Profilo del microRNA come biomarcatore del danno epatico in diversi tipi di donatori di fegato.
Perfil De MicroRNA Como Biomarcador De Daño Hepático En Diferentes Tipos De Donantes De Hígado (Profilo MicroRNA come biomarcatore del danno epatico in diversi tipi di donatori di fegato).
L'obiettivo di questo studio osservazionale è analizzare l'espressione dei miRNA derivati dal fegato in diversi tipi di donatori di fegato per acquisire una conoscenza approfondita delle caratteristiche fisiologiche distintive dei donatori e trovare potenziali biomarcatori per la valutazione della qualità del trapianto. Le principali domande a cui si propone di rispondere sono:
Esiste un profilo miRNA distintivo tra i donatori dopo la morte del tronco encefalico e i donatori dopo la morte circolatoria?
Il trattamento con eparinasi I è necessario per superare l'interferenza della quantificazione dei miRNA nei campioni di fegato eparinizzati da donatori?
I ricercatori confronteranno l'espressione di miRNA nei donatori dopo la morte del tronco cerebrale e nei donatori dopo la morte circolatoria con I) un sottogruppo di donatori con innesti inutilizzabili a causa di steatosi significativa, 2) e con un sottogruppo di controlli sani sottoposti a colecistectomia elettiva per impostare i profili di miRNA di riferimento in condizioni estreme.
Panoramica dello studio
Stato
Intervento / Trattamento
Descrizione dettagliata
Tra ottobre 2019 e maggio 2021, perfusati, biopsie epatiche e campioni di siero sono stati raccolti in modo prospettico da donatori di organi adulti deceduti presso l'ospedale universitario Vall d'Hebron, Barcellona, Spagna.
Campioni di donatori morti cerebrali umani adulti (n=10) e donatori dopo morte circolatoria (n=10) sono stati analizzati per la presenza di miR-122, miR-148, miR-155, miR-22, miR-222 e rapporto miR122 /miR222, biomarcatori bersaglio di danno epatico selezionati dalla letteratura.
Per impostare i profili di miRNA di riferimento, è stato analizzato un sottogruppo di donatori con innesti inutilizzabili a causa di steatosi significativa (n=3).
I donatori per ritrapianto, pediatrici e suddivisi sono stati esclusi per evitare lesioni correlate alla biopsia.
Poiché non si sono verificate inclusioni di donatori viventi nel periodo di studio, sono stati analizzati campioni di siero provenienti da un sottogruppo di controlli sani sottoposti a colecistectomia elettiva (n = 7).
Questo studio fa parte di una tesi di dottorato e la raccolta dei dati è stata effettuata dal ricercatore principale in base alla disponibilità di donatori di organi in un centro ospedaliero terziario a Barcellona, Spagna. Sulla base dei vincoli di limitazione delle risorse, la dimensione del campione è stata limitata ai campioni consecutivi ottenuti in un periodo di 2 anni.
Il consenso informato scritto è stato ottenuto dai pazienti e dai parenti dei donatori inclusi nello studio. I campioni e i dati dei pazienti sono stati forniti dalla Biobanca dell'Ospedale Universitario Vall d'Hebron (PT20/00107), integrata nella Rete Nazionale Spagnola di Biobanche, e sono stati elaborati seguendo procedure operative standard. Il protocollo dello studio è stato approvato dal comitato di etica medica dell'Ospedale Universitario Vall d'Hebron [PR(AG)46/2019] ed è conforme ai principi delineati nella Dichiarazione di Helsinki.
