Profil mikroRNA jako biomarker uszkodzenia wątroby u różnych typów dawców wątroby.
Perfil De MicroRNA Como Biomarcador De Daño Hepático En Diferentes Tipos De Donantes De Hígado (Profil mikroRNA jako biomarker uszkodzenia wątroby u różnych typów dawców wątroby).
Celem tego badania obserwacyjnego jest analiza ekspresji miRNA pochodzących z wątroby u różnych dawców wątroby w celu uzyskania dogłębnej wiedzy na temat charakterystycznych cech fizjologicznych dawców i znalezienia potencjalnych biomarkerów do oceny jakości przeszczepu. Główne pytania, na które ma odpowiedzieć, to:
Czy istnieje odrębny profil miRNA między dawcami po śmierci pnia mózgu i dawcami po śmierci krążeniowej?
Czy leczenie heparynazą I jest konieczne, aby przezwyciężyć zakłócenia w oznaczaniu ilościowym miRNA w próbkach heparynizowanych dawców wątroby?
Naukowcy porównają ekspresję miRNA u dawców po śmierci pnia mózgu i dawców po śmierci krążeniowej z I) podgrupą dawców z nienadającymi się do użytku przeszczepami z powodu znacznego stłuszczenia, 2) i podgrupą zdrowych osób kontrolnych poddawanych planowej cholecystektomii w celu ustalenia referencyjnych profili miRNA w ekstremalnych warunkach.
Przegląd badań
Status
Interwencja / Leczenie
Szczegółowy opis
W okresie od października 2019 r. do maja 2021 r. w szpitalu uniwersyteckim Vall d'Hebron w Barcelonie w Hiszpanii pobierano prospektywnie perfuzaty, biopsje wątroby i próbki surowicy od dorosłych zmarłych dawców narządów.
Próbki od dawców dorosłych zajmujących się śmiercią mózgu (n=10) i dawców po śmierci krążeniowej (n=10) analizowano pod kątem obecności miR-122, miR-148, miR-155, miR-22, miR-222 i współczynnika miR122 /miR222, docelowe biomarkery uszkodzenia wątroby wybrane z literatury.
Aby ustalić referencyjne profile miRNA, przeanalizowano podgrupę dawców z przeszczepami nienadającymi się do użytku z powodu znacznego stłuszczenia (n=3).
Dawcy do retransplantacji, pediatryczni i split zostali wykluczeni, aby uniknąć obrażeń związanych z biopsją.
Ponieważ w okresie badania nie było żadnych żywych dawców, analizowano próbki surowicy z podgrupy zdrowych osób kontrolnych poddawanych planowej cholecystektomii (n=7).
Niniejsze badanie jest częścią pracy doktorskiej, a dane zebrał główny badacz na podstawie dostępności dawców narządów w jednym z ośrodków szpitalnych trzeciego stopnia w Barcelonie w Hiszpanii. W oparciu o ograniczenia zasobów wielkość próby ograniczono do kolejnych próbek uzyskanych w okresie 2 lat.
Pisemną świadomą zgodę uzyskano od pacjentów i krewnych dawców objętych badaniem. Próbki i dane od pacjentów zostały dostarczone przez Biobank Szpitala Uniwersyteckiego Vall d'Hebron (PT20/00107), zintegrowany z Hiszpańską Krajową Siecią Biobanków, i zostały przetworzone zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi. Protokół badania został zatwierdzony przez Komisję Etyki Lekarskiej Szpitala Uniwersyteckiego Vall d’Hebron [PR(AG)46/2019] i jest zgodny z zasadami określonymi w Deklaracji Helsińskiej.
Analiza statystyczna:
Aby zoptymalizować jakość danych, odrzucono odczyty o ekstremalnych wartościach Ct (Ct poniżej 11 lub Ct powyżej 39). Obliczono średnią Cts i odchylenie standardowe dla każdego z miRNA w różnych analizowanych próbkach (technicznie w trzech powtórzeniach). Aby poprawić jakość analizowanych danych, w trzech powtórzeniach z wysokim odchyleniem standardowym (Ct SD większe niż 0,3) wyeliminowano wartość Ct najdalszą od średniej, pozostawiając w sumie co najmniej dwie wartości na miRNA na próbkę. Podobnie dla każdego miRNA wykluczono próbki z mniej niż dwiema ważnymi replikacjami. Aby skorygować potencjalny wkład RNA lub błędy wydajności RT, wartości Ct znormalizowano przy użyciu średniego Ct endogennych odnośników (miR-103a, miR-191, miR-30c, miR-16 i let7a). Względne poziomy ilościowe miRNA (RQ) analizowano przy użyciu Livak i in. metoda 2^(-ΔΔCt), obliczona w następujący sposób ΔCt (docelowy miRNA Ct – uśredniona endogenna Ct kontroli) i różnica (ΔΔCt) pomiędzy grupami porównawczymi (porównanie ΔCt – ΔCt próbka referencyjna. Porównania grupowe przeprowadzono za pomocą testu T lub U-Manna-Whitneya (nieparametrycznego) dla danych ciągłych i testu Fishera dla danych jakościowych. Wartości P mniejsze niż 0,05 uznano za istotne.
