Alterações nos biomarcadores do sangue ao longo do tempo em pacientes com adenocarcinoma pancreático

Este é um estudo prospectivo de instituição única no Hospital Johns Hopkins, que será realizado de 1º de janeiro de 2015 a 31 de dezembro de 2018. Todos os pacientes que se apresentarem no Hospital Johns Hopkins com adenocarcinoma pancreático (PDAC) para avaliação de tratamento por quimioterapia, radioterapia e/ou cirurgia serão abordados para participar deste estudo, mas apenas aqueles que consentirem com o estudo serão incluídos . Todos os pacientes que consentirem em participar deste estudo terão sangue coletado (aproximadamente 50 ml ou 3-4 colheres de sopa) no momento do diagnóstico, mas antes de qualquer tratamento ter sido administrado. Mais sangue será coletado após qualquer tratamento. Por exemplo, aqueles pacientes submetidos à ressecção cirúrgica também terão sangue coletado após a ressecção antes da alta. Aqueles pacientes que se submetem a tratamento com quimioterapia, radioterapia e/ou terapia biológica/vacinal terão coleta de sangue uma vez após a conclusão deste tratamento. Se um paciente for submetido à quimioterapia e depois à ressecção cirúrgica, ele terá sangue coletado após a quimioterapia, mas antes da ressecção cirúrgica, e novamente após a ressecção cirúrgica, tudo além da amostra de sangue pré-tratamento (consulte o esquema incluído no IRB). Nos primeiros 2 anos após a cirurgia, as amostras serão coletadas a cada 3-4 meses. Além disso, os investigadores irão coletar amostras a cada 6 meses pelos próximos dois anos. Para todos os pacientes considerados vivos e livres de doença além de 4 anos após a cirurgia, amostras serão coletadas uma vez por ano. Este sangue será armazenado nas instalações de pesquisa dos investigadores e, como tal, será rotulado com um código não identificado. Se um paciente recusar novas coletas de sangue a qualquer momento durante o estudo ou perder o acompanhamento, as amostras que foram coletadas ainda serão utilizadas.

O sangue será processado no dia da coleta, em até 6 horas após a coleta. Vinte (20) ml de sangue, coletados em dois tubos de tampa roxa, serão utilizados para isolamento de células tumorais circulantes (CTCs) por meio do ensaio Isolation by Size of Epithelial Tumor Cells (ISET), que separa as células tumorais por tamanho em uma membrana que pode ser usado para experimentos posteriores. Esses 20 ml de sangue serão misturados com tampão ISET de acordo com o protocolo padrão e filtrados através da máquina ISET em membranas. Essas membranas serão armazenadas a -20 graus C sob um número não identificado, e permanecerão nessas condições por vários anos com preservação total das células. Mais experimentos serão feitos nessas membranas, que incluem coloração imunofluorescente, microscopia de captura a laser e análise genética. Os 30 ml restantes de sangue, coletados em tubos com tampa vermelha e roxa, serão processados ​​por um protocolo padrão dentro de 6 horas após a coleta. O sangue será centrifugado duas vezes para remover os glóbulos brancos e o plasma e será congelado. As mutações do gene condutor caracterizadas nos tumores ressecados serão monitoradas por Reação em Cadeia da Polimerase (ddPCR) digital, incluindo o homólogo do oncogene viral do sarcoma do rato Kirsten (k-ras), p53, p16/cdkn2a e o gene Deleted in Pancreatic Cancer-4 ( DPC4/SMAD4) para identificar a presença de ctDNA e se os níveis estão aumentando.

Os dados serão coletados, desidentificados e analisados ​​como um único conjunto de dados no Hospital Johns Hopkins. Os dados serão obtidos de prontuários clínicos eletrônicos e em papel do paciente do Hospital John Hopkins a partir de 01/01/2015, com apenas os dados existentes a partir de 01/01/2015 coletados. Mais especificamente, radiologia, quimioterapia, relatórios operatórios e patológicos, resumos de altas e notas clínicas serão revisados ​​e os dados dessas fontes serão coletados. Para pacientes perdidos no acompanhamento, o Índice de Óbitos da Previdência Social (mas não será necessário coletar os números da previdência social) será pesquisado em busca de evidências da morte. Os dados coletados do paciente serão inseridos em um banco de dados dedicado. Os dados serão coletados apenas para correlacionar os resultados e as características do tumor com os biomarcadores identificados durante este estudo. Após o acúmulo de dados e antes da análise, todos os identificadores pessoais serão excluídos e nenhuma informação identificável estará presente no momento da análise estatística. Os dados do sujeito gerados não aparecerão no prontuário médico do sujeito e serão usados ​​apenas para fins de pesquisa. Os dados serão registrados em um banco de dados seguro protegido por senha dentro do escritório do Investigador Principal e serão acessíveis apenas pelo pessoal-chave. Depois que todos os dados de um determinado assunto forem coletados, a identidade do assunto será excluída para garantir a confidencialidade.

