Zmiany biomarkerów z krwi w czasie u pacjentów z gruczolakorakiem trzustki

Jest to jednoinstytucjonalne, prospektywne badanie w Johns Hopkins Hospital, które zostanie przeprowadzone w okresie od 1 stycznia 2015 r. do 31 grudnia 2018 r. Wszyscy pacjenci zgłaszający się do Johns Hopkins Hospital z gruczolakorakiem trzustki (PDAC) w celu oceny leczenia chemioterapią, radioterapią i/lub zabiegiem chirurgicznym zostaną zaproszeni do udziału w tym badaniu, ale tylko ci, którzy wyrażą na to zgodę, zostaną włączeni do badania . Wszystkim pacjentom, którzy wyrażą zgodę na udział w tym badaniu, zostanie pobrana krew (około 50 ml lub 3-4 łyżki stołowe) w momencie postawienia diagnozy, ale przed zastosowaniem jakiegokolwiek leczenia. Po każdym zabiegu zostanie pobrana kolejna krew. Na przykład, ci pacjenci, którzy przechodzą resekcję chirurgiczną, będą również mieli pobieraną krew po resekcji przed wypisem. Ci pacjenci, którzy przechodzą chemioterapię, radioterapię i/lub terapię biologiczną/szczepionkową, będą mieli raz pobraną krew po zakończeniu tego leczenia. Jeśli pacjent przechodzi chemioterapię, a następnie resekcję chirurgiczną, zostanie mu pobrana krew po chemioterapii, ale przed resekcją chirurgiczną, a następnie ponownie po resekcji chirurgicznej, wszystko oprócz próbki krwi przed leczeniem (patrz schemat zawarty w IRB). Przez pierwsze 2 lata po operacji próbki będą pobierane co 3-4 miesiące. Poza tym śledczy będą pobierać próbki co 6 miesięcy przez następne dwa lata. Od wszystkich pacjentów, u których stwierdzono, że żyją i są wolni od choroby po upływie 4 lat od operacji, próbki będą pobierane raz w roku. Ta krew będzie przechowywana w placówce badawczej śledczych i jako taka zostanie oznaczona kodem uniemożliwiającym identyfikację. Jeśli pacjent odmówi dalszego pobrania krwi w dowolnym momencie badania lub nie będzie mógł kontynuować obserwacji, pobrane próbki będą nadal wykorzystywane.

Krew zostanie przetworzona w dniu pobrania, w ciągu 6 godzin od pobrania. Dwadzieścia (20) ml krwi pobranej do dwóch probówek z fioletowymi wieczkami zostanie użytych do izolacji krążących komórek nowotworowych (CTC) za pomocą testu Izolacja na podstawie wielkości nabłonkowych komórek nowotworowych (ISET), który oddziela komórki nowotworowe według wielkości na membranie które można wykorzystać do dalszych eksperymentów. Te 20 ml krwi zostanie zmieszane z buforem ISET zgodnie ze standardowym protokołem i przefiltrowane przez urządzenie ISET na membrany. Błony te będą przechowywane w temperaturze -20 stopni C pod zdezidentyfikowanym numerem i pozostaną w tych warunkach przez kilka lat z pełnym zachowaniem komórek. Zostaną przeprowadzone dalsze eksperymenty na tych membranach, które obejmują barwienie immunofluorescencyjne, mikroskopię wychwytu laserowego i analizę genetyczną. Pozostałe 30 ml krwi, pobrane do probówek z czerwonym i fioletowym wieczkiem, zostanie przetworzone zgodnie ze standardowym protokołem w ciągu 6 godzin od pobrania. Krew zostanie podwójnie odwirowana w celu usunięcia białych krwinek i osocza i zostanie zamrożona. Mutacje genu sterującego scharakteryzowane w wyciętych guzach będą monitorowane za pomocą cyfrowej reakcji łańcuchowej polimerazy kropelkowej (ddPCR), w tym homologu onkogenu wirusowego mięsaka szczurów Kirsten (k-ras), p53, p16/cdkn2a i genu usuniętego w raku trzustki-4 ( DPC4/SMAD4) w celu zidentyfikowania obecności ctDNA i tego, czy poziomy rosną.

Dane będą gromadzone, usuwane z elementów umożliwiających identyfikację i analizowane jako pojedynczy zestaw danych w szpitalu Johns Hopkins. Dane będą pozyskiwane z elektronicznych i papierowych kart klinicznych pacjentów ze szpitala John Hopkins Hospital począwszy od 1 stycznia 2015 r., przy czym gromadzone będą wyłącznie dane istniejące na dzień 1 stycznia 2015 r. Dokładniej, przeglądowi poddane zostaną raporty radiologiczne, chemioterapeutyczne, operacyjne i patologiczne, podsumowania wypisów i notatki kliniczne, a dane z tych źródeł zostaną zebrane. W przypadku pacjentów utraconych z obserwacji, zostanie przeszukany Indeks Zgonów Ubezpieczenia Społecznego (ale nie będzie musiał zbierać numerów ubezpieczenia społecznego) w celu znalezienia dowodów zgonu. Zebrane dane pacjentów zostaną wprowadzone do dedykowanej bazy danych. Dane będą gromadzone wyłącznie w celu skorelowania wyników i charakterystyki guza z biomarkerami zidentyfikowanymi podczas tego badania. Po zgromadzeniu danych i przed analizą wszystkie dane osobowe zostaną usunięte, a podczas analizy statystycznej nie będą dostępne żadne informacje umożliwiające identyfikację. Wygenerowane dane podmiotu nie pojawią się w dokumentacji medycznej podmiotu i zostaną wykorzystane wyłącznie do celów badawczych. Dane zostaną zapisane w chronionej hasłem, bezpiecznej bazie danych w biurze głównego badacza i będą dostępne tylko dla kluczowego personelu. Po zebraniu wszystkich danych dotyczących określonego podmiotu tożsamość podmiotu zostanie usunięta w celu zapewnienia poufności.

