Associação do Nível de Aminoácido Salivar com OSCC Identificado por Cromatografia Líquida Espectroscopia de Massa (OSCC)

1. Introdução:

   O câncer oral é um crescimento anormal do tecido, origina-se do tecido dentro e ao redor da boca, que não está coordenado com o tecido normal circundante. Entre todos os cânceres orais, o carcinoma epidermóide oral (CEO) é a neoplasia epitelial maligna mais comum (90%) da cavidade oral. É um problema de saúde pública alarmante no mundo devido à sua prevalência, alta taxa de incidência e mortalidade. De acordo com os dados recentes do GLOBOCAN 2020, 377.713 pacientes recém-diagnosticados com carcinoma espinocelular de lábio e cavidade oral diagnosticados em todo o mundo, o que representa cerca de 2% de todos os cânceres relatados. O carcinoma epidermóide oral (OSCC) é o 6º câncer mais comum em todo o mundo. Relatórios globais recentes sugerem que a maior parte dos casos relatados é da Ásia (65,8%), mas na região do sul da Ásia, o câncer oral é o terceiro tipo de câncer mais comum. Um dos fatores críticos da alta taxa de mortalidade do OSCC é que inicialmente muitas das lesões são assintomáticas. Como resultado, eles chegam ao médico no estágio avançado da doença e acabam tendo um prognóstico ruim. A pesquisa mostrou que, quando um OSCC está no estágio I, a taxa de sobrevida em 5 anos é de 80%, mas cai para 20-40% quando a doença está no estágio IV. Para o diagnóstico de OSCC, após o exame clínico inicial, a biópsia incisional seguida do exame histopatológico ainda é considerada padrão-ouro, mas o método apresenta muitas limitações. O procedimento invasivo requer conhecimento especial para coletar amostras de biópsia das áreas representativas e precisa de um histopatologista especializado para confirmação. Além disso, colher uma amostra de tecido atrás da área visível, como a base da língua, pilar posterior e no caso de abertura da mandíbula restrita, é muito difícil ou às vezes impossível.

   A saliva humana é a secreção de três glândulas salivares principais, parótida, submandibular, sublingual e numerosas glândulas menores situadas logo abaixo da mucosa da cavidade oral. É composto por água (99,5%), sais inorgânicos e enzimas (0,2%) e proteínas (0,3%). É útil para o diagnóstico de periodontite, diabetes mellitus, HIV, dengue, caxumba, câncer de mama, câncer de pâncreas, câncer gástrico, câncer de pulmão e câncer oral. Além disso, colher amostras de saliva tem muitas vantagens. A coleta de saliva é mais fácil e não requer nenhum procedimento invasivo ou experiência. Além disso, tem produção suficiente e pode ser retirado pelo próprio paciente, barateando o procedimento de coleta de amostras. Os aminoácidos salivares são os metabólitos importantes para o diagnóstico de um paciente com câncer. Aminoácido é o produto bruto da síntese de proteínas. Para isso, quando um paciente com câncer passa por um estado hipermetabólico e hipercatabólico, há chance de desequilíbrio proteico. Como os investigadores sabem que os aminoácidos são subprodutos da proteína, isso pode nos dar uma dica do estado de desequilíbrio devido a qualquer câncer, incluindo o carcinoma de células escamosas oral. Além disso, as mudanças na concentração de aminoácidos no fluido corporal do paciente com câncer são significativas de acordo com vários estudos A espectrometria de massa é uma plataforma atualmente usada para proteômica ou metabolômica na pesquisa biomédica. Como outro método de espectrometria, como cromatografia gasosa-espectrometria de massa (GC-MS), eletroforese capilar-espectrometria de massa (CE-MS), espectrometria de massa de eletroforese bidimensional (2DE-MS), ionização por dessorção a laser assistida por matriz-tempo de voo espectrometria de massa (MALDI-TOF) e espectrometria de massa de tempo de vôo de ionização de dessorção de superfície aprimorada (SELDI-TOF), cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS) é amplamente utilizada hoje em dia. Permite uma separação e caracterização rápida e eficiente de analitos em uma determinada amostra. Assim, pode ajudar no diagnóstico rápido de qualquer doença pela análise automatizada de perfis de aminoácidos com esforço e despesas mínimos. Muitos estudos foram conduzidos usando a máquina LC-MS para análise de saliva para o diagnóstico de várias doenças e encontraram resultados significativos. Que eu saiba, poucos estudos foram feitos para descobrir o nível de aminoácidos salivares do paciente com suspeita de lesão oral por LC-MS. Além disso, nenhum estudo foi realizado para o diagnóstico de lesões orais por análise do perfil de aminoácidos usando LC-MS em Bangladesh. O objetivo deste estudo é descobrir a associação dos níveis de aminoácidos salivares específicos com o paciente de OSCC por Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massas (LC-MS).

