Associazione del livello di aminoacidi salivari con OSCC identificato dalla spettroscopia di massa con cromatografia liquida (OSCC)

1. Introduzione:

   Il cancro orale è una crescita anormale del tessuto, ha origine dal tessuto dentro e intorno alla bocca che non è coordinato con quello del tessuto normale circostante. Tra tutti i tumori orali, il carcinoma orale a cellule squamose (OSCC) è la neoplasia epiteliale maligna più comune (90%) del cavo orale. È un allarmante problema di salute pubblica nel mondo a causa della sua prevalenza, dell'alto tasso di incidenza e della mortalità. Secondo i recenti dati di GLOBOCAN 2020, 377713 pazienti con carcinoma a cellule squamose del labbro e della cavità orale di nuova diagnosi diagnosticati in tutto il mondo, che rappresentano circa il 2% di tutti i tumori segnalati. Il carcinoma orale a cellule squamose (OSCC) è il sesto tumore più comune al mondo. Rapporti globali recenti suggeriscono che la maggior parte dei casi segnalati proviene dall'Asia (65,8%), ma nella regione dell'Asia meridionale, il cancro orale è il terzo tumore più comune. Uno dei fattori critici dell'alto tasso di mortalità dell'OSCC è che inizialmente molte delle lesioni sono asintomatiche. Di conseguenza, arrivano dal medico nella fase avanzata della malattia e alla fine hanno una prognosi infausta. La ricerca ha mostrato che, quando un OSCC è in stadio I, il tasso di sopravvivenza a 5 anni è dell'80% ma scende al 20-40% quando la malattia è in stadio IV. Per la diagnosi di OSCC, dopo l'esame clinico iniziale, la biopsia incisionale seguita dall'esame istopatologico è ancora considerato un gold standard, ma il metodo ha molti limiti. La procedura invasiva richiede competenze speciali per il prelievo di campioni bioptici dalle aree rappresentative e necessita di un istopatologo esperto per la conferma. Inoltre, prelevare un campione di tessuto da dietro l'area visibile come la base della lingua, il pilastro posteriore e in caso di apertura limitata della mascella è molto difficile o talvolta impossibile.

   La saliva umana è la secrezione di tre ghiandole salivari principali parotide, sottomandibolare, sublinguale e numerose ghiandole minori si trovano appena sotto la mucosa della cavità orale. È costituito da acqua (99,5%), sali ed enzimi inorganici (0,2%) e proteine ​​(0,3%). È utile per la diagnosi di parodontite, diabete mellito, HIV, dengue, parotite, persino cancro al seno, cancro al pancreas, cancro gastrico, cancro ai polmoni e cancro orale. Inoltre, prelevare campioni di saliva ha molti vantaggi. Prendere la saliva è più facile e non richiede procedure o competenze invasive. Inoltre, ha una produzione sufficiente e può essere prelevato dal paziente stesso rendendo più economica la procedura di prelievo del campione. Gli amminoacidi salivari sono i metaboliti importanti per la diagnosi di un malato di cancro. L'amminoacido è il prodotto grezzo della sintesi proteica. Per questo, quando un malato di cancro attraversa uno stato ipermetabolico e ipercatabolico, c'è la possibilità di uno squilibrio proteico. Poiché gli investigatori sanno che gli amminoacidi sono i sottoprodotti delle proteine, questo può darci un suggerimento per lo stato di squilibrio dovuto a qualsiasi cancro, incluso il carcinoma a cellule squamose orale. Inoltre, secondo diversi studi, la spettrometria di massa è una piattaforma attualmente utilizzata per la proteomica o la metabolomica nella ricerca biomedica. Come altri metodi di spettrometria come la gascromatografia-spettrometria di massa (GC-MS), l'elettroforesi capillare-spettrometria di massa (CE-MS), la spettrometria di massa con elettroforesi bidimensionale (2DE-MS), la ionizzazione del desorbimento laser assistita da matrice-tempo di volo spettrometria di massa (MALDI-TOF) e spettrometria di massa a tempo di volo di ionizzazione con desorbimento laser potenziato dalla superficie (SELDI-TOF), la cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) è ampiamente utilizzata al giorno d'oggi. Consente una rapida ed efficiente separazione e caratterizzazione degli analiti in un dato campione. Pertanto, può aiutare nella diagnosi rapida di qualsiasi malattia mediante l'analisi automatizzata dei profili di aminoacidi con il minimo sforzo e spesa. Molti studi sono stati condotti utilizzando la macchina LC-MS per l'analisi della saliva per la diagnosi di diverse malattie e hanno trovato risultati significativi. Per quanto ne so, sono stati condotti pochissimi studi per scoprire il livello di aminoacidi salivare dal paziente con sospetta lesione orale mediante LC-MS. Inoltre, nessuno studio è stato condotto per la diagnosi delle lesioni orali mediante analisi del profilo aminoacidico utilizzando LC-MS in Bangladesh. Lo scopo di questo studio è scoprire l'associazione di specifici livelli di aminoacidi salivari con il paziente di OSCC mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS).