Analisi statistica:
Per ottimizzare la qualità dei dati, le letture con valori Ct estremi (Ct inferiore a 11 o Ct superiore a 39) sono state scartate. Sono state calcolate la media dei Cts e la deviazione standard per ciascuno dei miRNA nei diversi campioni analizzati (triplicati tecnici). Per migliorare la qualità dei dati analizzati, in triplicati con deviazione standard elevata (Ct SD maggiore di 0,3), il valore Ct più lontano dalla media è stato eliminato, lasciando un totale di almeno due valori per miRNA per campione. Allo stesso modo, per ciascun miRNA, sono stati esclusi i campioni con meno di due repliche valide. Per correggere potenziali input di RNA o bias di efficienza RT, i valori Ct sono stati normalizzati utilizzando il Ct medio di riferimenti endogeni (miR-103a, miR-191, miR-30c, miR-16 e let7a). I livelli di quantificazione relativa (RQ) dei miRNA sono stati analizzati utilizzando il metodo di Livak et al. metodo 2^(-ΔΔCt), calcolato come segue ΔCt (target miRNA Ct - controllo endogeno medio Ct) e la differenza (ΔΔCt) tra i gruppi di confronto (confronto ΔCt - campione di riferimento ΔCt. I confronti tra gruppi sono stati eseguiti utilizzando il test T o U-Mann Whitney (non parametrico) per dati continui e il test Fisher per quelli qualitativi. I valori P inferiori a 0,05 sono stati considerati significativi.
Sottostudio metodologico:
Un sottogruppo di donatori di morte cerebrale umana adulta (n=4) e di donatori dopo morte circolatoria (n=4) è stato analizzato per la presenza di miR-122 e miR-148. È noto che l'eparina ha un effetto inibitore nell'analisi qPCR dell'RNA e i campioni di donatori di fegato tendono a presentare tracce di eparina, poiché viene utilizzata per evitare la formazione di trombi durante il prelievo di organi. L'eparinasi-I è stata utilizzata in letteratura per superare l'effetto inibitore dell'eparina.
In questo sottostudio, i campioni sono stati trattati con 0 UI, 6 UI o 12 UI di eparinasi-I per valutare l'effetto contrastante dell'eparinasi I sui livelli di rilevamento dei miRNA mediante RT-qPCR.
Tipo di studio
Iscrizione (Effettivo)
Contatti e Sedi
Luoghi di studio
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Barcelona, Spagna, 08035
- Vall d Hebron University Hospital
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Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
- Adulto
- Adulto più anziano
Accetta volontari sani
Metodo di campionamento
Popolazione di studio
Quattordici campioni combinati di perfusati, biopsie epatiche e siero sono stati raccolti prospetticamente da donatori con morte cerebrale (DBD, n=14) e donatori dopo morte circolatoria (DCD, n=14).
Tre perfusati combinati, biopsie epatiche e campioni di siero sono stati raccolti in modo prospettico da donatori di morte cerebrale scartati per il trapianto a causa di steatosi significativa (DBDd, n=3).
Sette campioni di siero sono stati raccolti in modo prospettico da controlli sani sottoposti a colecistectomia elettiva (controllo, n=7).
Studio in un unico centro con campioni raccolti presso l'ospedale universitario Vall d'Hebron, Spagna, tra ottobre 2019 e maggio 2021.
Descrizione
I) Principali gruppi di donatori (DBD e DCD):
Criteri di inclusione:
- Donatori di fegato deceduti adulti
Criteri di esclusione:
- Donatori pediatrici (meno di 18 anni)
- Donatori per casi di ritrapianto
- Donatori sottoposti a tecnica di divisione o partizione del fegato per ottenere due piccoli innesti per due riceventi (adulto e pediatrico).
II) Innesti DBD scartati:
Criteri di inclusione:
- Innesti inutilizzabili per il trapianto a causa di steatosi moderata (dal 30% al 60%) o grave (più del 60%) nelle biopsie epatiche.
Criteri di esclusione:
- Innesti inutilizzabili scartati per altri motivi.
- Donatori pediatrici (meno di 18 anni)
- Donatori per casi di ritrapianto
- Donatori sottoposti a tecnica di divisione o partizione del fegato per ottenere due piccoli innesti per due riceventi (adulto e pediatrico).
III) Gruppo di controllo:
Criteri di inclusione:
- Stessi criteri di inclusione del programma di donatori di fegato vivente nel nostro centro: da 18 a 60 anni, funzionalità epatica normale, ecografia senza segni di malattia epatica e steatosi inferiore al 30%.
Criteri di esclusione:
- Pazienti con test di funzionalità epatica alterati preoperatori.
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
Coorti e interventi
Gruppo / Coorte |
Intervento / Trattamento |
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Donatori di cervelli morti (DBD)
Gli innesti di fegato provenienti da donatori morti cerebrali subiscono cambiamenti emodinamici, infiammatori ed endocrini sistemici durante il mantenimento del donatore a causa della cessazione dell'attività del tronco cerebrale.
