Stowarzyszenie poziomów eotaksyny w surowicy i markerów uszkodzenia mięśnia sercowego u pacjentów poddawanych hemodializie

Projekt badania i populacja pacjentów Niniejsze badanie przekrojowe zostanie przeprowadzone zgodnie z Deklaracją Helsińską i obowiązującymi przepisami. Protokół zostanie przesłany do komisji etycznej placówki i uzyskana zostanie pisemna świadoma zgoda pacjentów. Aby zostać włączeni do badania, pacjenci muszą mieć ukończone 20 lat i przebywać na leczeniu ambulatoryjnym HD przez co najmniej 3 miesiące. Wszyscy pacjenci byli dializowani trzy razy w tygodniu za pomocą membrany wysokoprzepływowej i roztworów dializatu wodorowęglanowego. Pacjenci zostaną wykluczeni, jeśli mieli ostrą infekcję lub nowotwór złośliwy. Do badania losowo zaproszono i włączono ogółem 400 pacjentów z długoterminową HD. Dokumentacja medyczna każdego pacjenta zostanie dokładnie sprawdzona przez lekarza współpracującego w badaniu. Informacje takie jak podstawowa choroba nerek, historia chorób układu krążenia i inne choroby współistniejące są abstrahowane. Istniejącą wcześniej chorobę sercowo-naczyniową zdefiniowano jako historię CAD (w tym przebyty zawał mięśnia sercowego, angioplastykę/stentowanie/operację bajpasów wieńcowych, endarterektomię/stentowanie tętnicy szyjnej), chorobę naczyń mózgowych (CVD, np. udar), chorobę nieurazową. amputacja kończyny dolnej i operacja pomostowania tętnic kończyn dolnych/angioplastyka/stentowanie

Pomiary Próbki krwi przed dializą pobiera się w środku tygodnia. W ciągu 30 minut od pobrania pozostałą krew odwirowuje się przy 3000 g przez 10 minut, natychmiast dzieli na porcje i zamraża w temperaturze -80°C do dalszej analizy. Całkowity cholesterol w surowicy mierzy się poprzez reakcję esterazy cholesterolowej/oksydazy cholesterolowej/peroksydazy, stosując Hitachi 747 (Hitachi, Bohemia, NY, USA). Cholesterol HDL oznacza się ilościowo po wytrąceniu glikolem polietylenowym w temperaturze pokojowej. Stężenie glukozy w surowicy oznacza się metodą oksydazy glukozowej. Cholesterol w lipoproteinach o małej gęstości obliczono za pomocą wzoru Friedewalda. Całkowite stężenie trójglicerydów w surowicy mierzono poprzez reakcję gliceryny/fosforanu/oksydazy i peroksydazy. Poziomy białka C-reaktywnego o wysokiej czułości (hsCRP) w surowicy mierzy się za pomocą Nefelometru Behringa II (Dade Behring, Tokio, Japonia). Poziomy IL-6 i MCP-1 w surowicy mierzy się za pomocą dostępnego w handlu testu immunoenzymatycznego (Quantikine HS Immunoassaykit, R&D System, Minneapolis, MN, USA). Stężenie 8-izoprostanu w surowicy mierzono za pomocą testu ELISA (Cayman Chemical, Ann Arbor, Michigan, USA) z granicą wykrywalności 3 pg/ml, zgodnie z instrukcją producenta.

Poziomy eotaksyny w surowicy zostaną oznaczone przy użyciu dostępnego w handlu zestawu ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) zgodnie z protokołem producenta. W skrócie, mysie przeciwciało przeciwludzkie przeciwko eotaksynie stosuje się do wychwytywania eotaksyny z osocza. Wychwyconą eotaksynę wykrywa się za pomocą biotynylowanego koziego przeciwciała przeciwko ludzkiej eotaksynie. Po przemyciu płytki inkubuje się ze streptawidyną-HRP wywoływaną z odpowiednim substratem i określa się OD450 za pomocą czytnika płytek ELISA. Pomiary przeprowadza się dwukrotnie w teście umożliwiającym wykrycie 10 pg eotaksyny/ml. Wewnątrztestowe i międzytestowe współczynniki zmienności wynoszą odpowiednio <4% i <6%.

Test Siemens Atellica IM High Sensitivity Troponin I (Siemens Healthineers) to trójośrodkowy test immunologiczny typu kanapkowego z granicą wykrywalności 1,6 ng/l i granicą oznaczalności 2,5 ng/l. Górną granicę referencyjną 99 centyl ustalono w próbkach pobranych w 2007 roku od zdrowych osób na poziomie 34 ng/l u kobiet i 53 ng/l u mężczyzn, przy pojedynczym progu wynoszącym 45 ng/l. W populacji z zakresem referencyjnym u 75% pacjentów wartości przekraczały granicę wykrywalności. Wszystkie pomiary przeprowadzono w laboratorium centralnym, które nie miało dostępu do żadnych informacji klinicznych, a wyniki zostały przekazane zespołowi badawczemu i połączone z próbną bazą danych w celu analizy.

Stan redoks albuminy surowicy oznaczono poprzez frakcjonowanie jej na ludzką merkaptalbuminę (HMA), ludzką niemerkaptalbuminę-1 (HNA-1) i ludzką niemerkaptalbuminę-2 (HNA-2) za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC).