Forening av spyttaminosyrenivå med OSCC identifisert ved væskekromatografi massespektroskopi (OSCC)

1. Introduksjon:

   Munnkreft er en unormal vekst av vev, som stammer fra vevet i og rundt munnen som er ukoordinert med det omgivende normale vevet. Blant alle orale kreftformer er oral plateepitelkarsinom (OSCC) den vanligste (90 %) maligne epitelneoplasmen i munnhulen. Det er et alarmerende folkehelseproblem i verden på grunn av dets utbredelse, høye forekomst og dødelighet. I følge de siste dataene fra GLOBOCAN 2020, ble 377713 nylig diagnostiserte leppe- og munnhule plateepitelkarsinompasienter diagnostisert over hele verden, noe som er omtrent 2 % av all kreft som er rapportert. Oral plateepitelkarsinom (OSCC) er den sjette vanligste kreftformen på verdensbasis. Nyere globale rapporter tyder på at den største delen av de rapporterte tilfellene er fra Asia (65,8 %), men i Sør-Asia-regionen er munnhulekreft den tredje vanligste kreftformen. En av de kritiske faktorene for den høye dødeligheten av OSCC er at mange av lesjonene i utgangspunktet er asymptomatiske. Som et resultat kommer de på det sene stadiet av sykdommen til legen og har til slutt en dårlig prognose. Forskning viste at når en OSCC er i stadium I, er 5-års overlevelsesraten 80 %, men den synker til 20-40 % når sykdommen er i stadium IV. For diagnostisering av OSCC, etter den første kliniske undersøkelsen, anses fortsatt snittbiopsi etterfulgt av histopatologisk undersøkelse som en gullstandard, men metoden har mange begrensninger. Invasiv prosedyre trenger spesialkompetanse for å ta biopsiprøve fra de representative områdene og trenger sakkyndig histopatolog for bekreftelse. Dessuten er det svært vanskelig eller noen ganger umulig å ta en vevsprøve bak det synlige området som tungebunnen, bakre søyle og i tilfelle begrenset kjeveåpning.

   Menneskelig spytt er sekresjonen fra tre store spyttkjertler parotis, submandibulære, sublinguale og tallrike mindre kjertler som ligger like under slimhinnen i munnhulen. Den består av vann (99,5%), uorganiske salter og enzymer (0,2 %) og proteiner (0,3 %). Det er nyttig for diagnostisering av periodontitt, diabetes mellitus, HIV, dengue, kusma til og med brystkreft, bukspyttkjertelkreft, magekreft, lungekreft og munnhulekreft. I tillegg har det mange fordeler å ta spyttprøver. Å ta spytt er lettere, og trenger ingen invasiv prosedyre eller ekspertise. Dessuten har den en tilstrekkelig mengde produksjon og kan tas av pasienten selv og gjøre prøvetakingsprosedyren billigere. Spyttaminosyrer er de viktige metabolittene for diagnostisering av en kreftpasient. Aminosyre er råproduktet av proteinsyntese. For dette, når en kreftpasient går gjennom en hypermetabolsk og hyperkatabolsk tilstand, er det en sjanse for proteinubalanse. Ettersom etterforskerne vet at aminosyrer er biprodukter av protein, kan det gi oss et hint om tilstanden av ubalanse på grunn av kreft, inkludert oral plateepitelkarsinom. I tillegg er endringer i aminosyrekonsentrasjon i kroppsvæsken til kreftpasienter signifikante ifølge flere studier Massespektrometri er en for tiden brukt plattform for proteomikk eller metabolomikk i biomedisinsk forskning. Som andre spektrometrimetoder som gasskromatografi-massespektrometri (GC-MS), kapillærelektroforese-massespektrometri (CE-MS), todimensjonal elektroforese massespektrometri (2DE-MS), matriseassistert laserdesorpsjon ionisering-tid for flyvning massespektrometri (MALDI-TOF) og overflateforbedret laserdesorpsjonionisering time-of-flight massespektrometri (SELDI-TOF), væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) er mye brukt i dag. Den tillater en rask og effektiv separasjon og karakterisering av analytter i en gitt prøve. Dermed kan det hjelpe til med rask diagnostisering av enhver sykdom ved automatisert analyse av aminosyreprofiler med minimal innsats og utgifter. Mange studier ble utført ved bruk av LC-MS-maskin for spyttanalyse for diagnostisering av flere sykdommer og fant betydelige resultater. Så vidt jeg vet, ble det gjort svært få studier for å finne ut spyttaminosyrenivået fra pasienten som hadde mistanke om oral lesjon ved LC-MS. Dessuten ble det ikke utført noen studie for oral lesjonsdiagnose ved analyse av aminosyreprofil ved bruk av LC-MS i Bangladesh. Målet med denne studien er å finne assosiasjonen mellom spesifikke spyttaminosyrenivåer med pasienten med OSCC ved hjelp av væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS).