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Studio osservazionale con raccolta di campioni di siero, tessuto epatico e liquido perfusato da donatori di fegato. Nell’ambito dello studio non sono stati effettuati interventi specifici sui donatori. I campioni sono stati analizzati per l'espressione specifica di microNA mediante RT-qPCR. *Gruppo di controllo: da questo gruppo sono stati raccolti solo campioni di siero. |
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Donatori dopo morte circolatoria (DCD)
I donatori con morte circolatoria non subiscono le caratteristiche fisiologiche della morte cerebrale, quasi rispecchiando una donazione da vivente.
Tuttavia, dopo la sospensione delle misure di sostegno vitale, questi innesti subiscono lesioni dovute a grave ischemia.
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Studio osservazionale con raccolta di campioni di siero, tessuto epatico e liquido perfusato da donatori di fegato. Nell’ambito dello studio non sono stati effettuati interventi specifici sui donatori. I campioni sono stati analizzati per l'espressione specifica di microNA mediante RT-qPCR. *Gruppo di controllo: da questo gruppo sono stati raccolti solo campioni di siero. |
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DBD scartato (dDBD)
Innesti di fegato da donatori di morte cerebrale inutilizzabili a causa di steatosi da moderata a grave.
I fegati grassi sono vulnerabili ai danni da conservazione che comportano un tasso più elevato di mancata funzionalità primaria, disfunzione precoce dell’allotrapianto e complicanze vascolari e biliari post-trapianto
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Studio osservazionale con raccolta di campioni di siero, tessuto epatico e liquido perfusato da donatori di fegato. Nell’ambito dello studio non sono stati effettuati interventi specifici sui donatori. I campioni sono stati analizzati per l'espressione specifica di microNA mediante RT-qPCR. *Gruppo di controllo: da questo gruppo sono stati raccolti solo campioni di siero. |
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Gruppo di controllo
Prima dell'incisione sono stati raccolti campioni di siero di pazienti sani sottoposti a colecistectomia elettiva a causa di calcoli biliari sintomatici.
I pazienti includevano caratteristiche simili condivise secondo la politica del centro sui donatori viventi di fegato: dai 18 ai 60 anni, funzionalità epatica normale e nessuna steatosi agli ultrasuoni.
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Studio osservazionale con raccolta di campioni di siero, tessuto epatico e liquido perfusato da donatori di fegato. Nell’ambito dello studio non sono stati effettuati interventi specifici sui donatori. I campioni sono stati analizzati per l'espressione specifica di microNA mediante RT-qPCR. *Gruppo di controllo: da questo gruppo sono stati raccolti solo campioni di siero. |
Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Profilo di espressione dei miRNA in diversi tipi di donatori di fegato.
Lasso di tempo: Raccolta dati dai donatori regionali in un periodo di due anni in base alla disponibilità del donatore e alla disponibilità del ricercatore principale (raccoglitore dati). I campioni sono stati raccolti durante il prelievo degli organi, che richiede dalle 4 alle 6 ore per ciascun donatore.
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Confrontare il profilo di espressione dei miRNA (miR-122 e miR-148a, miR-222, miR-22 e miR-155) di donatori cerebrali morti e donatori morti circolatori in biopsie epatiche, siero e soluzione di perfusione
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Raccolta dati dai donatori regionali in un periodo di due anni in base alla disponibilità del donatore e alla disponibilità del ricercatore principale (raccoglitore dati). I campioni sono stati raccolti durante il prelievo degli organi, che richiede dalle 4 alle 6 ore per ciascun donatore.
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Collaboratori e investigatori
Sponsor
Collaboratori
Investigatori
- Direttore dello studio: Ramon Charco, MD, PhD, Chief of HPB surgery and Transplant Department in Vall d Hebron University Hospital
- Direttore dello studio: Concepción Gómez-Gavara, MD, PhD, HPB surgery and Liver Transplant consultant in Vall d Hebron University Hospital
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Inizio studio (Effettivo)
Completamento primario (Effettivo)
Completamento dello studio (Effettivo)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (Effettivo)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (Effettivo)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Parole chiave
Altri numeri di identificazione dello studio
- PR(AG)46/2019
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