Podbadanie metodologiczne:
Podgrupę dorosłych dawców śmierci mózgu (n=4) i dawców po śmierci krążeniowej (n=4) analizowano pod kątem obecności miR-122 i miR-148. Wiadomo, że heparyna ma działanie hamujące w analizie qPCR RNA, a próbki dawców wątroby mogą zawierać ślady heparyny, ponieważ jest ona stosowana w celu uniknięcia tworzenia się skrzepów podczas pobierania narządów. W literaturze stosowano heparynazę I w celu przezwyciężenia efektu hamowania heparyny.
W tym badaniu cząstkowym próbki traktowano 0 IU, 6 IU lub 12 IU heparynazy I w celu oceny przeciwdziałającego wpływu heparynazy I na poziomy wykrywania miRNA metodą RT-qPCR.
Typ studiów
Zapisy (Rzeczywisty)
Kontakty i lokalizacje
Lokalizacje studiów
-
-
-
Barcelona, Hiszpania, 08035
- Vall d Hebron University Hospital
-
-
Kryteria uczestnictwa
Kryteria kwalifikacji
Wiek uprawniający do nauki
- Dorosły
- Starszy dorosły
Akceptuje zdrowych ochotników
Metoda próbkowania
Badana populacja
Pobrano prospektywnie czternaście połączonych perfuzatów, biopsji wątroby i próbek surowicy od dawców ze śmiercią mózgu (DBD, n=14) i dawców po śmierci krążeniowej (DCD, n=14).
Pobrano prospektywnie trzy połączone perfuzaty, biopsje wątroby i próbki surowicy od dawców zmarłych w wyniku śmierci mózgu, odrzuconych do przeszczepienia z powodu znacznego stłuszczenia (DBDd, n=3).
Pobrano prospektywnie siedem próbek surowicy od zdrowych osób kontrolnych poddawanych planowej cholecystektomii (kontrola, n=7).
Badanie jednoośrodkowe z udziałem próbek pobranych w szpitalu uniwersyteckim Vall d'Hebron w Hiszpanii w okresie od października 2019 r. do maja 2021 r.
Opis
I) Główne grupy dawców (DBD i DCD):
Kryteria włączenia:
- Dorośli zmarli dawcy wątroby
Kryteria wykluczenia:
- Dawcy pediatryczni (poniżej 18 roku życia)
- Dawcy w przypadkach retransplantacji
- Dawcy, którzy przeszli technikę podziału lub podziału wątroby w celu uzyskania dwóch małych przeszczepów dla dwóch biorców (dorosłych i dzieci).
II) Odrzucone przeszczepy DBD:
Kryteria włączenia:
- Przeszczepy nie nadające się do przeszczepienia ze względu na umiarkowane (30% do 60%) lub ciężkie (ponad 60%) stłuszczenie wątroby.
Kryteria wykluczenia:
- Nieużyteczne przeszczepy odrzucane z innych powodów.
- Dawcy pediatryczni (poniżej 18 roku życia)
- Dawcy w przypadkach retransplantacji
- Dawcy, którzy przeszli technikę podziału lub podziału wątroby w celu uzyskania dwóch małych przeszczepów dla dwóch biorców (dorosłych i dzieci).
III) Grupa kontrolna:
Kryteria włączenia:
- Takie same kryteria włączenia jak w programie żywych dawców wątroby w naszym ośrodku: wiek od 18 do 60 lat, prawidłowa czynność wątroby, badanie USG bez cech choroby wątroby i stłuszczenie poniżej 30%.
Kryteria wykluczenia:
- Pacjenci z przedoperacyjnymi nieprawidłowymi wynikami testów czynności wątroby.
Plan studiów
Jak projektuje się badanie?
Szczegóły projektu
Kohorty i interwencje
Grupa / Kohorta |
Interwencja / Leczenie |
|---|---|
|
Dawcy mózgu śmierci (DBD)
Przeszczepy wątroby od dawców ze śmiercią mózgu podlegają ogólnoustrojowym zmianom hemodynamicznym, zapalnym i endokrynologicznym w trakcie leczenia dawczego z powodu ustania aktywności pnia mózgu.
|
Badanie obserwacyjne z pobraniem próbek surowicy, tkanki wątroby i płynu perfuzatu od dawców wątroby. W ramach badania nie przeprowadzono żadnych konkretnych interwencji u dawców. Próbki analizowano pod kątem specyficznej ekspresji mikroNA metodą RT-qPCR. *Grupa kontrolna: z tej grupy pobrano wyłącznie próbki surowicy. |
|
Dawcy po śmierci krążeniowej (DCD)
Dawcy zmarły krążeniowo nie cierpią na objawy fizjologiczne związane ze śmiercią mózgu, co przypomina prawie dawstwo od żywego dawcy.
