat, joille tehtiin maksan jakautumis- tai jakautumistekniikka kahden pienen siirteen saamiseksi kahdelle vastaanottajalle (aikuisille ja lapsille).
III) Kontrolliryhmä:
Sisällön kriteerit:
- Samat osallistumiskriteerit kuin keskuksemme elävän maksanluovuttajaohjelmassa: 18-60-vuotiaat, normaali maksan toiminta, ultraääni ilman maksasairauden merkkejä ja steatoosi alle 30%.
Poissulkemiskriteerit:
- Potilaat, joilla ennen leikkausta maksan toimintakokeet ovat häiriintyneet.
Opintosuunnitelma
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Kuoleman aivoluovuttajat (DBD)
Aivokuoleman luovuttajilta saadut maksasiirteet kärsivät systeemisistä hemodynaamisista, tulehduksellisista ja endokriinisistä muutoksista luovuttajan ylläpidon aikana aivorungon toiminnan lopettamisen vuoksi.
|
Havaintotutkimus, jossa kerättiin näytteitä seerumista, maksakudoksesta ja perfuusionesteestä maksan luovuttajilta. Osana tutkimusta luovuttajille ei tehty erityisiä interventioita. Näytteet analysoitiin spesifisen mikroNA-ilmentymisen suhteen RT-qPCR:llä. * Kontrolliryhmä: tästä ryhmästä kerättiin vain seeruminäytteet. |
|
Verenkiertokuoleman (DCD) jälkeiset luovuttajat
Verenkiertokuoleman luovuttajat eivät kärsi aivokuoleman fysiologisista piirteistä, mikä on lähes heijastavaa elävää luovutusta.
Kuitenkin, kun elämää ylläpitävät toimenpiteet on lopetettu, nämä siirteet kärsivät vakavasta iskemiasta johtuvaa vammaa.
|
Havaintotutkimus, jossa kerättiin näytteitä seerumista, maksakudoksesta ja perfuusionesteestä maksan luovuttajilta. Osana tutkimusta luovuttajille ei tehty erityisiä interventioita. Näytteet analysoitiin spesifisen mikroNA-ilmentymisen suhteen RT-qPCR:llä. * Kontrolliryhmä: tästä ryhmästä kerättiin vain seeruminäytteet. |
|
Hylätty DBD (dDBD)
Maksasiirteet aivokuoleman luovuttajilta, jotka olivat käyttökelvottomia keskivaikean tai vaikean steatoosin vuoksi.
Rasvamaksat ovat alttiita säilyvyyden aiheuttamille vaurioille, jotka johtavat korkeampaan primaaristen toimintahäiriöiden määrään, varhaiseen allograftin toimintahäiriöön ja siirroksen jälkeisiin verisuoni- ja sappikomplikaatioihin
|
Havaintotutkimus, jossa kerättiin näytteitä seerumista, maksakudoksesta ja perfuusionesteestä maksan luovuttajilta. Osana tutkimusta luovuttajille ei tehty erityisiä interventioita. Näytteet analysoitiin spesifisen mikroNA-ilmentymisen suhteen RT-qPCR:llä. * Kontrolliryhmä: tästä ryhmästä kerättiin vain seeruminäytteet. |
|
Kontrolliryhmä
Seeruminäytteet terveiltä potilailta, joille tehtiin elektiivinen kolekystektomia oireisten sappikivien vuoksi, otettiin ennen viiltoa.
Mukana olevilla potilailla oli samanlaisia piirteitä keskuksen elävän maksanluovuttajapolitiikan mukaan: 18-60-vuotiaat, maksan toiminta normaali, eikä ultraäänitutkimuksessa havaittu steatoosia.
|
Havaintotutkimus, jossa kerättiin näytteitä seerumista, maksakudoksesta ja perfuusionesteestä maksan luovuttajilta. Osana tutkimusta luovuttajille ei tehty erityisiä interventioita. Näytteet analysoitiin spesifisen mikroNA-ilmentymisen suhteen RT-qPCR:llä. * Kontrolliryhmä: tästä ryhmästä kerättiin vain seeruminäytteet. |
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
miRNA-ekspressioprofiili erityyppisissä maksanluovuttajissa.
Aikaikkuna: Tiedonkeruu alueellisilta luovuttajilta kahden vuoden aikana luovuttajien saatavuuden ja päätutkijan (tiedonkerääjän) saatavuuden perusteella. Näytteet kerättiin elinten hankinnan aikana, joka sisältää yli 4-6 tuntia jokaiselta luovuttajalta.
|
Vertaa miRNA:n ilmentymisprofiilia (miR-122 ja miR-148a, miR-222, miR-22 ja miR-155) kuolleilta aivoluovuttajilta ja verenkiertokuoleman luovuttajilta maksabiopsioissa, seerumissa ja perfuusioliuoksessa
|
Tiedonkeruu alueellisilta luovuttajilta kahden vuoden aikana luovuttajien saatavuuden ja päätutkijan (tiedonkerääjän) saatavuuden perusteella. Näytteet kerättiin elinten hankinnan aikana, joka sisältää yli 4-6 tuntia jokaiselta luovuttajalta.
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Sponsori
Yhteistyökumppanit
Tutkijat
- Opintojohtaja: Ramon Charco, MD, PhD, Chief of HPB surgery and Transplant Department in Vall d Hebron University Hospital
- Opintojohtaja: Concepción Gómez-Gavara, MD, PhD, HPB surgery and Liver Transplant consultant in Vall d Hebron University Hospital
Opintojen ennätyspäivät
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Opintojen valmistuminen (Todellinen)
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Viimeksi vahvistettu
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Avainsanat
Muut tutkimustunnusnumerot
- PR(AG)46/2019
Yksittäisten osallistujien tietojen suunnitelma (IPD)
Aiotko jakaa yksittäisten osallistujien tietoja (IPD)?
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Yhdysvalloissa valmistettu ja sieltä viety tuote
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .