Wpływ przerwania długotrwałego siedzenia na tkankę tłuszczową i metabolizm

Oceny przedprocesowe:

Ocena aktywności fizycznej: połączony monitor tętna/akcelerometru był noszony przez 7 dni w celu oceny zwykłego wydatku energetycznego uczestnika na aktywność fizyczną (Actiheart, Cambridge Neurotechnology Ltd., Cambridge, Wielka Brytania). Zostało to przymocowane do lewej klatki piersiowej za pomocą 2 samoprzylepnych elektrod EKG przez 24 godziny na dobę, z wyjątkiem czasu brania prysznica/kąpieli/pływania.

Analiza składu ciała:

Masę ciała oceniono za pomocą wagi cyfrowej po mikcji (TANITA corp., Tokio, Japonia). Obwód talii i bioder oceniano na podstawie wytycznych Światowej Organizacji Zdrowia. Skład ciała określono za pomocą absorpcjometrii rentgenowskiej o podwójnej energii (Discovery, Hologic, Bedford, Wielka Brytania). Masę podskórnej i trzewnej tkanki tłuszczowej w jamie brzusznej oszacowano na podstawie obszaru centralnego pomiędzy L1-L4.

Dni próbne:

W ciągu 72 godzin przed każdą główną próbą uczestnicy zostali poproszeni o powstrzymanie się od wykonywania forsownej aktywności fizycznej. W ciągu 48 godzin przed każdą próbą główną nie wolno było spożywać alkoholu/kofeiny, aw międzyczasie sporządzano zapis diety na 48 godzin przed pierwszą próbą główną. Uczestników poproszono o powtórzenie tej diety przed drugą główną próbą. Ponadto na 48 godzin przed każdym głównym badaniem uczestników poproszono o ograniczenie liczby kroków do mniej niż 4000 kroków dziennie, aby naśladować siedzący tryb życia i wyeliminować wszelkie ostre skutki niedawnej aktywności fizycznej.

Przeprowadzono dwie próby, w tym jedną z przedłużonym siedzeniem i jedną przerywaną z przedłużonym siedzeniem. W próbie wytrzymałościowej, po spożyciu pierwszego posiłku, uczestnicy maszerowali przez 2 minuty na bieżni z prędkością 6,4 km/h co 20 minut przez kolejne 180 minut. Przez resztę czasu uczestnicy siedzieli na krześle. Po 180 minutach podano drugi posiłek. Po zakończeniu drugiego posiłku uczestnicy kontynuowali 2-minutową przerywaną wydłużoną aktywność fizyczną w pozycji siedzącej z tą samą prędkością co 20 minut przez kolejne 120 minut. W sumie uczestnicy wykonali 15 dwuminutowych napadów aktywności fizycznej podczas całej próby, łącznie przez 30 minut, przerywając przedłużoną aktywność fizyczną w pozycji siedzącej. W przedłużonej próbie siedzenia uczestnicy siedzieli na krześle.

Wydychane powietrze, RPE i tętno zbierano podczas dwóch przerwanych spacerów w pozycji siedzącej, aby określić intensywność ćwiczeń i wydatek energetyczny. Ponadto do obliczenia całkowitego wydatku energetycznego podczas siedzenia wzięto dwa 5-minutowe siedzenie wydychanego powietrza i tętno. Podczas każdej próby uczestnikom pozwolono przejść z pozycji siedzącej na bieżnię lub oddać mocz, jeśli było to wymagane. Podczas siedzenia uczestnikom wolno było jedynie czytać, korzystać z laptopa lub oglądać telewizję, ale poza tym proszono ich o zachowanie jak największej ciszy przez cały czas. W pierwszej próbie uczestnicy mogli spożywać wodę ad libitum, a spożyta objętość została powtórzona w drugiej próbie

W każdym głównym badaniu podstawowe próbki krwi pobierano przed pierwszym posiłkiem i co godzinę przez kolejne 5 godzin. Dodatkowe próbki krwi pobierano co 15 min po pierwszym i drugim posiłku. Do każdej próby pobrano łącznie 14 próbek krwi.

Hodowla tkanki tłuszczowej i ekspresja genów:

Po biopsji i oczyszczeniu tkanki tłuszczowej tkankę zmielono do około 5-10 mg i umieszczono bezpośrednio na sterylnych płytkach hodowlanych (Nunc, Roskilde, Dania) z pożywką podstawową dla komórek śródbłonka (ECBM) zawierającą 0,1% albuminy surowicy bydlęcej wolnej od kwasów tłuszczowych 100 U ml-1 penicyliny i 0,1 mg ml-1 streptomycyny (Sigma-Aldrich, Gillingham, Wielka Brytania). Tkankę tłuszczową inkubowano w końcowym stosunku 100 mg tkanki na 1 ml pożywki ECBM przez 3 godziny. Zastosowano inkubator o temperaturze 37°C, 5% CO2 i 95 ± 5% wilgotności względnej (inkubator MCO-18A1C CO2; Sanyo, Osaka, Japonia). Pożywki przeniesiono do sterylnych Eppendorfów i przechowywano w -80°C po 3 godzinach inkubacji. Około 200 mg tkanki tłuszczowej homogenizowano w 5 ml Trizolu w sterylnej probówce wolnej od RNazy/DNazy (Invitrogen, Paisley, Wielka Brytania) i przechowywano w -80°C przed dalszą analizą.

Wielkość próbki:

W poprzednim podobnym badaniu podano przyrostowe pole pod krzywą (iAUC) dla insuliny podczas przerywania przedłużonego siedzenia w porównaniu z przedłużonym siedzeniem odpowiednio 3337 IU L-1 9h-1 i 2470 IU L-1 9h-1. Opierając się na założeniu SD wynoszącym 600 IU L-1 9h-1, potrzebowalibyśmy 9 uczestników, aby wykazali różnicę w iAUC dla insuliny przy 95% mocy i 5% alfa.

Statystyka:

Wszystkie dane przedstawiono jako średnią ± błąd standardowy średniej (SEM). Przyrostowe pole pod krzywą (iAUC) obliczono metodą trapezów, a różnice między próbami przeanalizowano za pomocą sparowanych testów t. Glukozę, insulinę, NEFA, adipokiny i wyniki hodowli komórkowych określono za pomocą dwuczynnikowej analizy ANOVA z powtarzanymi pomiarami przy użyciu SPSS w wersji 22 (IBM, Armonk, NY, USA). Tam, gdzie stwierdzono znaczące interakcje (próba × czas), zastosowano analizę post hoc za pomocą testu t z poprawką Holma-Bonferroniego. Pojedyncze porównania wykorzystywały test t lub odpowiednik nieparametryczny. Istotność statystyczną ustalono na p ≤ 0,05.