Jednakże po wycofaniu środków podtrzymujących życie przeszczepy te ulegają uszkodzeniu w wyniku ciężkiego niedokrwienia.
|
Badanie obserwacyjne z pobraniem próbek surowicy, tkanki wątroby i płynu perfuzatu od dawców wątroby. W ramach badania nie przeprowadzono żadnych konkretnych interwencji u dawców. Próbki analizowano pod kątem specyficznej ekspresji mikroNA metodą RT-qPCR. *Grupa kontrolna: z tej grupy pobrano wyłącznie próbki surowicy. |
|
Odrzucone DBD (dDBD)
Przeszczepy wątroby od dawców ze śmiercią mózgu, które nie nadawały się do użytku z powodu umiarkowanego do ciężkiego stłuszczenia.
Wątroby stłuszczone są podatne na uszkodzenia konserwujące, co skutkuje większym odsetkiem pierwotnych zaburzeń czynnościowych, wczesnych dysfunkcji przeszczepu alloprzeszczepowego oraz powikłań naczyniowych i żółciowych po przeszczepieniu
|
Badanie obserwacyjne z pobraniem próbek surowicy, tkanki wątroby i płynu perfuzatu od dawców wątroby. W ramach badania nie przeprowadzono żadnych konkretnych interwencji u dawców. Próbki analizowano pod kątem specyficznej ekspresji mikroNA metodą RT-qPCR. *Grupa kontrolna: z tej grupy pobrano wyłącznie próbki surowicy. |
|
Grupa kontrolna
Przed nacięciem pobrano próbki surowicy od zdrowych pacjentów, którzy przeszli planową cholecystektomię z powodu objawowej kamieni żółciowych.
Pacjenci objęci badaniem mieli podobne cechy, zgodnie z polityką ośrodka dotyczącą żywych dawców wątroby: wiek od 18 do 60 lat, prawidłowa czynność wątroby i brak stłuszczenia w badaniu ultrasonograficznym.
|
Badanie obserwacyjne z pobraniem próbek surowicy, tkanki wątroby i płynu perfuzatu od dawców wątroby. W ramach badania nie przeprowadzono żadnych konkretnych interwencji u dawców. Próbki analizowano pod kątem specyficznej ekspresji mikroNA metodą RT-qPCR. *Grupa kontrolna: z tej grupy pobrano wyłącznie próbki surowicy. |
Co mierzy badanie?
Podstawowe miary wyniku
Miara wyniku |
Opis środka |
Ramy czasowe |
|---|---|---|
|
Profil ekspresji miRNA u różnych typów dawców wątroby.
Ramy czasowe: Gromadzenie danych od dawców regionalnych w okresie dwóch lat w oparciu o dostępność dawców i dostępność głównego badacza (zbieracza danych). Próbki pobrano podczas pobierania narządów, co u każdego dawcy zajmuje ponad 4–6 godzin.
|
Porównanie profilu ekspresji miRNA (miR-122 i miR-148a, miR-222, miR-22 i miR-155) od dawców mózgu zmarłego i dawców śmierci krążeniowej w biopsjach wątroby, surowicy i roztworze perfuzyjnym
|
Gromadzenie danych od dawców regionalnych w okresie dwóch lat w oparciu o dostępność dawców i dostępność głównego badacza (zbieracza danych). Próbki pobrano podczas pobierania narządów, co u każdego dawcy zajmuje ponad 4–6 godzin.
|
Współpracownicy i badacze
Sponsor
Współpracownicy
Śledczy
- Dyrektor Studium: Ramon Charco, MD, PhD, Chief of HPB surgery and Transplant Department in Vall d Hebron University Hospital
- Dyrektor Studium: Concepción Gómez-Gavara, MD, PhD, HPB surgery and Liver Transplant consultant in Vall d Hebron University Hospital
Daty zapisu na studia
Główne daty studiów
Rozpoczęcie studiów (Rzeczywisty)
Zakończenie podstawowe (Rzeczywisty)
Ukończenie studiów (Rzeczywisty)
Daty rejestracji na studia
Pierwszy przesłany
Pierwszy przesłany, który spełnia kryteria kontroli jakości
Pierwszy wysłany (Rzeczywisty)
Aktualizacje rekordów badań
Ostatnia wysłana aktualizacja (Rzeczywisty)
Ostatnia przesłana aktualizacja, która spełniała kryteria kontroli jakości
Ostatnia weryfikacja
Więcej informacji
Terminy związane z tym badaniem
Słowa kluczowe
Inne numery identyfikacyjne badania
- PR(AG)46/2019
Plan dla danych uczestnika indywidualnego (IPD)
Planujesz udostępniać dane poszczególnych uczestników (IPD)?
Informacje o lekach i urządzeniach, dokumenty badawcze
Bada produkt leczniczy regulowany przez amerykańską FDA
Bada produkt urządzenia regulowany przez amerykańską FDA
produkt wyprodukowany i wyeksportowany z USA
Te informacje zostały pobrane bezpośrednio ze strony internetowej clinicaltrials.gov bez żadnych zmian. Jeśli chcesz zmienić, usunąć lub zaktualizować dane swojego badania, skontaktuj się z register@clinicaltrials.gov. Gdy tylko zmiana zostanie wprowadzona na stronie clinicaltrials.gov, zostanie ona automatycznie zaktualizowana również na naszej stronie internetowej .