Badanie podłużne mikroflory jelitowej, skórnej i ślinowej u dzieci z zespołem zapalenia jelit wywołanego pokarmem (SEIPA) (SEIBIOTE)

1.1 Aktualny stan wiedzy Zespół zapalenia jelit wywołanego białkami pokarmowymi (FPIES) to alergia pokarmowa, której częstość występowania wynosi 0,34%, a częstość występowania wynosi 15,4 dzieci na 100 000 rocznie. Jest to alergia niezależna od IgE, objawiająca się wymiotami od 1 do 4 godzin po spożyciu podejrzanego pokarmu (kryteria główne), bez objawów skórnych i oddechowych. Zgodnie z ostatnią definicją (JACI 2017) wymagane są co najmniej 3 mniejsze kryteria związane z wymiotami spośród następujących: drugi podobny epizod wymiotów po spożyciu tego samego pokarmu, pojawienie się powtórnych wymiotów w ciągu 1 do 4 godzin po spożyciu inny pokarm, letarg, wyraźna bladość, konieczność natychmiastowego leczenia lub dożylnego nawodnienia po spożyciu podejrzanego pokarmu, wystąpienie biegunki w ciągu 24 godzin, niedociśnienie lub hipotermia w czasie reakcji. Najczęstszymi pokarmami odpowiedzialnymi za PFIES są mleko krowie, zboża, soja i ryby. Wyzwalacze zależą od kraju, prawdopodobnie w odniesieniu do nawyków żywieniowych. Mediana wieku tolerancji jest późniejsza niż w przypadku innych postaci alergii niezależnej od IgE, a mianowicie między 3 a 5 rokiem życia i jest późniejsza dla pokarmów stałych niż płynnych. Średni wiek nabywania tolerancji na mleko krowie jest różny w literaturze, około 8-10 miesięcy w Korei, około 1 roku w Izraelu, około 5 lat w Stanach Zjednoczonych, ale znacznie później (14 lat), jeśli swoista IgE pojawi się w kolejnych w górę. We Francji nie ma danych na temat wieku peklowania SEIPA w mleku krowim.

Pierwsze wprowadzenie odpowiedzialnego pokarmu proponuje się w wieku 12-18 miesięcy, jeśli diagnoza została postawiona w pierwszych miesiącach życia, a swoiste IgE są ujemne zgodnie z najnowszymi zaleceniami. Niepowodzenie prowokacji pokarmem doustnym (OFC), nowy OFC jest proponowany co 6 miesięcy, aż do wygojenia.

Gdy swoiste IgE są dodatnie, jest to atypowa FPIES, a metody reintrodukcji pokarmu będą zależały od ewolucji IgE.

Związek między mikrobiomem a rozwojem chorób alergicznych jest obecnie dobrze znany. Mikrobiota jelitowa różni się pod względem różnorodności i rozmieszczenia bakterii u pacjentów z alergiami pokarmowymi w porównaniu z pacjentami bez alergii. Mikrobiom odgrywa wczesną rolę w rozwoju układu odpornościowego, a co za tym idzie w rozwoju lub profilaktyce alergii pokarmowych z udziałem szlaku prozapalnego i proalergicznego Th17.

Mikroflorę jelitową ocenia się na podstawie różnorodności bakteryjnej przy użyciu sekwencjonowania RNA16, w szczególności różnorodności alfa (specyficznej dla próbki) i różnorodności beta (porównanie kilku próbek), bogactwa bakteryjnego oraz określenia metabolitów bakteryjnych, takich jak krótkołańcuchowe kwasy tłuszczowe, takie jak maślany, pomiar kalprotektyny w kale, IgA i cytokin wydalanych w kale (np. β-defensyna, TNF-α, białko kationowe eozynofili: ECP).

Niektóre gatunki bakterii miałyby tendencję do przeważania w przypadku alergii lub uczulenia alergicznego, jak na przykład niektóre gatunki Clostridium i inne odgrywałyby rolę ochronną, promując syntezę niektórych krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych i zmniejszając produkcję IL12, IFNγ i IL10.