Os dados coletados neste estudo não serão usados ​​para o manejo clínico de nenhum paciente do estudo.

Critérios de inclusão/exclusão

Os investigadores incluirão todos os pacientes que se apresentarem no Hospital Johns Hopkins para tratamento com diagnóstico de adenocarcinoma pancreático. Os participantes só serão incluídos se tiverem mais de 18 anos e planejarem se submeter ao tratamento no Hospital Johns Hopkins. Todos os pacientes com tumores pancreáticos não primários, tumores neuroendócrinos pancreáticos ou massas pancreáticas benignas serão excluídos. Serão excluídos os pacientes que já tenham realizado algum tipo de tratamento em outra instituição.

Os investigadores pretendem incluir dados de pelo menos 200 pacientes ao longo dos três anos deste estudo. O desfecho primário será a identificação de biomarcadores no sangue de pacientes com adenocarcinoma pancreático e as mudanças nesses biomarcadores ao longo do tempo em relação ao tratamento. Esses biomarcadores incluirão anticorpos específicos, células tumorais circulantes (CTCs) e DNA tumoral circulante (ctDNA). Os resultados secundários incluirão a relação dos níveis de biomarcadores pré-tratamento ou alterações nos níveis de biomarcadores para sobrevida livre de doença e sobrevida global, risco de metástases, recorrência da doença e resposta ao tratamento. As características do paciente, tumor e cirurgia serão coletadas para todos os pacientes incluídos neste estudo. As diferenças entre as características serão comparadas estatisticamente entre os pacientes. Além disso, essas características serão analisadas como possíveis preditores de sobrevivência por meio de análises univariadas e multivariadas por meio do teste de log-rank e modelos de risco proporcional de Cox. Essas características incluirão:

1. Dados demográficos clínicos do paciente e do tumor, incluindo idade, sexo, raça, localização do tumor primário, localização das metástases, grau do tumor e níveis de antígeno de carboidrato 19-9 (CA19-9) pré e pós-quimioterapia e pré e pós-ressecção.
2. Variáveis ​​da quimioterapia, incluindo tipo, número de ciclos, resposta e tempo (neoadjuvante e/ou adjuvante).
3. Variáveis ​​operatórias, incluindo tipo de ressecção, número de linfonodos ressecados, proximidade vascular do tumor, histopatologia e mortalidade e complicações pós-operatórias.
4. Variáveis ​​de longo prazo, incluindo presença e localização da recorrência e estado (vivo/morto).
5. Níveis de biomarcadores específicos nos vários momentos das coletas de sangue.
6. Número de células tumorais circulantes em cada ponto de tempo, além de mutações genéticas presentes nas células.

Para todos os pacientes, a sobrevida global será calculada como o tempo entre a data da primeira coleta de sangue pré-tratamento até a data da última visita de acompanhamento conhecida ou óbito, o que ocorrer primeiro. Para os pacientes submetidos à ressecção cirúrgica, os investigadores calcularão o tempo até a recorrência da doença medido a partir do dia da cirurgia para ressecção pancreática até a data da recorrência documentada da doença ou morte, o que ocorrer primeiro. O tempo de recorrência da doença e a sobrevida global serão descritos com curvas de Kaplan-Meier e serão comparados pelo teste de log-rank. A taxa de sobrevida global de 1 e 5 anos será estimada com seu intervalo de confiança de 95%. A significância estatística será definida para um valor-p igual ou inferior a 0,05.

Os riscos primários para este paciente estarão associados à coleta de sangue, mas não são mais do que a coleta mínima dada por punção venosa e não serão retirados mais de 50 ml de cada vez. Os riscos gerais associados à coleta de sangue venoso incluem hematomas ou pequenos sangramentos no local da punção venosa, que seriam controlados com a aplicação de pressão.

Não haverá benefício direto para os pacientes neste estudo, pois os resultados gerados não serão usados ​​para o manejo desses pacientes. Este estudo tem o potencial de beneficiar futuros pacientes, identificando métodos para diagnóstico precoce de pacientes com câncer pancreático e prevendo a sobrevida geral, resposta ao tratamento ou risco de disseminação metastática e predizendo a recorrência da doença, todos os quais têm a vantagem potencial de melhorar resultados para esta doença mortal.

Não haverá compensação dada aos sujeitos deste estudo. Os custos neste estudo serão relacionados ao custo das coletas de sangue durante várias visitas clínicas agendadas. Estes serão mínimos.

Todos os pacientes que concordarem em participar deste estudo deverão assinar um termo de consentimento para a coleta, armazenamento e uso de seu sangue.