Cambiamenti nei biomarcatori dal sangue nel tempo nei pazienti con adenocarcinoma pancreatico

Questo è uno studio prospettico unistituzionale presso il Johns Hopkins Hospital che sarà condotto dal 1 gennaio 2015 al 31 dicembre 2018. Tutti i pazienti che si presentano al Johns Hopkins Hospital con un adenocarcinoma pancreatico (PDAC) per la valutazione del trattamento mediante chemioterapia, radioterapia e/o chirurgia saranno contattati per partecipare a questo studio, ma saranno inclusi solo coloro che acconsentono allo studio . A tutti i pazienti che acconsentono a partecipare a questo studio verrà prelevato sangue (circa 50 ml o 3-4 cucchiai) al momento della diagnosi ma prima della somministrazione di qualsiasi trattamento. Dopo ogni trattamento verrà prelevato altro sangue. Ad esempio, quei pazienti sottoposti a resezione chirurgica avranno anche un prelievo di sangue dopo la resezione prima della dimissione. Quei pazienti sottoposti a trattamento con chemioterapia, radioterapia e/o terapia biologica/vaccinale riceveranno un prelievo di sangue una volta completato il trattamento. Se un paziente viene sottoposto a chemioterapia e quindi a resezione chirurgica, verrà prelevato il sangue dopo la chemioterapia ma prima della resezione chirurgica, e poi di nuovo dopo la resezione chirurgica, il tutto in aggiunta al campione di sangue pre-trattamento (vedere lo schema incluso nell'IRB). Per i primi 2 anni successivi all'intervento i campioni saranno raccolti ogni 3-4 mesi. Oltre a ciò, gli investigatori raccoglieranno campioni ogni 6 mesi per i prossimi due anni. Per tutti i pazienti trovati vivi e liberi da malattia oltre i 4 anni dopo l'intervento chirurgico, i campioni verranno raccolti una volta all'anno. Questo sangue sarà conservato nella struttura di ricerca degli investigatori e come tale sarà etichettato con un codice non identificato. Se un paziente rifiuta ulteriori prelievi di sangue in qualsiasi momento durante lo studio o è perso al follow-up, i campioni che sono stati raccolti verranno comunque utilizzati.

Il sangue verrà processato il giorno del prelievo, entro 6 ore dal prelievo. Venti (20) ml di sangue, raccolti in due provette con tappo viola, saranno utilizzati per l'isolamento delle cellule tumorali circolanti (CTC) attraverso il test Isolation by Size of Epithelial Tumor Cells (ISET), che separa le cellule tumorali in base alla dimensione su una membrana che può essere utilizzato per ulteriori esperimenti. Questi 20 ml di sangue verranno miscelati con il tampone ISET secondo il protocollo standard e filtrati attraverso la macchina ISET sulle membrane. Queste membrane saranno conservate a -20 gradi C sotto un numero non identificato e rimarranno in queste condizioni per diversi anni con la piena conservazione delle cellule. Ulteriori esperimenti saranno condotti su queste membrane, che includono colorazione immunofluorescente, microscopia a cattura laser e analisi genetica. I restanti 30 ml di sangue, raccolti in provette con tappo rosso e viola, saranno processati secondo un protocollo standard entro 6 ore dalla raccolta. Il sangue verrà centrifugato due volte per rimuovere i globuli bianchi e il plasma e verrà congelato. Le mutazioni del gene driver caratterizzate nei tumori resecati saranno monitorate mediante digital droplet Polymerase Chain Reaction (ddPCR), incluso l'omologo dell'oncogene virale del sarcoma di Kirsten rat (k-ras), p53, p16/cdkn2a e il gene Deleted in Pancreatic Cancer-4 ( DPC4/SMAD4) per identificare la presenza di ctDNA e se i livelli sono in aumento.

I dati saranno raccolti, anonimizzati e analizzati come un singolo set di dati presso il Johns Hopkins Hospital. I dati saranno ottenuti dalle cartelle cliniche elettroniche e cartacee dei pazienti del John Hopkins Hospital a partire dal 1/1/2015, con solo i dati esistenti al 1/1/2015 raccolti. Più specificamente, verranno esaminati i referti radiologici, chemioterapici, operativi e patologici, i riepiloghi delle dimissioni e le note cliniche e verranno raccolti i dati da queste fonti. Per i pazienti persi al follow-up, l'indice di morte della previdenza sociale (ma non sarà necessario raccogliere i numeri di previdenza sociale) verrà cercato per le prove della morte. I dati dei pazienti raccolti verranno inseriti in un database dedicato. I dati saranno raccolti solo per correlare i risultati e le caratteristiche del tumore con i biomarcatori identificati durante questo studio. Dopo la raccolta dei dati e prima dell'analisi, tutti gli identificatori personali saranno cancellati e nessuna informazione identificabile sarà presente al momento dell'analisi statistica. I dati del soggetto generati non appariranno nella cartella clinica del soggetto e saranno utilizzati solo a scopo di ricerca. I dati saranno registrati in un database sicuro e protetto da password all'interno dell'ufficio del Principal Investigator e saranno accessibili solo al personale chiave. Dopo che tutti i dati per un particolare soggetto sono stati raccolti, l'identità del soggetto verrà cancellata per garantire la riservatezza.

