Ассоциация уровня аминокислот в слюне с OSCC, идентифицированная с помощью жидкостной хроматографии и масс-спектроскопии (OSCC)

1. Введение:

   Рак ротовой полости представляет собой аномальное разрастание ткани, происходящее из тканей во рту и вокруг него, которое не скоординировано с окружающей нормальной тканью. Среди всех раков полости рта плоскоклеточный рак полости рта (ПСК) является наиболее частым (90%) злокачественным эпителиальным новообразованием полости рта. Это тревожная проблема общественного здравоохранения во всем мире из-за его распространенности, высокого уровня заболеваемости и смертности. Согласно последним данным GLOBOCAN 2020, во всем мире диагностировано 377713 пациентов с плоскоклеточным раком губ и полости рта, что составляет около 2% всех зарегистрированных случаев рака. Плоскоклеточная карцинома полости рта (OSCC) является 6-м наиболее распространенным видом рака во всем мире. Недавние глобальные отчеты показывают, что наибольшая часть зарегистрированных случаев приходится на Азию (65,8%), но в регионе Южной Азии рак ротовой полости занимает 3-е место по распространенности. Одним из критических факторов высокой смертности от OSCC является то, что изначально многие поражения протекают бессимптомно. В результате они попадают на поздней стадии заболевания к врачу и в итоге имеют неблагоприятный прогноз. Исследования показали, что, когда OSCC находится в стадии I, 5-летняя выживаемость составляет 80%, но снижается до 20-40%, когда болезнь находится в стадии IV. Для диагностики OSCC после начального клинического обследования инцизионная биопсия с последующим гистопатологическим исследованием по-прежнему считается золотым стандартом, но этот метод имеет много ограничений. Инвазивная процедура требует специальной экспертизы для взятия образца биопсии из репрезентативных областей и требует подтверждения экспертом-гистопатологом. Кроме того, очень сложно, а иногда и невозможно взять образец ткани из-за видимой области, такой как основание языка, задняя дужка и в случае ограниченного открывания челюсти.

   Слюна человека представляет собой секрет трех крупных слюнных желез околоушной, поднижнечелюстной, подъязычной и множества мелких желез, расположенных непосредственно под слизистой оболочкой ротовой полости. Состоит из воды (99,5%), неорганические соли и ферменты (0,2%) и белки (0,3%). Это полезно для диагностики пародонтита, сахарного диабета, ВИЧ, лихорадки денге, эпидемического паротита, даже рака молочной железы, рака поджелудочной железы, рака желудка, рака легких и рака полости рта. Кроме того, взятие образцов слюны имеет много преимуществ. Взятие слюны проще и не требует инвазивных процедур или опыта. Кроме того, он имеет достаточное количество продукции и может быть взят самим пациентом, что удешевляет процедуру забора пробы. Аминокислоты слюны являются важными метаболитами для диагностики онкологического больного. Аминокислота является сырым продуктом синтеза белка. Для этого, когда больной раком проходит через гиперметаболическое и гиперкатаболическое состояние, есть вероятность белкового дисбаланса. Поскольку исследователи знают, что аминокислоты являются побочными продуктами белка, это может дать нам намек на состояние дисбаланса из-за любого рака, включая плоскоклеточный рак полости рта. Кроме того, согласно нескольким исследованиям, изменения концентрации аминокислот в жидкости организма онкологического больного являются значительными. Масс-спектрометрия является в настоящее время используемой платформой для протеомики или метаболомики в биомедицинских исследованиях. Как и другие методы спектрометрии, такие как газовая хроматография-масс-спектрометрия (ГХ-МС), капиллярный электрофорез-масс-спектрометрия (КЭ-МС), масс-спектрометрия с двумерным электрофорезом (2DE-MS), матрично-активированная лазерная десорбция, ионизация-время пролета Масс-спектрометрия (MALDI-TOF) и времяпролетная масс-спектрометрия с лазерной десорбцией и ионизацией с усилением поверхности (SELDI-TOF), жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (LC-MS) широко используются в настоящее время. Это позволяет быстро и эффективно разделить и охарактеризовать аналиты в данном образце. Таким образом, он может помочь в быстрой диагностике любого заболевания путем автоматизированного анализа аминокислотных профилей с минимальными усилиями и затратами. Многие исследования были проведены с использованием машины LC-MS для анализа слюны для диагностики ряда заболеваний и дали значительные результаты. Насколько мне известно, очень мало исследований было проведено для определения уровня аминокислот в слюне у пациента с подозрением на поражение полости рта с помощью ЖХ-МС. Более того, в Бангладеш не проводилось исследований по диагностике поражений полости рта путем анализа аминокислотного профиля с использованием ЖХ-МС. Целью этого исследования является выявление связи конкретных уровней аминокислот в слюне с пациентом с OSCC с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС).

2. Обоснование:

   OSCC является 6-м наиболее распространенным раком в мире, но в Азии самая большая часть была зарегистрирована в последнее время, а в Юго-Восточной Азии он является 3-м наиболее распространенным раком. Основными причинами этого являются плохое социально-экономическое положение, отсутствие сознания и широкое употребление табака, жевание бетеля и употребление алкоголя. Исследования показали, что ранняя диагностика рака снижает уровень смертности и, следовательно, может улучшить результаты лечения. В результате ученые пытаются найти простой, быстрый и надежный метод диагностики OSCC.

   Хотя скальпельная (инцизионная) биопсия с последующим гистопатологическим исследованием по-прежнему является золотым стандартом для диагностики поражения ротовой полости, но в случае за видимой областью и при ограниченном открывании рта очень трудно собрать репрезентативный образец. Кроме того, процедура является инвазивной и требует специального оборудования и опыта. В этом аспекте, чтобы избежать риска инвазивных процедур и боли, анализ жидкости организма в настоящее время является областью интересов исследователей.

