Profil de microARN en tant que biomarqueur des lésions hépatiques chez différents types de donneurs de foie.

Entre octobre 2019 et mai 2021, des perfusats, des biopsies hépatiques et des échantillons de sérum ont été collectés de manière prospective auprès de donneurs d'organes adultes décédés à l'hôpital universitaire Vall d'Hebron, à Barcelone, en Espagne.

Des échantillons provenant de donneurs adultes en mort cérébrale humaine (n = 10) et de donneurs après mort circulatoire (n = 10) ont été analysés pour détecter la présence de miR-122, miR-148, miR-155, miR-22, miR-222 et du ratio miR122. /miR222, biomarqueurs cibles des lésions hépatiques sélectionnés dans la littérature.

Pour définir les profils de miARN de référence, un sous-groupe de donneurs avec des greffons inutilisables en raison d'une stéatose significative (n = 3) ont été analysés.

Les donneurs destinés à une retransplantation, pédiatriques et fractionnés ont été exclus pour éviter les blessures liées à la biopsie.

Comme il n'y a eu aucune inclusion de donneurs vivants au cours de la période d'étude, des échantillons de sérum provenant d'un sous-groupe de témoins sains subissant une cholécystectomie élective (n = 7) ont été analysés.

Cette étude fait partie d'une thèse de doctorat et la collecte de données a été réalisée par le chercheur principal en fonction de la disponibilité des donneurs d'organes dans un centre hospitalier tertiaire de Barcelone, en Espagne. En raison de contraintes de ressources limitées, la taille de l'échantillon a été limitée aux échantillons consécutifs obtenus sur une période de 2 ans.

Un consentement éclairé écrit a été obtenu des patients et des proches des donneurs inclus dans l'étude. Les échantillons et les données des patients ont été fournis par la biobanque de l'hôpital universitaire Vall d'Hebron (PT20/00107), intégrée au réseau national espagnol de biobanques, et ont été traités selon des procédures opérationnelles standard. Le protocole d'étude a été approuvé par le comité d'éthique médicale de l'hôpital universitaire Vall d'Hebron [PR(AG)46/2019] et est conforme aux principes énoncés dans la Déclaration d'Helsinki.

Analyse statistique :

Pour optimiser la qualité des données, les lectures avec des valeurs Ct extrêmes (Ct inférieures à 11 ou Ct supérieures à 39) ont été rejetées. La moyenne des Cts et l'écart type de chacun des miARN dans les différents échantillons analysés (triplicates techniques) ont été calculés. Pour améliorer la qualité des données analysées, en triple avec un écart type élevé (Ct SD supérieur à 0,3), la valeur Ct la plus éloignée de la moyenne a été éliminée, laissant un total d'au moins deux valeurs par miARN et par échantillon. De même, pour chaque miARN, les échantillons comportant moins de deux répétitions valides ont été exclus. Pour corriger les biais potentiels d'entrée d'ARN ou d'efficacité de RT, les valeurs de Ct ont été normalisées en utilisant le Ct moyen des références endogènes (miR-103a, miR-191, miR-30c, miR-16 et let7a). Les niveaux de quantification relative (RQ) des miARN ont été analysés à l'aide de Livak et al. méthode 2 ^ (-ΔΔCt), calculée comme suit ΔCt (cible miARN Ct - contrôle endogène moyen Ct) et la différence (ΔΔCt) entre les groupes de comparaison (comparaison ΔCt - échantillon de référence ΔCt. Les comparaisons de groupes ont été effectuées à l'aide du test T ou de U-Mann Whitney (non paramétrique) pour les données continues et du test de Fisher pour les données qualitatives. Les valeurs P inférieures à 0,05 ont été considérées comme significatives.

Sous-étude de méthodologie :

Un sous-groupe de donneurs adultes en mort cérébrale humaine (n = 4) et de donneurs après mort circulatoire (n = 4) ont été analysés pour détecter la présence de miR-122 et de miR-148. L'héparine est connue pour avoir un effet inhibiteur dans l'analyse qPCR de l'ARN et les échantillons de foie des donneurs sont susceptibles de contenir des traces d'héparine, car elle est utilisée pour éviter la formation de thrombus lors du prélèvement d'organes. L'héparinase-I a été utilisée dans la littérature pour surmonter l'effet inhibiteur de l'héparine.

Dans cette sous-étude, les échantillons ont été traités avec 0 UI, 6 UI ou 12 UI d’héparinase-I pour évaluer l’effet neutralisant de l’héparinase I sur les niveaux de détection des miARN par RT-qPCR.