Patofizjologia FPIES jest obecnie słabo poznana, ponieważ nie ma markera biologicznego, który mógłby potwierdzić diagnozę lub przewidzieć wyleczenie. Występowałby odwracalny częściowy zanik kosmków jelita czczego związany z niespecyficznym zapaleniem jelita krętego i okrężnicy, ale endoskopia przewodu pokarmowego nie jest wykonywana w rutynowej praktyce w celu postawienia diagnozy. W przeciwieństwie do alergii IgE-zależnych, cytokiny Th2 nie są podwyższone u pacjentów z FPIES. Kilka godzin po ekspozycji na odpowiedzialny pokarm obserwuje się wzrost neurotoksyny pochodzącej z eozynofili (EDN) w kale. Zapalenie przewodu pokarmowego związane z alergiami pokarmowymi można również badać za pomocą kalprotektyny lub mleczanu w kale. To zapalenie przewodu pokarmowego może być związane ze wzrostem przepuszczalności jelit i być odpowiedzialne za wymioty, biegunkę i wstrząs hipowolemiczny w wyniku reakcji immunologicznej. Jeśli stężenie kalprotektyny w kale jest mniejsze niż 138 μg/g stolca, można wykluczyć rozpoznanie FPIES. Te wstępne wyniki sugerują zmianę mikroflory jelitowej, obserwowaną w innych formach alergii pokarmowych, ale według naszej wiedzy mikroflora pacjentów z FPIES nigdy nie była badana.

Nasza praca będzie wtedy stanowić pierwsze prospektywne badanie u dzieci z FPIES łączące prezentację i ewolucję kliniczną z mikroflorą kałową, ślinową i skórną.

Opisowa część kliniczna określi wiek w momencie rozpoznania i wiek wyleczenia na podstawie żywności w naszej kohorcie. Badacz opisze różne mniejsze kryteria rozpoznania i związane z nimi objawy, które mogą być elementami diagnostycznymi nieuwzględnionymi w międzynarodowym konsensusie z 2017 roku. Podczas obserwacji badacz oceni ryzyko serokonwersji IgE. Badacz zbada elementy biologiczne podczas reakcji alergicznej, aby ocenić nasilenie reakcji (leukocytoza wielojądrzastych granulocytów obojętnochłonnych, methemoglobinemia).

Główna hipoteza:

Jeśli mikrobiota alergików z FPIES ma charakter prozapalny, podobnie jak w innych alergiach pokarmowych, należy obserwować skład i rozmieszczenie bakterii w zależności od przebiegu choroby, z powrotem do mniej zapalnego stanu po nabyciu tolerancji. Zmiana tych wyników umożliwiłaby więc zaproponowanie markerów prognostycznych ewolucji tej patologii i przewidywanie wyleczenia pacjenta, bez konieczności przeprowadzania testu reintrodukcji odpowiedzialnego pokarmu, co może być potencjalnie niebezpieczne z ryzykiem wystąpienia hipowolemii. zaszokować.

1.2 Opis badanej populacji i uzasadnienie jej wyboru Badana populacja to dzieci w wieku poniżej 18 lat, głównie niemowlęta, z klinicznymi argumentami przemawiającymi za FPIES.

FPIES jest najczęściej opisywany w literaturze dziecięcej i pozostaje mało znany dorosłym lekarzom z niedodiagnozowaną chorobą alergiczną.

W przypadku alergii IgE-zależnych celem terapeutycznym jest osiągnięcie tolerancji na odpowiedzialny pokarm od wieku dziecięcego.

1.3 Opis elementów objętych badaniem Patofizjologia FPIES jest słabo poznana, ale objawy dotyczą przede wszystkim przewodu pokarmowego. Celem jest zbadanie mikroflory jelitowej pacjentów, poszukiwanie różnic w różnorodności lub rozmieszczeniu populacji bakterii i ich metabolitów u pacjentów z FPIES w czasie, jeśli to możliwe, w 3-krotnym okresie ewolucji SEIPA, a mianowicie przed wygojeniem, w ciągu 24 godzin po ekspozycji na odpowiedzialny alergen i po wygojeniu.

Różne społeczności mikroorganizmów, które zamieszkują nasze ciało, wchodzą w interakcje i tworzą jednostkę biologiczną zwaną holobionte. Mikrobiom skórny i pokarmowy są powiązane z układem odpornościowym odpowiedzialnym za choroby atopowe. Dlatego badacze chcą również zbadać mikroflorę śliny, a także mikroflorę skóry, używając nieinwazyjnych próbek.

1.4 Uzasadnienie czasu trwania badania Mikroflora jelitowa będzie znajdować się w laboratorium INRA w Jouy-en-Josas. Różne próbki zostaną zamrożone do analizy w laboratorium INRA w Jouy-en-Josas.

Mikrobiom będzie zbierany w różnych okresach naturalnej ewolucji FPIES, aby odpowiedzieć na hipotezę o modyfikacji mikroflory jelitowej podczas naturalnej ewolucji FPIES.

Całkowity czas trwania badań wyniesie 4 lata, w celu pobrania próbek kału, śliny i wymazów ze skóry, od co najmniej połowy naszej obserwowanej kohorty, ponieważ pacjenci prawdopodobnie osiągną medianę wieku wyleczenia, która wynosi około 3-5 lat. roku życia na mleko, które jest główną przyczyną alergii w naszej kohorcie (52%).