2. Begrunnelse:

   OSCC er den 6. vanligste kreftformen på verdensbasis, men i Asia ble den største delen rapportert nylig og i Sørøst-Asia er det den 3. vanligste kreftformen. Dårlig sosioøkonomisk tilstand, mangel på bevissthet og utstrakt bruk av tobakk, betel-quid-tygging og alkoholinntak er hovedfaktorene bak dette. Forskning viste at tidlig diagnose av kreft reduserer dødeligheten og dermed kan forbedre behandlingsresultatet. Som et resultat prøver forskere å finne ut en enkel, rask og pålitelig metode for diagnose av OSCC.

   Selv om skalpell (incisional) biopsi etterfulgt av histopatologisk undersøkelse fortsatt er gullstandarden for diagnostisering av den orale lesjonen, men i tilfelle av bak det synlige området og i begrenset munnåpning er det svært vanskelig å samle den representative prøven. Dessuten er prosedyren invasiv og krever spesialutstyr og ekspertise. I dette aspektet, for å unngå risikoen for invasive prosedyrer og smerte, er kroppsvæskeanalyse interesseområdet for forskeren i dag.

   Blant de andre kroppsvæskene er spytt veldig enkelt å samle, ikke-invasivt og kan ha egenskapen til å diagnostisere OSCC fordi det forblir i kontakten med lesjonen. Den har mye flyt og er rimeligere enn de andre.

   LC-MS-maskinen er nå mye brukt for metabolomikkanalyse over hele verden. Den har kapasitet til å analysere en prøve mer effektivt og innen svært kort tid. Måling av aminosyren og andre komponenter fra spyttet kan enkelt gjøres med denne metoden. På grunn av noen sykdommer er aminosyrekonsentrasjonen av kroppsvæske forskjellig i henhold til flere studier. Etterforskerne mener at for den bangladeshiske befolkningen er det signifikante assosiasjoner mellom flere spyttaminosyrenivåer og OSCC, som kan identifiseres ved LC-MS.

3. Generelt mål:

   For å finne ut assosiasjonen av spyttaminosyrenivåer med oral plateepitelkarsinom (OSCC) identifisert ved væskekromatografi-massespektrometri.

4. Studiested:

   Oral and maxillofacial Surgery Department, Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University (BSMMU) og Bangladesh Reference Institute for Chemical Measurements (BRICM), Science lab, Dhanmondi, Dhaka.

5. Studiepopulasjon:

   Pasienter og deres ledsagere som deltar i utendørs og innendørs klinikk ved Oral- og Kjevekirurgisk avdeling, BSMMU i henhold til inklusjons- og eksklusjonskriterier. Samlet utvalgsstørrelse vil være 110 og 55 i hver gruppe. Tilfeller er orale plateepitelkarsinompasienter bekreftet ved snittbiopsi, og kontroller er relativt samme aldersgruppe og friske individer.

