Studio longitudinale del microbiota intestinale, cutaneo e salivare nei bambini con sindrome da enterocolite indotta da cibo (SEIPA) (SEIBIOTE)

1.1 Stato attuale delle conoscenze La sindrome da enterocolite indotta da proteine ​​alimentari (FPIES) è un'allergia alimentare con una prevalenza dello 0,34% e un'incidenza di 15,4 bambini ogni 100.000 all'anno. Si tratta di un'allergia non IgE-mediata, che si manifesta con vomito da 1 a 4 ore dopo l'ingestione dell'alimento sospetto (criteri principali), senza alcuna manifestazione cutanea o respiratoria. Secondo l'ultima definizione (JACI 2017), dovrebbero essere richiesti almeno 3 criteri minori associati al vomito tra i seguenti: un secondo episodio simile di vomito dopo l'ingestione dello stesso alimento, la comparsa di vomito ripetuto da 1 a 4 ore dopo l'ingestione di altro alimento, letargia, pallore pronunciato, necessità di trattamento di emergenza o reidratazione endovenosa dopo l'ingestione di un alimento sospetto, insorgenza di diarrea entro 24 ore, ipotensione o ipotermia al momento della reazione. Gli alimenti più frequentemente responsabili della PFIES sono il latte vaccino, i cereali, la soia e il pesce. I fattori scatenanti dipendono dal Paese, probabilmente in relazione alle abitudini alimentari. L'età media di tolleranza è successiva rispetto alle altre forme di allergia non IgE-mediata, vale a dire tra i 3 ei 5 anni di età ed è più tarda per i cibi solidi rispetto a quelli liquidi. L'età media di acquisizione della tolleranza per il latte vaccino varia in letteratura, intorno agli 8-10 mesi in Corea, intorno a 1 anno in Israele, intorno ai 5 anni negli Stati Uniti, ma molto più tardi (14 anni) se si verificano IgE specifiche durante il follow-up su. Non ci sono dati in Francia sull'età di stagionatura del SEIPA nel latte vaccino.

Una prima reintroduzione dell'alimento responsabile viene proposta all'età di 12-18 mesi se la diagnosi è stata fatta durante i primi mesi di vita, e se le IgE specifiche sono negative secondo le ultime raccomandazioni. Fallimento dell'Oral Food Challenge (OFC), viene proposto un nuovo OFC ogni 6 mesi fino alla guarigione.

Quando le IgE specifiche sono positive, si tratta allora di una FPIES atipica, e le modalità di reintroduzione dell'alimento dipenderanno dall'evoluzione delle IgE.

Il legame tra microbiota e sviluppo di malattie allergiche è ormai ben noto. Il microbiota intestinale varia in termini di diversità e distribuzione batterica nei pazienti con allergie alimentari rispetto ai pazienti non allergici. Il microbiota svolge un ruolo precoce nello sviluppo del sistema immunitario, e quindi nello sviluppo o nella prevenzione delle allergie alimentari che coinvolgono la via Th17 pro-infiammatoria e pro-allergica.

Il microbiota intestinale viene valutato mediante la diversità batterica utilizzando il sequenziamento dell'RNA16, in particolare la diversità alfa (specifica per un campione) e la diversità beta (confronto tra diversi campioni), la ricchezza batterica e mediante la determinazione dei metaboliti batterici come quelli a catena corta acidi grassi, come i butirrati, la misurazione della calprotectina fecale, delle IgA e delle citochine escrete nelle feci (es. β-defensina, TNF-α, proteina cationica degli eosinofili: ECP).

Alcune specie batteriche tenderebbero ad essere predominanti in caso di allergia o sensibilizzazione allergica, come ad esempio alcune specie di Clostridium ed altre svolgerebbero un ruolo protettivo favorendo la sintesi di alcuni acidi grassi a catena corta, e diminuendo la produzione di IL12, IFNγ e IL10.

La fisiopatologia della FPIES è attualmente poco conosciuta perché non esiste un marcatore biologico per confermare la diagnosi o predire la cura. Ci sarebbe un'atrofia dei villi parziali del digiuno reversibile associata a un'infiammazione aspecifica nell'ileo e nel colon, ma l'endoscopia digestiva non viene eseguita nella pratica di routine per la diagnosi. Contrariamente alle allergie IgE-mediate, le citochine Th2 non sono aumentate nei pazienti con FPIES. Diverse ore dopo l'esposizione all'alimento responsabile, nelle feci si osserva un aumento della neurotossina derivata dagli eosinofili (EDN). L'infiammazione gastrointestinale associata alle allergie alimentari può anche essere studiata utilizzando la calprotectina fecale o il lattato fecale. Questa infiammazione digestiva potrebbe essere associata ad un aumento della permeabilità intestinale, ed essere responsabile di vomito, diarrea e shock ipovolemico da reazione immunologica. Se la calprotectina fecale è inferiore a 138 μg/g di feci, la diagnosi di FPIES potrebbe essere esclusa. Questi risultati preliminari suggeriscono un'alterazione del microbiota intestinale, come osservato in altre forme di allergie alimentari, ma il microbiota dei pazienti con FPIES non è mai stato studiato fino ad oggi a nostra conoscenza.

Il nostro lavoro costituirà quindi il primo studio prospettico nei bambini con FPIES che collega la presentazione e l'evoluzione clinica con il microbiota fecale, salivare e cutaneo.

La parte clinica descrittiva determinerà l'età alla diagnosi e l'età della cura in base agli alimenti nella nostra coorte. Lo sperimentatore descriverà i diversi criteri minori per la diagnosi e i sintomi associati che potrebbero essere elementi diagnostici non presenti nel consenso internazionale del 2017. Lo sperimentatore valuterà il rischio di sieroconversione IgE durante il follow-up. Lo sperimentatore esaminerà gli elementi biologici durante una reazione allergica per valutare la gravità delle reazioni (leucocitosi neutrofila polimorfonucleare, metaemoglobinemia).

Ipotesi principale:

Se il microbiota dei pazienti allergici con FPIES è pro-infiammatorio, come in altre allergie alimentari, occorre osservare la composizione e la distribuzione batterica a seconda del decorso della malattia, con un ritorno a uno stato meno infiammatorio una volta acquisita la tolleranza. Un cambiamento di questi risultati permetterebbe così di proporre marcatori prognostici di evoluzione di questa patologia e di predire la guarigione del paziente, senza dover effettuare un test di reintroduzione dell'alimento responsabile, che può essere potenzialmente pericoloso con rischio di ipovolemia shock.

1.2 Descrizione della popolazione da studiare e giustificazione della loro scelta La popolazione dello studio è pediatrica, di età inferiore ai 18 anni, principalmente neonati, con argomenti clinici a favore di FPIES.

La FPIES è per lo più descritta nella letteratura per bambini e rimane poco nota ai medici adulti con una condizione allergica sottodiagnosticata.

Per quanto riguarda le allergie IgE-mediate, l'obiettivo terapeutico è quello di raggiungere la tolleranza all'alimento responsabile fin dall'età pediatrica.

1.3 Descrizione degli elementi oggetto dello studio La fisiopatologia della FPIES è poco conosciuta, ma i sintomi sono principalmente digestivi. L'obiettivo è studiare il microbiota intestinale dei pazienti, cercare una differenza nella diversità o nella distribuzione delle popolazioni batteriche e dei loro metaboliti nei pazienti con FPIES nel tempo, se possibile a 3 tempi dall'evoluzione della SEIPA, vale a dire prima della guarigione, entro 24 ore dopo l'esposizione all'allergene responsabile e dopo la guarigione.

Le diverse comunità di microrganismi che popolano il nostro corpo interagiscono e formano un'entità biologica chiamata holobionte. Il microbiota cutaneo e digestivo sono collegati al sistema immunitario responsabile della malattia atopica. Questo è il motivo per cui i ricercatori vogliono studiare anche il microbiota salivare, così come il microbiota cutaneo, utilizzando campioni non invasivi.

1.4 Razionale per la durata dello studio Il microbiota intestinale sarà presso il laboratorio INRA, a Jouy-en-Josas. I vari campioni saranno congelati per l'analisi presso il laboratorio INRA di Jouy-en-Josas.

Il microbiota sarà raccolto in momenti diversi durante la naturale evoluzione di FPIES, al fine di rispondere all'ipotesi di una modificazione del microbiota intestinale durante la naturale evoluzione di FPIES.

La durata totale della ricerca sarà di 4 anni, al fine di raccogliere campioni di feci, saliva e tamponi cutanei, in almeno la metà della nostra coorte seguita, perché i pazienti avranno probabilmente raggiunto l'età media della guarigione, che è di circa 3-5 anni di età per il latte, che è la principale fonte di allergie nella nostra coorte (52%).