I dati raccolti in questo studio non saranno utilizzati per la gestione clinica di alcun paziente in studio.

Criteri di inclusione/esclusione

Gli investigatori includeranno tutti i pazienti che si presentano al Johns Hopkins Hospital per il trattamento con una diagnosi di adenocarcinoma pancreatico. I soggetti saranno inclusi solo se hanno più di 18 anni e intendono sottoporsi al trattamento presso il Johns Hopkins Hospital. Saranno esclusi tutti i pazienti con tumori pancreatici non primari, tumori neuroendocrini pancreatici o masse pancreatiche benigne. Saranno esclusi i pazienti che abbiano già subito trattamenti di qualsiasi genere presso altro istituto.

Gli investigatori mirano a includere i dati di almeno 200 pazienti nei tre anni di questo studio. L'esito primario sarà l'identificazione di biomarcatori nel sangue di pazienti con adenocarcinoma pancreatico e i cambiamenti di questi biomarcatori nel tempo in relazione al trattamento. Questi biomarcatori includeranno anticorpi specifici, cellule tumorali circolanti (CTC) e DNA tumorale circolante (ctDNA). Gli esiti secondari includeranno la relazione tra livelli di biomarcatori pre-trattamento o cambiamenti nei livelli di biomarcatori con la sopravvivenza libera da malattia e globale, il rischio di metastasi, la recidiva della malattia e la risposta al trattamento. Le caratteristiche del paziente, del tumore e della chirurgia saranno raccolte per tutti i pazienti inclusi in questo studio. Le differenze tra le caratteristiche saranno confrontate statisticamente tra i pazienti. Inoltre, queste caratteristiche saranno analizzate come possibili predittori di sopravvivenza mediante analisi univariate e multivariate attraverso il log-rank test ei modelli di rischio proporzionale di Cox. Queste caratteristiche includeranno:

1. Dati demografici clinici del paziente e del tumore, inclusi età, sesso, razza, sede del tumore primario, posizione delle metastasi, grado del tumore e livelli di antigene carboidrato 19-9 (CA19-9) prima e dopo la chemioterapia e prima e dopo la resezione.
2. Variabili della chemioterapia inclusi tipo, numero di cicli, risposta e tempistica (neoadiuvante e/o adiuvante).
3. Variabili operatorie tra cui il tipo di resezione, il numero di linfonodi resecati, la vicinanza vascolare del tumore, l'istopatologia e la mortalità post-operatoria e le complicanze.
4. Variabili a lungo termine tra cui presenza e posizione della recidiva e stato (vivo/morto).
5. Livelli di biomarcatori specifici nei vari punti temporali dei prelievi di sangue.
6. Numero di cellule tumorali circolanti in ogni punto temporale oltre alle mutazioni genetiche presenti nelle cellule.

Per tutti i pazienti, la sopravvivenza globale sarà calcolata come il tempo che intercorre tra la data del primo prelievo di sangue prima del trattamento e la data dell'ultima visita di follow-up nota o del decesso, a seconda di quale evento si verifichi per primo. Per i pazienti sottoposti a resezione chirurgica gli investigatori calcoleranno il tempo alla recidiva della malattia misurato dal giorno dell'intervento chirurgico per la resezione pancreatica alla data della recidiva documentata della malattia o del decesso, a seconda di quale evento si verifichi per primo. Il tempo alla recidiva e la sopravvivenza globale saranno descritti con le curve di Kaplan-Meier e saranno confrontati con il log-rank test. Il tasso di sopravvivenza globale a 1 e 5 anni sarà stimato con il suo intervallo di confidenza del 95%. La significatività statistica sarà impostata per un valore p pari o inferiore a 0,05.

I rischi principali per questo paziente saranno associati alla raccolta del sangue, ma non sono altro che una raccolta minima data mediante puntura venosa e non verranno prelevati più di 50 ml alla volta. I rischi generali associati al prelievo di sangue venoso includono lividi o sanguinamento minore nel sito della puntura venosa, che verrebbero gestiti con l'applicazione della pressione.

Non ci sarà alcun beneficio diretto per i pazienti in questo studio, poiché i risultati generati non saranno utilizzati per la gestione di questi pazienti. Questo studio ha il potenziale per avvantaggiare i futuri pazienti identificando metodi per la diagnosi precoce di pazienti con carcinoma pancreatico e prevedendo la sopravvivenza globale, la risposta al trattamento o il rischio di diffusione metastatica e prevedendo la recidiva della malattia, tutti elementi che hanno il potenziale vantaggio di migliorare esiti di questa malattia mortale.

Non ci sarà alcun compenso dato ai soggetti in questo studio. I costi in questo studio saranno correlati al costo dei prelievi di sangue durante le varie visite cliniche programmate. Questi saranno minimi.

Tutti i pazienti che accettano di partecipare a questo studio dovranno firmare un modulo di consenso per la raccolta, la conservazione e l'uso del proprio sangue.