2. Fondamento logico:

   L'OSCC è il sesto tumore più comune al mondo, ma in Asia la porzione più grande è stata segnalata di recente e nel sud-est asiatico è il terzo tumore più comune. Le cattive condizioni socio-economiche, la mancanza di coscienza e l'ampio uso di tabacco, la masticazione di betel quid e l'assunzione di alcol sono i principali fattori alla base di questo. La ricerca ha dimostrato che la diagnosi precoce del cancro riduce il tasso di mortalità e quindi può migliorare l'esito del trattamento. Di conseguenza, gli scienziati stanno cercando di scoprire un metodo di diagnosi dell'OSCC semplice, rapido e affidabile.

   Sebbene la biopsia del bisturi (incisionale) seguita dall'esame istopatologico sia ancora il gold standard per la diagnosi della lesione orale, ma nel caso di dietro l'area visibile e con apertura della bocca ristretta è molto difficile raccogliere il campione rappresentativo. Inoltre, la procedura è invasiva e richiede attrezzature e competenze speciali. In questo aspetto, per evitare il rischio di procedure invasive e dolore, l'analisi dei fluidi corporei è oggi l'area di interesse del ricercatore.

   Tra gli altri fluidi corporei, la saliva è molto facile da raccogliere, non invasiva e potrebbe avere la proprietà di diagnosticare l'OSCC perché rimane a contatto con la lesione. Ha un sacco di flusso e meno costoso rispetto agli altri.

   La macchina LC-MS è ora ampiamente utilizzata per l'analisi metabolomica in tutto il mondo. Ha la capacità di analizzare un campione in modo più efficace e in tempi molto brevi. La misurazione dell'amminoacido e di altri componenti dalla saliva può essere facilmente eseguita con questo metodo. A causa di alcune malattie, la concentrazione di aminoacidi nel fluido corporeo varia in base a diversi studi. Gli investigatori ritengono che per la popolazione del Bangladesh esistano associazioni significative tra diversi livelli di aminoacidi salivari e OSCC, che possono essere identificati da LC-MS.

3. Obiettivo generale:

   Per scoprire l'associazione dei livelli di aminoacidi salivari con il carcinoma a cellule squamose orale (OSCC) identificato mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa.

4. Luogo di studio:

   Dipartimento di Chirurgia Orale e Maxillofacciale, Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University (BSMMU) e Bangladesh Reference Institute for Chemical Measurements (BRICM), Science lab, Dhanmondi, Dhaka.

5. Popolazione di studio:

   Pazienti e loro assistenti che frequentano la clinica all'aperto e al coperto del Dipartimento di chirurgia orale e maxillo-facciale, BSMMU secondo i criteri di inclusione ed esclusione. La dimensione totale del campione sarà 110 e 55 in ciascun gruppo. I casi sono i pazienti con carcinoma a cellule squamose orali confermati dalla biopsia incisionale e i controlli sono relativamente della stessa fascia di età e individui sani.

