Estudo Longitudinal da Microbiota Intestinal, Cutânea e Salivar em Crianças com Síndrome de Enterocolite Induzida por Alimentos (SEIPA) (SEIBIOTE)

1.1 Estado atual do conhecimento A Síndrome de Enterocolite Induzida por Proteína Alimentar (FPIES) é uma alergia alimentar com prevalência de 0,34% e incidência de 15,4 crianças por 100.000 por ano. É uma alergia não mediada por IgE, manifestada por vômitos 1 a 4 horas após a ingestão do alimento suspeito (critério maior), sem manifestações cutâneas ou respiratórias. De acordo com a última definição (JACI 2017), devem ser exigidos pelo menos 3 critérios menores associados ao vômito entre os seguintes: um segundo episódio semelhante de vômito após a ingestão do mesmo alimento, o aparecimento de vômitos repetidos 1 a 4 horas após a ingestão de outro alimento, letargia, palidez pronunciada, necessidade de tratamento de emergência ou reidratação intravenosa após ingestão de alimento suspeito, início de diarreia em 24 horas, hipotensão ou hipotermia no momento da reação. Os alimentos mais frequentemente responsáveis ​​pela PFIES são leite de vaca, cereais, soja e peixes. Os gatilhos dependem do país, provavelmente em relação aos hábitos alimentares. A idade mediana de tolerância é mais tardia do que nas outras formas de alergia não mediada por IgE, nomeadamente entre os 3 e os 5 anos de idade e é mais tardia para alimentos sólidos do que para alimentos líquidos. A idade média de aquisição da tolerância ao leite de vaca varia na literatura, em torno de 8-10 meses na Coréia, em torno de 1 ano em Israel, em torno de 5 anos nos Estados Unidos, mas muito mais tarde (14 anos) se ocorrer IgE específica durante o acompanhamento acima. Não há dados na França sobre a idade de cura da SEIPA no leite de vaca.

Uma primeira reintrodução da alimentação responsável é proposta aos 12-18 meses de idade se o diagnóstico foi feito durante os primeiros meses de vida e se IgE específica for negativa de acordo com as recomendações mais recentes. Na falha do desafio alimentar oral (OFC), um novo OFC é proposto a cada 6 meses até a cura.

Quando as IgE específicas são positivas, trata-se então de um FPIES atípico, e os métodos de reintrodução da alimentação dependerão da evolução da IgE.

A ligação entre a microbiota e o desenvolvimento de doenças alérgicas é agora bem conhecida. A microbiota intestinal varia em termos de diversidade e distribuição bacteriana em pacientes com alergias alimentares em comparação com pacientes não alérgicos. A microbiota desempenha um papel precoce no desenvolvimento do sistema imunológico e, portanto, no desenvolvimento ou prevenção de alergias alimentares envolvendo a via pró-inflamatória e pró-alérgica Th17.

A microbiota intestinal é avaliada pela diversidade bacteriana através da sequenciação de ARN16, nomeadamente alfa-diversidade (específica para uma amostra) e beta-diversidade (comparação entre várias amostras), riqueza bacteriana e pela determinação de metabolitos bacterianos como os de cadeia curta ácidos graxos, como butiratos, a medição de calprotectina fecal, IgA e citocinas excretadas nas fezes (por exemplo, β-defensina, TNF-α, proteína catiônica de eosinófilos: ECP).

Certas espécies bacterianas tenderiam a ser predominantes em caso de alergia ou sensibilização alérgica, como por exemplo certas espécies de Clostridium e outras desempenhariam um papel protetor ao promover a síntese de certos ácidos graxos de cadeia curta e diminuir a produção de IL12, IFNγ , e IL10.

