Komercyjna suplementacja DHA

Badacze zrekrutowali 73 ciężarne kobiety w późnym trzecim trymestrze ciąży z kliniki położniczej niskiego ryzyka zgodnie z protokołem zatwierdzonym przez regulamin komisji rewizyjnej badaczy (HRPO nr 10-417). Wszystkim kobietom w klinice zaproponowano udział, a rekrutację przeprowadzono w 34-36 tygodniu ciąży dla tych, które się zgodziły. Kryteria wykluczenia obejmowały stan przedrzucawkowy, cukrzycę ciążową lub cukrzycę przedciążową, przewlekłe stosowanie leków i inne medyczne powikłania ciąży. Dane dotyczące matki, w tym wiek, ciąża, ilość porodów, wiek ciążowy, pochodzenie etniczne, BMI przy porodzie i sposób porodu zostały zebrane zgodnie z wytycznymi ustawy o przenośności i odpowiedzialności w ubezpieczeniach zdrowotnych. Dane noworodków, w tym płeć, masę urodzeniową, wzrost i obwód głowy oraz charakterystykę porodu matki, zebrano po przejrzeniu dokumentacji porodu.

Badani zgodzili się na randomizację do grupy otrzymującej codziennie doustnie 275 mg Promise DHA na bazie oleju rybiego (Biotegrity; Granbury, TX) lub codziennie doustnie 200 mg Expecta DHA na bazie alg (Mead Johnson; Evansville, IN) lub dietetyczne zwyczaje jak zwykle. Przydziały do ​​randomizacji były ukryte w nieprzezroczystych kopertach i ujawnione w momencie rejestracji. W celu udokumentowania stosowania suplementów prowadzono kalendarze, a niewykorzystane suplementy zwracano w momencie przyjęcia do porodu i porodu. Przeprowadzono liczenie pigułek w celu zweryfikowania dokładności kalendarzy.

Uwagi dotyczące wielkości próby: Głównym kryterium oceny wyników przez badaczy był poziom DHA w surowicy matki i krwi pępowinowej noworodka. Aby wykryć 15% wzrost proporcji DHA, wymagałoby to 19-osobowej próby w każdej grupie. To badanie jest badaniem pilotażowym, zaprojektowanym w celu ustalenia, czy większe badanie suplementacji byłoby wykonalne w populacji badaczy.

Pobieranie próbek krwi Próbkę krwi żylnej pobrano od każdego uczestnika w czasie rekrutacji i randomizacji. Krew matki pobierano z dołu łokciowego do probówek zawierających EDTA i przechowywano w temperaturze -4°C. Drugą próbkę matki pobierano w czasie przyjęcia do porodu w podobny sposób. Próbki noworodków pobrano podobnie w momencie porodu, tuż po zaciśnięciu pępowiny. W ciągu 72 godzin od pobrania zidentyfikowano niehemolizowane próbki matek i noworodków, które wirowano przez 5 minut w wirówce klinicznej, po czym porcję osocza ekstrahowano i przechowywano w 2 ml fiolkach w temperaturze -78 stopni C do czasu przeprowadzenia analizy kwasów tłuszczowych.

Analizy kwasów tłuszczowych:

Próbki pozostawiono do rozmrożenia w temperaturze pokojowej i przeprowadzono ekstrakcję lipidów przy użyciu chloroformu/metanolu (2:1, obj./obj.) zgodnie z metodą Folch i in. (1957). Wyekstrahowaną pozostałość lipidową zważono po wysuszeniu w temperaturze 45oC w strumieniu azotu. Całkowity składnik fosfolipidowy surowicy wyizolowano za pomocą chromatografii kolumnowej z kwasem krzemowym (26) z całkowitej frakcji lipidowej otrzymanej przez ekstrakcję 1 ml próbki surowicy mieszaniną chloroform:metanol (2:1, obj./obj.). Kwasy tłuszczowe transestryfikowano w celu wytworzenia estrów metylowych przy użyciu 0,5 N NaOH w metanolu i 14% (wag./obj.) trójfluorku boru w metanolu (27). Kwas undecenowy (Nu-Check Prep, Elysian, MN) dodano przed metylacją i służył jako wzorzec wewnętrzny.

Estry metylowe kwasów tłuszczowych oznaczano ilościowo za pomocą chromatografu gazowego (6890N, Agilent Technologies, Sunnyvale, CA) wyposażonego w automatyczny wstrzykiwacz, system wtrysku kapilarnego typu split/less oraz detektor płomieniowo-jonizacyjny, jak opisano w innym miejscu(28)(). Zastosowano dostosowaną mieszaninę kwasów tłuszczowych opisaną przez Loora i Herbeina (28) i wykonaną z czystych wzorców estrów metylowych, w tym AA i DHA (Nu-Check Prep, Elysian, MN, USA; Sigma, St. Louis, MO, USA) w celu identyfikacji pików i określenia współczynników odpowiedzi do integracji z Chem DataStation (Agilent Technologies, Sunnyvale, CA).