6. Campione di studio:

   I pazienti che frequentano il Dipartimento di Chirurgia Orale e Maxillofacciale, diagnosticati istopatologicamente come carcinoma a cellule squamose orali che soddisferanno i criteri di selezione saranno selezionati come casi. I soggetti di controllo saranno prelevati da individui sani tra gli assistenti di pazienti quasi della stessa fascia di età dei casi mantenendo i criteri di inclusione. I partecipanti sono classificati in due gruppi Gruppo A (casi): il gruppo di studio è composto da 55 pazienti con carcinoma orale a cellule squamose confermato istopatologicamente (OSCC) Gruppo B (controlli): questo gruppo è composto da 55 individui sani senza alcuna storia di cancro e senza gravi problemi parodontali e carie dentali.

7. Variabili di studio:

   • Referto istopatologico
   • Livello di aminoacidi salivari rilevati mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS)

8. Considerazione etica:

   L'autorizzazione etica per lo studio sarà presa dall'Institutional Review Board (IRB) di BSMMU prima dell'inizio di questo studio. Dopo che il protocollo di ricerca sarà approvato dal comitato, il permesso per lo studio sarà preso dal Dipartimento di Chirurgia Orale e Maxillofacciale, Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University.

   Gli scopi e gli obiettivi dello studio insieme alla sua procedura, rischi, fasi e benefici di questo studio saranno spiegati ai soggetti dello studio in una lingua locale facilmente comprensibile. Saranno certi che il rischio di questa ricerca è minimo. Ma questo rischio sarà adeguatamente affrontato dal medico specialista. In caso di problemi relativi alla procedura di biopsia oa causa di qualsiasi fase di questa attività di ricerca, riceveranno l'intero trattamento gratuitamente. Durante e dopo il programma di ricerca la riservatezza sarà mantenuta rigorosamente. Verrà loro assegnato un numero identificativo che sarà utile al programma di ricerca. Tutti i documenti appartenenti a questo numero di identificazione saranno bloccati in ufficio. La materia personale non verrà utilizzata per l'analisi, la produzione di articoli e il rilascio. Solo l'investigatore coinvolto saprà tutto questo e nessuno otterrà le sue informazioni.

   La loro partecipazione a questo programma di ricerca è assolutamente volontaria. Possono negare la partecipazione o abbandonare il programma di ricerca in qualsiasi momento. Ciò non influirà sul loro processo di trattamento. Il loro diritto legale non sarà leso dalla firma del modulo di consenso. Un consenso informato scritto sarà preso da tutti i soggetti dello studio senza sfruttare alcuna delle loro debolezze. A tutti i soggetti dello studio sarà garantita la riservatezza e la libertà di ritirarsi dallo studio in qualsiasi momento.

9. Implementazione dei risultati:

   Il risultato potrebbe essere utile per scoprire l'associazione tra i livelli di aminoacidi salivari e i pazienti con carcinoma a cellule squamose orali (OSCC). Pertanto, potrebbe essere utile nella diagnosi precoce dell'OSCC.

   I dati saranno utili per la ricerca futura e saranno considerati informazioni di base per il dipartimento di sanità pubblica.

10. Scopo e procedura:

Lo scopo dello studio è scoprire l'associazione dei livelli di aminoacidi salivari con il carcinoma a cellule squamose orale (OSCC). Lo studio sarà condotto presso il dipartimento di chirurgia orale e maxillo-facciale della Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University. Verranno arruolati pazienti con OSCC confermato istologicamente come casi nello studio mediante una tecnica di campionamento conveniente intenzionale per ottenere il numero desiderato. Approssimativamente lo stesso numero di individui sani sarà preso come gruppo di controllo per il confronto. Quindi la saliva verrà prelevata dal paziente OSCC e dal gruppo di controllo. Dopo aver preso il contenitore sterile e aver assicurato un ambiente adeguato, il campione di saliva verrà portato all'Istituto di riferimento designato per le misurazioni chimiche (DRICM), laboratorio di scienze, Dhanmondi per l'analisi mediante cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS). Con questa macchina verranno misurati i livelli di 6 amminoacidi specifici (Alanina, Valina, Glicina, Fenilalanina, Isoleucina, Lisina). I dati ottenuti da ciascun individuo saranno registrati separatamente in un foglio di raccolta dati predefinito. Se i partecipanti acconsentono a partecipare a questo programma di ricerca, il medico responsabile informerà i partecipanti in dettaglio.