A fisiopatologia da FPIES é atualmente mal compreendida porque não há marcador biológico para confirmar o diagnóstico ou prever a cura. Haveria atrofia parcial reversível das vilosidades jejunais associada a inflamação inespecífica no íleo e no cólon, mas a endoscopia digestiva não é realizada na prática de rotina para diagnóstico. Em contraste com as alergias mediadas por IgE, as citocinas Th2 não estão aumentadas em pacientes com FPIES. Várias horas após a exposição ao alimento responsável, um aumento na neurotoxina derivada de eosinófilos (EDN) é observado nas fezes. A inflamação gastrointestinal associada a alergias alimentares também pode ser estudada usando a calprotectina fecal ou o lactato fecal. Essa inflamação digestiva poderia estar associada ao aumento da permeabilidade intestinal, sendo responsável por vômitos, diarreia e choque hipovolêmico por reação imunológica. Se a calprotectina fecal for inferior a 138 μg/g de fezes, o diagnóstico de FPIES pode ser excluído. Esses resultados preliminares sugerem uma alteração da microbiota intestinal, conforme observado em outras formas de alergia alimentar, mas a microbiota de pacientes com FPIES nunca foi estudada até o momento.

Nosso trabalho constituirá então o primeiro estudo prospectivo em crianças com FPIES relacionando a apresentação e a evolução clínica com a microbiota fecal, salivar e cutânea.

A parte clínica descritiva determinará a idade de diagnóstico e a idade de cura com base nos alimentos de nossa coorte. O investigador descreverá os diferentes critérios menores para o diagnóstico e os sintomas associados que podem ser elementos diagnósticos que não aparecem no consenso internacional de 2017. O investigador avaliará o risco de soroconversão de IgE durante o acompanhamento. O investigador examinará os elementos biológicos durante uma reação alérgica para avaliar a gravidade das reações (leucocitose de neutrófilos polimorfonucleares, metahemoglobinemia).

Hipótese principal:

Se a microbiota de pacientes alérgicos com FPIES é pró-inflamatória, como em outras alergias alimentares, deve-se observar a composição e distribuição bacteriana dependendo do curso da doença, com retorno a um estado menos inflamatório uma vez adquirida a tolerância. A alteração destes resultados permitiria, assim, propor marcadores prognósticos de evolução desta patologia e prever a cura do doente, sem ter de realizar um teste de reintrodução do alimento responsável, que pode ser potencialmente perigoso com risco de hipovolemia choque.

1.2 Descrição da população a estudar e justificação da sua escolha A população de estudo é pediátrica, com menos de 18 anos, maioritariamente lactentes, com argumentos clínicos a favor da FPIES.

A FPIES é descrita principalmente na literatura infantil e permanece pouco conhecida por médicos adultos com uma condição alérgica subdiagnosticada.

Quanto às alergias mediadas por IgE, o objetivo terapêutico é atingir a tolerância ao alimento responsável desde a idade pediátrica.

1.3 Descrição dos elementos abrangidos pelo estudo A fisiopatologia da FPIES é pouco compreendida, mas os sintomas são principalmente digestivos. O objetivo é estudar a microbiota intestinal dos doentes, procurar uma diferença na diversidade ou distribuição das populações bacterianas e dos seus metabolitos nos doentes com FPIES ao longo do tempo, se possível em 3 momentos da evolução da SEIPA, nomeadamente antes da cura, dentro de 24 horas após a exposição ao alérgeno responsável e após a cicatrização.

As diferentes comunidades de microorganismos que povoam nosso corpo interagem e formam uma entidade biológica chamada holobionte. A microbiota cutânea e digestiva está ligada ao sistema imunológico responsável pela doença atópica. É por isso que os investigadores também querem estudar a microbiota salivar, bem como a microbiota cutânea, usando amostras não invasivas.

1.4 Justificativa da duração do estudo A microbiota intestinal estará no laboratório do INRA, em Jouy-en-Josas. As várias amostras serão congeladas para análise no laboratório do INRA em Jouy-en-Josas.

A microbiota será coletada em diferentes momentos durante a evolução natural da FPIES, a fim de responder à hipótese de uma modificação da microbiota intestinal durante a evolução natural da FPIES.

A duração total da pesquisa será de 4 anos, a fim de coletar amostras de fezes, saliva e zaragatoas de pele, em pelo menos metade de nossa coorte acompanhada, porque os pacientes provavelmente atingiram a idade média de cura, que é em torno de 3-5 anos de idade para o leite, que é o principal contribuinte para alergias em nossa coorte (52%).