Dane zebrane w tym badaniu nie będą wykorzystywane do postępowania klinicznego z jakimkolwiek pacjentem objętym badaniem.

Kryteria włączenia/wyłączenia

Badacze obejmą wszystkich pacjentów zgłaszających się do Johns Hopkins Hospital w celu leczenia z rozpoznaniem gruczolakoraka trzustki. Pacjenci zostaną uwzględnieni tylko wtedy, gdy mają ukończone 18 lat i planują poddać się leczeniu w Johns Hopkins Hospital. Wszyscy pacjenci z nie-pierwotnymi guzami trzustki, guzami neuroendokrynnymi trzustki lub łagodnymi guzami trzustki zostaną wykluczeni. Pacjenci zostaną wykluczeni, jeśli przeszli już jakiekolwiek leczenie w innej placówce.

Badacze zamierzają uwzględnić dane od co najmniej 200 pacjentów w ciągu trzech lat tego badania. Głównym rezultatem będzie identyfikacja biomarkerów we krwi pacjentów z gruczolakorakiem trzustki oraz zmiany tych biomarkerów w czasie w zależności od leczenia. Te biomarkery będą obejmować specyficzne przeciwciała, krążące komórki nowotworowe (CTC) i krążące DNA guza (ctDNA). Wyniki drugorzędowe będą obejmować związek między poziomami biomarkerów przed leczeniem lub zmianami w poziomach biomarkerów a przeżyciem wolnym od choroby i całkowitym przeżyciem, ryzykiem przerzutów, nawrotem choroby i odpowiedzią na leczenie. Charakterystyka pacjenta, guza i chirurgii zostanie zebrana dla wszystkich pacjentów włączonych do tego badania. Różnice między cechami zostaną porównane statystycznie między pacjentami. Ponadto cechy te zostaną przeanalizowane jako możliwe predyktory przeżycia przy użyciu analiz jednowymiarowych i wielowymiarowych za pomocą testu logarytmicznego rang i modeli hazardu proporcjonalnego Coxa. Cechy te będą obejmować:

1. Demografia kliniczna pacjenta i guza, w tym wiek, płeć, rasa, lokalizacja guza pierwotnego, lokalizacja przerzutów, stopień zaawansowania nowotworu i poziomy antygenu węglowodanowego 19-9 (CA19-9) przed i po chemioterapii oraz przed i po resekcji.
2. Zmienne chemioterapii, w tym typ, liczba cykli, odpowiedź i czas (neoadiuwant i/lub adiuwant).
3. Zmienne operacyjne, w tym rodzaj resekcji, liczba usuniętych węzłów chłonnych, bliskość naczyniowa guza, histopatologia oraz śmiertelność i powikłania pooperacyjne.
4. Zmienne długoterminowe, w tym obecność i lokalizacja wznowy oraz status (żywy/martwy).
5. Poziomy określonych biomarkerów w różnych punktach czasowych pobierania krwi.
6. Liczba krążących komórek nowotworowych w każdym punkcie czasowym oprócz mutacji genetycznych obecnych w komórkach.

W przypadku wszystkich pacjentów całkowite przeżycie zostanie obliczone jako czas między datą pierwszego pobrania krwi przed leczeniem a datą ostatniej znanej wizyty kontrolnej lub zgonu, w zależności od tego, co nastąpi wcześniej. W przypadku pacjentów poddawanych resekcji chirurgicznej badacze obliczą czas do nawrotu choroby, mierzony od dnia operacji resekcji trzustki do daty udokumentowanego nawrotu choroby lub zgonu, w zależności od tego, co nastąpi wcześniej. Czas do nawrotu choroby i całkowite przeżycie zostaną opisane za pomocą krzywych Kaplana-Meiera i zostaną porównane za pomocą testu log-rank. Całkowite przeżycie 1- i 5-letnie zostanie oszacowane z 95% przedziałem ufności. Istotność statystyczna zostanie ustalona dla wartości p równej lub niższej od 0,05.

Podstawowe ryzyko dla tego pacjenta będzie związane z pobraniem krwi, ale jest ono nie większe niż minimalne pobranie przez nakłucie żyły i jednorazowo nie zostanie pobrane więcej niż 50 ml. Ogólne ryzyko związane z pobieraniem krwi żylnej obejmuje zasinienie lub niewielkie krwawienie w miejscu nakłucia żylnego, które można opanować poprzez zastosowanie ucisku.

W tym badaniu nie będzie żadnych bezpośrednich korzyści dla pacjentów, ponieważ uzyskane wyniki nie będą wykorzystywane do leczenia tych pacjentów. To badanie może przynieść korzyści przyszłym pacjentom poprzez identyfikację metod wczesnego diagnozowania pacjentów z rakiem trzustki i przewidywanie całkowitego przeżycia, odpowiedzi na leczenie lub ryzyka rozprzestrzeniania się przerzutów oraz przewidywanie nawrotu choroby, z których wszystkie mają potencjalną zaletę w postaci poprawy skutki tej śmiertelnej choroby.

Uczestnikom tego badania nie zostanie przyznana żadna rekompensata. Koszty w tym badaniu będą związane z kosztami pobierania krwi podczas różnych zaplanowanych wizyt w klinice. Te będą minimalne.

Wszyscy pacjenci, którzy wyrażą zgodę na udział w tym badaniu, będą zobowiązani do podpisania formularza zgody na pobranie, przechowywanie i wykorzystanie ich krwi.