   Среди другой жидкости организма слюну очень легко собрать, она неинвазивна и может иметь свойство диагностировать OSCC, поскольку она остается при контакте с поражением. Он имеет большой поток и дешевле, чем другие.

   В настоящее время машина ЖХ-МС широко используется для метаболомного анализа во всем мире. Он способен анализировать образец более эффективно и за очень короткое время. С помощью этого метода можно легко измерить содержание аминокислот и других компонентов в слюне. По данным нескольких исследований, из-за некоторых заболеваний концентрация аминокислот в жидкости организма различается. Исследователи полагают, что для населения Бангладеш существует значительная связь между несколькими уровнями аминокислот в слюне и OSCC, которые могут быть идентифицированы с помощью ЖХ-МС.

3. Общая цель:

   Выяснить связь уровня аминокислот в слюне с плоскоклеточным раком полости рта (ПСК), выявленным методом жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии.

4. Место учебы:

   Отделение челюстно-лицевой хирургии, Медицинский университет Бангабандху Шейха Муджиба (BSMMU) и Бангладешский справочный институт химических измерений (BRICM), научная лаборатория, Дханмонди, Дакка.

5. Исследуемая популяция:

   Пациенты и сопровождающие лица, находящиеся на стационарном и закрытом поликлиниках отделения челюстно-лицевой хирургии БГМУ по критериям включения и исключения. Общий объем выборки составит 110 и 55 человек в каждой группе. Случаи представляют собой пациентов с плоскоклеточным раком полости рта, подтвержденных послеоперационной биопсией, а контрольная группа представляет собой относительно ту же возрастную группу и здоровых людей.

6. Образец исследования:

   Пациенты, посещающие отделение челюстно-лицевой хирургии, с гистопатологическим диагнозом плоскоклеточной карциномы полости рта, которые будут соответствовать критериям отбора, будут отобраны в качестве пациентов. Субъекты контроля будут взяты из числа здоровых лиц из числа сопровождающих больных практически из той же возрастной группы заболевших с соблюдением критериев включения. Участники разделены на две группы. Группа A (случаи): Исследовательская группа состоит из 55 пациентов с гистопатологически подтвержденной плоскоклеточной карциномой полости рта (OSCC). без серьезных проблем с пародонтом и кариесом.

7. Переменные исследования:

   • Гистопатологический отчет
   • Уровень аминокислот в слюне, определенный с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС)

8. Этическое соображение:

   Этическое разрешение для исследования будет получено от Институционального наблюдательного совета (IRB) BSMMU до начала этого исследования. После того, как протокол исследования будет одобрен комитетом, разрешение на исследование будет получено в отделении челюстно-лицевой хирургии Медицинского университета Бангабандху Шейха Муджиба.

   Цели и задачи исследования, а также его процедура, риски, этапы и преимущества этого исследования будут объяснены испытуемым на понятном местном языке. Они будут уверены, что риск этого исследования минимален. Но этот риск будет должным образом рассмотрен врачом-специалистом. Если возникнет какая-либо проблема, связанная с процедурой биопсии или на любом этапе этой исследовательской деятельности, они получат все лечение бесплатно. Конфиденциальность во время и после проведения исследовательской программы будет строго соблюдаться. Им будет присвоен идентификационный номер, и это будет полезно для исследовательской программы. Все бумаги, принадлежащие этому идентификационному номеру, будут заперты в офисе. Личный вопрос не будет использоваться для анализа, создания статьи и публикации. Все это будет знать только вовлеченный следователь, и никто не получит их информацию.

   Их участие в этой исследовательской программе абсолютно добровольное. Они могут либо отказаться от участия, либо выйти из исследовательской программы в любое время. Это не повлияет на процесс их лечения. Их законное право не будет нарушено подписанием формы согласия. Письменное информированное согласие будет получено от всех субъектов исследования без использования их слабостей. Всем субъектам исследования гарантируется их конфиденциальность и свобода отказаться от участия в исследовании в любое время.

9. Внедрение результатов:

   Результат может быть полезен для выявления связи между уровнями аминокислот в слюне и плоскоклеточным раком полости рта у пациентов. Таким образом, может быть полезным для раннего выявления OSCC.

   Эти данные будут полезны для будущих исследований и будут считаться исходной информацией для департамента здравоохранения.

10. Цель и процедура:

Цель исследования - выяснить связь уровней аминокислот в слюне с плоскоклеточным раком полости рта (OSCC). Исследование будет проводиться в отделении челюстно-лицевой хирургии Бангабандху Медицинского университета шейха Муджиба. Пациент с гистологически подтвержденным OSCC будет зачислен. как случаи в исследовании по целенаправленной удобной методике выборки для достижения желаемого числа. Примерно такое же количество здоровых лиц будет взято в качестве контрольной группы для сравнения. Затем будет взята слюна у пациента OSCC и у контрольной группы. После помещения в стерильный контейнер и обеспечения надлежащих условий образец слюны будет доставлен в Назначенный эталонный институт химических измерений (DRICM), научную лабораторию, Дханмонди для анализа с помощью машины жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). С помощью этой машины будут измеряться уровни 6 определенных аминокислот (аланин, валин, глицин, фенилаланин, изолейцин, лизин). Данные, полученные от каждого человека, будут занесены в заранее подготовленный лист сбора данных отдельно. Если участники соглашаются участвовать в этой исследовательской программе, ответственный врач подробно проинформирует участников.