2. Justificativa:

   OSCC é o 6º câncer mais comum em todo o mundo, mas na Ásia a maior porção foi relatada recentemente e no Sudeste Asiático é o 3º câncer mais comum. Condições socioeconômicas precárias, falta de consciência e uso generalizado de tabaco, mascar betel quid e ingestão de álcool são os principais fatores por trás disso. A pesquisa mostrou que o diagnóstico precoce do câncer reduz a taxa de mortalidade e, portanto, pode melhorar o resultado do tratamento. Como resultado, os cientistas estão tentando descobrir um método fácil, rápido e confiável de diagnóstico de OSCC.

   Embora a biópsia com bisturi (incisional) seguida de exame histopatológico ainda seja o padrão-ouro para o diagnóstico da lesão oral, mas no caso de atrás da área visível e na abertura bucal restrita, é muito difícil coletar o espécime representativo. Além disso, o procedimento é invasivo e requer equipamentos e conhecimentos especiais. Nesse aspecto, para evitar o risco de procedimentos invasivos e dor, a análise de fluidos corporais é a área de interesse do pesquisador atualmente.

   Entre os outros fluidos corporais, a saliva é muito fácil de coletar, não invasiva e pode ter propriedade para diagnosticar o CCEO porque permanece com o contato com a lesão. Tem bastante vazão e é mais barato que os outros.

   A máquina LC-MS é agora amplamente utilizada para análises metabolômicas em todo o mundo. Tem a capacidade de analisar uma amostra de forma mais eficaz e em muito pouco tempo. Medir o aminoácido e outros componentes da saliva pode ser feito facilmente por este método. Devido a algumas doenças, a concentração de aminoácidos no fluido corporal difere de acordo com vários estudos. Os investigadores acreditam que para a população de Bangladesh existem associações significativas entre vários níveis de aminoácidos salivares e OSCC, que podem ser identificados por LC-MS.

3. Objetivo geral:

   Verificar a associação dos níveis de aminoácidos salivares com o carcinoma epidermóide oral (CEO) identificado por cromatografia líquida-espectrometria de massa.

4. Local de estudo:

   Departamento de Cirurgia Oral e Maxilofacial, Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University (BSMMU) e Bangladesh Reference Institute for Chemical Measurements (BRICM), Science lab, Dhanmondi, Dhaka.

5. População do estudo:

   Pacientes e seus acompanhantes atendidos na clínica externa e interna do Departamento de Cirurgia Bucomaxilofacial da BSMMU de acordo com os critérios de inclusão e exclusão. O tamanho total da amostra será de 110 e 55 em cada grupo. Os casos são os pacientes com carcinoma de células escamosas orais confirmados por biópsia incisional e os controles são relativamente a mesma faixa etária e indivíduos saudáveis.

