Associatie van speekselaminozuurniveau met OSCC geïdentificeerd door vloeistofchromatografie massaspectroscopie (OSCC)

1. Invoering:

   Mondkanker is een abnormale groei van weefsel, afkomstig van het weefsel in en rond de mond dat ongecoördineerd is met dat van het omliggende normale weefsel. Van alle orale kankers is oraal plaveiselcelcarcinoom (OSCC) het meest voorkomende (90%) kwaadaardige epitheliale neoplasma van de mondholte. Het is een alarmerend probleem voor de volksgezondheid in de wereld vanwege de prevalentie, hoge incidentie en mortaliteit. Volgens de recente gegevens van GLOBOCAN 2020, werden wereldwijd 377713 nieuw gediagnosticeerde lip- en mondholte-patiënten met plaveiselcelcarcinoom gediagnosticeerd, wat ongeveer 2% van alle gerapporteerde kankers is. Oraal plaveiselcelcarcinoom (OSCC) is wereldwijd de 6e meest voorkomende vorm van kanker. Recente wereldwijde rapporten suggereren dat het grootste deel van de gemelde gevallen uit Azië komt (65,8%), maar in de regio Zuid-Azië is mondkanker de derde meest voorkomende vorm van kanker. Een van de kritieke factoren van het hoge sterftecijfer van OSCC is dat aanvankelijk veel van de laesies asymptomatisch zijn. Hierdoor komen ze in een laat stadium van de ziekte bij de huisarts en hebben uiteindelijk een slechte prognose. Onderzoek toonde aan dat, wanneer een OSCC zich in stadium I bevindt, de 5-jaars overlevingskans 80% is, maar daalt tot 20-40% wanneer de ziekte zich in stadium IV bevindt. Voor de diagnose van OSCC wordt na het eerste klinische onderzoek een incisiebiopsie gevolgd door histopathologisch onderzoek nog steeds als een gouden standaard beschouwd, maar de methode heeft veel beperkingen. Een invasieve procedure vereist speciale expertise voor het nemen van biopsiemonsters uit de representatieve gebieden en heeft een deskundige histopatholoog nodig voor bevestiging. Bovendien is het nemen van een weefselmonster van achter het zichtbare gebied, zoals de basis van de tong, achterste pijler en in het geval van een beperkte kaakopening, erg moeilijk of soms onmogelijk.

   Menselijk speeksel is de afscheiding van drie grote speekselklieren parotis, submandibulaire, sublinguale en talrijke kleine klieren liggen net onder het slijmvlies van de mondholte. Het bestaat uit water (99,5%), anorganische zouten en enzymen (0,2%) en eiwitten (0,3%). Het is nuttig voor de diagnose van parodontitis, diabetes mellitus, HIV, dengue, bof, zelfs borstkanker, alvleesklierkanker, maagkanker, longkanker en mondkanker. Daarnaast heeft het nemen van speekselmonsters veel voordelen. Het nemen van speeksel is gemakkelijker en vereist geen invasieve procedure of expertise. Bovendien heeft het voldoende productie en kan het door de patiënt zelf worden afgenomen, waardoor de procedure voor het nemen van monsters goedkoper wordt. Speekselaminozuren zijn de belangrijke metabolieten voor de diagnose van een kankerpatiënt. Aminozuur is het ruwe product van eiwitsynthese. Hiervoor is er een kans op eiwitonbalans wanneer een kankerpatiënt door een hypermetabolische en hyperkatabole toestand gaat. Aangezien de onderzoekers weten dat aminozuren de bijproducten van eiwitten zijn, kan het ons een aanwijzing geven voor de toestand van onbalans als gevolg van kanker, waaronder oraal plaveiselcelcarcinoom. Bovendien zijn veranderingen in de aminozuurconcentratie in de lichaamsvloeistof van kankerpatiënt significant volgens verschillende studies. Massaspectrometrie is een momenteel gebruikt platform voor proteomics of metabolomics in biomedisch onderzoek. Net als andere spectrometriemethoden zoals gaschromatografie-massaspectrometrie (GC-MS), capillaire elektroforese-massaspectrometrie (CE-MS), tweedimensionale elektroforese-massaspectrometrie (2DE-MS), matrixondersteunde laserdesorptie-ionisatie-vluchttijd massaspectrometrie (MALDI-TOF) en oppervlakte-verbeterde laserdesorptie-ionisatie time-of-flight massaspectrometrie (SELDI-TOF), vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS) wordt tegenwoordig veel gebruikt. Het maakt een snelle en efficiënte scheiding en karakterisering van analyten in een bepaald monster mogelijk. Het kan dus helpen bij een snelle diagnose van elke ziekte door geautomatiseerde analyse van aminozuurprofielen met minimale inspanning en kosten. Er zijn veel onderzoeken uitgevoerd met behulp van een LC-MS-machine voor speekselanalyse voor de diagnose van verschillende ziekten en er zijn significante resultaten gevonden. Voor zover ik weet, zijn er maar heel weinig onderzoeken gedaan om het aminozuurgehalte in het speeksel te achterhalen van de patiënt met vermoedelijke orale laesie door LC-MS. Bovendien is er in Bangladesh geen onderzoek uitgevoerd naar de diagnose van orale laesies door analyse van het aminozuurprofiel met behulp van LC-MS. Het doel van deze studie is om de associatie van specifieke speekselaminozuurniveaus met de patiënt met OSCC te achterhalen door middel van vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS).

