Влияние отказа от длительного сидения на жировую ткань и обмен веществ

Досудебные оценки:

Оценка физической активности: комбинированный монитор частоты сердечных сокращений/акселерометр носили в течение 7 дней, чтобы оценить обычный расход энергии участников при физической активности (Actiheart, Cambridge Neurotechnology Ltd., Кембридж, Великобритания). Его прикрепляли к левой груди с помощью 2 клейких ЭКГ-прокладок на 24 часа в сутки, за исключением времени принятия душа/купания/плавания.

Анализ состава тела:

Массу тела оценивали с помощью цифровых весов после опорожнения (TANITA corp., Токио, Япония). Окружность талии и бедер оценивалась в соответствии с рекомендациями Всемирной организации здравоохранения. Состав тела определяли с помощью двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (Discovery, Hologic, Bedford, UK). Массу абдоминальной подкожной и висцеральной жировой ткани оценивали в центральной области между L1-L4.

Пробные дни:

За 72 часа до каждого основного испытания участников просили воздерживаться от любой напряженной физической активности. За 48 часов до каждого основного испытания запрещалось употребление алкоголя/кофеина, а за 48 часов до первого основного испытания велась запись о питании. Участников попросили воспроизвести эту диету до их второго основного испытания. Кроме того, за 48 часов до каждого основного испытания участников просили ограничить количество шагов до 4000 шагов в день, чтобы имитировать малоподвижный образ жизни и устранить любые острые последствия недавней физической активности.

Было проведено два испытания, в том числе одно продолжительное сидение и одно с перерывом в длительном сидении. В пробном испытании после первого приема пищи участники шли 2 минуты по беговой дорожке со скоростью 6,4 км/ч каждые 20 минут в течение следующих 180 минут. В остальное время участники сидели на стульях. Через 180 мин давали 2-й прием пищи. После окончания 2-го приема пищи участники продолжали 2-минутные перерывы в длительной сидячей физической активности с той же скоростью каждые 20 минут в течение следующих 120 минут. В общей сложности участники выполнили 15 двухминутных приступов физической активности на протяжении всего испытания, в общей сложности 30 минут, прерывая длительную сидячую физическую активность. В длительном сидячем испытании участники сидели на стуле.

Выдыхаемый воздух, RPE и частота сердечных сокращений были собраны во время двух перерывов в сидячей прогулке, чтобы определить интенсивность упражнений и расход энергии. Кроме того, два 5-минутных сидения выдыхаемого воздуха и частота сердечных сокращений были взяты для расчета общего расхода энергии во время сидения. Во время каждого испытания участникам разрешалось переходить из сидячего положения на беговую дорожку или, при необходимости, опорожняться. Сидя, участникам разрешалось только читать, пользоваться ноутбуком или смотреть телевизор, но в остальном их просили оставаться как можно более неподвижными. В первом испытании участникам разрешалось потреблять воду без ограничений, а проглоченный объем был воспроизведен во втором испытании.

В каждом основном испытании исходные образцы крови собирали перед 1-м приемом пищи и ежечасно в течение следующих 5 часов. Дополнительные образцы крови собирали каждые 15 минут после первого и второго приема пищи. Всего для каждого испытания было взято 14 образцов крови.

Культура жировой ткани и экспрессия генов:

После биопсии и очистки жировой ткани ткань измельчали ​​примерно до 5–10 мг и сразу же помещали в стерильные культуральные планшеты (Nunc, Roskilde, Дания) с базальной средой для эндотелиальных клеток (ECBM), содержащей 0,1% бычьего сывороточного альбумина, не содержащего жирные кислоты, 100 ед. мл-1 пенициллина и 0,1 мг мл-1 стрептомицина (Sigma-Aldrich, Джиллингем, Великобритания). Жировую ткань инкубировали при конечном соотношении 100 мг ткани на 1 мл среды ECBM в течение 3 часов. Использовали инкубатор при 37°C, 5% CO2 и относительной влажности 95 ± 5% (CO2-инкубатор MCO-18A1C; Sanyo, Осака, Япония). Среду переносили в стерильные эппендорфы и хранили при -80°С после 3-часовой инкубации. Приблизительно 200 мг жировой ткани гомогенизировали в 5 мл тризола в стерильной пробирке без РНКазы/ДНКазы (Invitrogen, Paisley, UK) и хранили при -80°C перед дальнейшим анализом.

Размер образца:

В предыдущем аналогичном исследовании сообщалось об увеличении площади под кривой (iAUC) для инсулина при отказе от продолжительного сидения по сравнению с продолжительным сидением 3337 МЕ л-1 9 ч-1 и 2470 МЕ л-1 9 ч-1 соответственно. Основываясь на предполагаемом стандартном отклонении 600 МЕ л-1 9 ч-1, нам потребуется, чтобы 9 участников продемонстрировали разницу в iAUC для инсулина с мощностью 95% и альфа-значением 5%.

Статистика:

Все данные были представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM). Приращение площади под кривой (iAUC) рассчитывали с использованием метода трапеций, а различия между испытаниями анализировали с помощью парных t-тестов. Глюкоза, инсулин, NEFA, адипокины и результаты клеточных культур определялись с использованием двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями с использованием SPSS версии 22 (IBM, Армонк, Нью-Йорк, США). Там, где были обнаружены значительные взаимодействия (испытание × время), применялся апостериорный анализ с использованием t-критерия с поправкой Холма-Бонферрони. В одиночных сравнениях использовался t-критерий или непараметрический эквивалент. Статистическая значимость была установлена ​​на уровне p ≤ 0,05.