6. Amostra de estudo:

   Serão selecionados como casos os pacientes atendidos no Departamento de Cirurgia Oral e Maxilofacial, com diagnóstico histopatológico de carcinoma epidermóide oral, que atenderão aos critérios de seleção. Os sujeitos controles serão retirados de indivíduos saudáveis ​​entre os atendentes de pacientes quase da mesma faixa etária dos casos, mantendo-se os critérios de inclusão. Os participantes são classificados em dois grupos Grupo A (Casos): Grupo de estudo composto por 55 pacientes com diagnóstico histopatológico de Carcinoma Espinocelular Oral (CEO) Grupo B (Controles): Grupo composto por 55 indivíduos saudáveis ​​sem histórico de câncer e sem problemas periodontais graves e cárie dentária.

7. Variáveis ​​de estudo:

   • Relatório de histopatologia
   • Nível de aminoácidos salivares detectado por cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS)

8. Consideração ética:

   A autorização ética para o estudo será obtida do Conselho de Revisão Institucional (IRB) da BSMMU antes do início deste estudo. Depois que o protocolo de pesquisa for aprovado pelo comitê, a permissão para o estudo será obtida do Departamento de Cirurgia Oral e Maxilofacial da Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University.

   As metas e objetivos do estudo, juntamente com seu procedimento, riscos, etapas e benefícios deste estudo, serão explicados aos sujeitos do estudo em um idioma local facilmente compreensível. Eles terão a certeza de que o risco desta pesquisa é mínimo. Mas, esse risco será devidamente tratado por médico especialista. Se surgir algum problema relacionado ao procedimento de biópsia ou devido a qualquer etapa desta atividade de pesquisa, eles receberão todo o tratamento gratuitamente. Durante e após o programa de pesquisa, a confidencialidade será estritamente mantida. Um número de identificação será dado a eles e isso será útil para o programa de pesquisa. Todos os papéis pertencentes a este número de identificação serão bloqueados no escritório. Assunto pessoal não será utilizado para análise, produção de artigo e divulgação. Apenas o investigador envolvido saberá de tudo isso e ninguém obterá suas informações.

   Sua participação neste programa de pesquisa é absolutamente voluntária. Eles podem negar a participação ou deixar o programa de pesquisa a qualquer momento. Isso não afetará seu processo de tratamento. Seu direito legal não será prejudicado pela assinatura do formulário de consentimento. Um consentimento informado por escrito será obtido de todos os sujeitos do estudo sem explorar nenhuma de suas fraquezas. Todos os sujeitos do estudo serão assegurados sobre sua confidencialidade e liberdade para se retirarem do estudo a qualquer momento.

9. Implementação de resultados:

   O resultado pode ser útil para descobrir a associação entre os níveis de aminoácidos salivares e pacientes com carcinoma espinocelular oral (OSCC). Assim, pode ser útil na detecção precoce do OSCC.

   Os dados serão úteis para pesquisas futuras e serão considerados informações básicas para o departamento de saúde pública.

10. Objetivo e procedimento:

O objetivo do estudo é descobrir a associação dos níveis de aminoácidos salivares com carcinoma oral de células escamosas (OSCC). O estudo será realizado no Departamento de Cirurgia Oral e Maxilofacial da Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University. como casos no estudo por técnica de amostragem conveniente intencional para atingir o número desejado. Aproximadamente o mesmo número de indivíduos saudáveis ​​será tomado como grupo de controle para comparação. Em seguida, a saliva será retirada do paciente com OSCC e do grupo controle. Depois de receber o recipiente estéril e garantir o ambiente adequado, a amostra de saliva será transportada para o Instituto de Referência Designado para Medições Químicas (DRICM), laboratório de ciências, Dhanmondi para análise por máquina de cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS). Por esta máquina, serão medidos os níveis de 6 aminoácidos específicos (Alanina, Valina, Glicina, Fenilalanina, Isoleucina, Lisina). Os dados obtidos de cada indivíduo serão registrados separadamente em planilha de coleta de dados pré-concebida. Se os participantes concordarem em participar deste programa de pesquisa, o médico responsável informará detalhadamente os participantes.