6. Studieeksempel:

   Pasienter som går til avdeling for munn- og kjevekirurgi, histopatologisk diagnostisert som oral plateepitelkarsinom som vil oppfylle seleksjonskriteriene, vil bli valgt ut som tilfeller. Kontrollpersoner vil bli tatt fra friske individer blant behandlere av pasienter nesten fra samme aldersgruppe av tilfeller som opprettholder inklusjonskriteriene. Deltakerne er klassifisert i to grupper Gruppe A (tilfeller): Studiegruppen består av 55 pasienter som har histopatologisk bekreftet oral plateepitelkarsinom (OSCC) Gruppe B (kontroller): Denne gruppen består av 55 friske individer uten noen historie med kreft og uten alvorlige periodontale problemer og tannkaries.

7. Studievariabler:

   • Histopatologisk rapport
   • Nivå av spyttaminosyrer detektert ved væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS)

8. Etiske hensyn:

   Etisk godkjenning for studien vil bli tatt fra Institutional Review Board (IRB) til BSMMU før oppstart av denne studien. Etter at forskningsprotokollen er godkjent av komiteen, vil tillatelse til studien bli hentet fra Institutt for oral og kjevekirurgi, Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University.

   Målene og målene for studien sammen med prosedyren, risikoene, stadiene og fordelene med denne studien vil bli forklart for studieobjektene på et lett forståelig lokalt språk. De vil være trygge på at risikoen for denne forskningen er minimal. Men denne risikoen vil bli behandlet riktig av en spesialist. Hvis det oppstår problemer relatert til biopsiprosedyren eller på grunn av et trinn i denne forskningsaktiviteten, vil de få hele behandlingen gratis. Under og etter forskningsprogrammet vil konfidensialitet opprettholdes strengt. Et ID-nummer vil bli gitt til dem, og det vil være nyttig for forskningsprogrammet. Alle papirene som tilhører dette ID-nummeret vil bli låst på kontoret. Personlig sak vil ikke bli brukt til analyse, produksjon av artikkel og utgivelse. Bare den involverte etterforskeren vil vite alt dette, og ingen vil få informasjonen deres.

   Deres deltakelse i dette forskningsprogrammet er helt frivillig. De kan enten nekte deltakelse eller forlate forskningsprogrammet når som helst. Det vil ikke påvirke behandlingsprosessen deres. Deres juridiske rett vil ikke bli skadet ved å signere samtykkeskjemaet. Et skriftlig informert samtykke vil bli tatt fra alle studieobjektene uten å utnytte noen av deres svakheter. Alle studieobjektene vil bli forsikret om deres konfidensialitet og frihet til å trekke seg fra studiet når som helst.

9. Implementering av resultater:

   Resultatet kan være nyttig for å finne ut sammenhengen mellom spyttaminosyrenivåer og orale plateepitelkarsinom (OSCC) pasienter. Kan derfor være nyttig i tidlig oppdagelse av OSCC.

   Dataene vil være nyttige for fremtidig forskning, og som vil bli betraktet som grunnleggende informasjon for folkehelseavdelingen.

10. Mål og prosedyre:

Målet med studien er å finne sammenhengen mellom spyttaminosyrenivåer og oral plateepitelkarsinom (OSCC). Studien vil bli utført ved Oral and Maxillofacial Surgery Department ved Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University Pasient med histologisk bekreftet OSCC vil bli registrert som tilfeller i studien ved hensiktsmessig praktisk prøvetakingsteknikk for å oppnå ønsket antall. Omtrent samme antall av de friske individene vil bli tatt som kontrollgruppe for sammenligning. Deretter vil spyttet tas fra OSCC-pasienten og fra kontrollgruppen. Etter å ha tatt inn den sterile beholderen og sikret riktig miljø, vil spyttprøven bli fraktet til Designated Reference Institute for Chemical Measurements (DRICM), Science lab, Dhanmondi for analyse med væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) maskin. Med denne maskinen vil nivåene av 6 spesifikke aminosyrer (alanin, valin, glysin, fenylalanin, isoleucin, lysin) bli målt. Dataene innhentet fra hver enkelt vil bli registrert i forhåndsdesignet datainnsamlingsark separat. Dersom deltakerne samtykker i å delta i dette forskningsprogrammet, vil ansvarlig lege informere deltakerne i detalj.