2. Grondgedachte:

   OSCC is wereldwijd de 6e meest voorkomende vorm van kanker, maar in Azië werd het grootste deel recent gemeld en in Zuidoost-Azië is het de 3e meest voorkomende vorm van kanker. Slechte sociaal-economische toestand, gebrek aan bewustzijn en wijdverbreid gebruik van tabak, kauwen op betelquid en alcoholgebruik zijn de belangrijkste factoren hierachter. Onderzoek heeft aangetoond dat een vroege diagnose van kanker het sterftecijfer verlaagt en dus het resultaat van de behandeling kan verbeteren. Als gevolg hiervan proberen wetenschappers een gemakkelijke, snelle en betrouwbare methode voor de diagnose van OSCC te vinden.

   Hoewel scalpel (incisie) biopsie gevolgd door histopathologisch onderzoek nog steeds de gouden standaard is voor de diagnose van de orale laesie, maar in het geval van achter het zichtbare gebied en bij beperkte mondopening is het erg moeilijk om het representatieve exemplaar te verzamelen. Bovendien is de procedure invasief en vereist speciale apparatuur en expertise. In dit aspect, om het risico van invasieve procedures en pijn te vermijden, is analyse van lichaamsvloeistoffen tegenwoordig het interessegebied van de onderzoeker.

   Van de andere lichaamsvloeistoffen is speeksel heel gemakkelijk te verzamelen, niet-invasief en kan het de eigenschap hebben om OSCC te diagnosticeren, omdat het in contact blijft met de laesie. Het heeft veel stroom en is goedkoper dan de andere.

   LC-MS-machine wordt nu veel gebruikt voor metabolomics-analyse over de hele wereld. Het heeft de capaciteit om een ​​monster effectiever en in zeer korte tijd te analyseren. Met deze methode kan eenvoudig het aminozuur en andere componenten uit het speeksel worden gemeten. Door sommige ziekten verschilt de aminozuurconcentratie van lichaamsvloeistof volgens verschillende onderzoeken. De onderzoekers zijn van mening dat er voor de Bengaalse bevolking significante associaties zijn tussen verschillende speekselaminozuurniveaus en OSCC, die kunnen worden geïdentificeerd door LC-MS.

3. Algemene doelstelling:

   Om de associatie van speekselaminozuurniveaus met oraal plaveiselcelcarcinoom (OSCC) geïdentificeerd door vloeistofchromatografie-massaspectrometrie te achterhalen.

4. Waar je studeert:

   Afdeling Mond- en Kaakchirurgie, Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University (BSMMU) en Bangladesh Reference Institute for Chemical Measurements (BRICM), Science lab, Dhanmondi, Dhaka.

5. Studiepopulatie:

   Patiënten en hun begeleiders die aanwezig zijn in de buiten- en binnenkliniek van de afdeling Mond- en Kaakchirurgie, BSMMU volgens in- en uitsluitingscriteria. De totale steekproefomvang is 110 en 55 in elke groep. Gevallen zijn de orale plaveiselcelcarcinoompatiënten bevestigd door incisiebiopsie en controles zijn relatief dezelfde leeftijdsgroep en gezonde individuen.

6. Studie monster:

   Patiënten van de afdeling Kaak- en Aangezichtschirurgie, histopathologisch gediagnosticeerd als oraal plaveiselcelcarcinoom, die aan de selectiecriteria voldoen, worden als casus geselecteerd. Controlepersonen zullen worden afgenomen van gezonde individuen onder de begeleiders van patiënten die bijna uit dezelfde leeftijdsgroep van gevallen komen die aan de inclusiecriteria voldoen. De deelnemers worden ingedeeld in twee groepen. Groep A (gevallen): Studiegroep bestaat uit 55 patiënten met histopathologisch bevestigd oraal plaveiselcelcarcinoom (OSCC) Groep B (controlegroep): Deze groep bestaat uit 55 gezonde personen zonder enige voorgeschiedenis van kanker en zonder ernstige parodontale problemen en tandcariës.

7. Studievariabelen:

   • Histopathologisch rapport
   • Niveau van speeksel Aminozuren gedetecteerd door vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS)

8. Ethische overweging:

   Ethische toestemming voor de studie zal worden verkregen van de Institutional Review Board (IRB) van BSMMU voorafgaand aan de aanvang van deze studie. Nadat het onderzoeksprotocol is goedgekeurd door de commissie, zal toestemming voor de studie worden verkregen van de afdeling Mond- en Kaakchirurgie, Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University.

   De doelen en doelstellingen van de studie samen met de procedure, risico's, stadia en voordelen van deze studie zullen aan de proefpersonen worden uitgelegd in een gemakkelijk te begrijpen lokale taal. Zij zullen er zeker van zijn dat het risico van dit onderzoek minimaal is. Maar dit risico zal goed worden aangepakt door een gespecialiseerde arts. Als er zich een probleem voordoet met betrekking tot de biopsieprocedure of als gevolg van een stap van deze onderzoeksactiviteit, krijgen ze de hele behandeling gratis. Tijdens en na het onderzoeksprogramma zou de vertrouwelijkheid strikt worden gehandhaafd. Er zal een ID-nummer aan hen worden gegeven en dat zal nuttig zijn voor het onderzoeksprogramma. Alle papieren die bij dit ID-nummer horen, worden op kantoor achter slot en grendel gehouden. Persoonlijke zaken worden niet gebruikt voor analyse, het produceren van artikelen en releases. Alleen de betrokken onderzoeker zal dit allemaal weten en niemand zal hun informatie krijgen.

   Hun deelname aan dit onderzoeksprogramma is geheel vrijwillig. Zij kunnen deelname op elk moment weigeren of het onderzoeksprogramma verlaten. Dat heeft geen invloed op hun behandeltraject. Hun wettelijk recht wordt niet geschaad door het ondertekenen van het toestemmingsformulier. Van alle proefpersonen zal een schriftelijke geïnformeerde toestemming worden gevraagd zonder gebruik te maken van hun zwakheden. Alle proefpersonen zullen verzekerd zijn van hun vertrouwelijkheid en vrijheid om zich op elk moment terug te trekken uit het onderzoek.

9. Implementatie van resultaten:

   Het resultaat kan nuttig zijn om het verband te achterhalen tussen speekselaminozuurniveaus en patiënten met oraal plaveiselcelcarcinoom (OSCC). Het kan dus nuttig zijn bij vroege detectie van OSCC.

   De gegevens zullen nuttig zijn voor toekomstig onderzoek en dat zal worden beschouwd als basisinformatie voor de afdeling volksgezondheid.

10. Doel en procedure:

Het doel van de studie is om de associatie van speekselaminozuurniveaus met oraal plaveiselcelcarcinoom (OSCC) te achterhalen. De studie zal worden uitgevoerd op de afdeling Orale en Maxillofaciale Chirurgie van de Bangabandhu Sheikh Mujib Medical University. Patiënt met histologisch bevestigde OSCC zal worden ingeschreven als gevallen in de studie door doelgerichte handige bemonsteringstechniek om het gewenste aantal te bereiken. Ter vergelijking zal ongeveer hetzelfde aantal gezonde personen als controlegroep worden genomen. Vervolgens wordt het speeksel afgenomen van de OSCC-patiënt en van de controlegroep. Na het innemen van de steriele container en het zorgen voor de juiste omgeving zal het speekselmonster worden vervoerd naar het Designated Reference Institute for Chemical Measurements (DRICM), Science lab, Dhanmondi voor analyse door middel van vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS) machine. Door deze machine worden de niveaus van 6 specifieke aminozuren (Alanine, Valine, Glycine, Phenylalanine, Isoleucine, Lysine) gemeten. De gegevens die van elk individu worden verkregen, worden afzonderlijk vastgelegd in een vooraf ontworpen gegevensverzamelingsblad. Als deelnemers ermee instemmen om aan dit onderzoeksprogramma deel te nemen, zal de verantwoordelijke arts de deelnemers gedetailleerd informeren.