Kliniczne i molekularne korelaty odpowiedzi na leczenie pierwszego rzutu liszaja płaskiego

WYBÓR I REKRUTACJA UCZESTNIKÓW

IDENTYFIKACJA UCZESTNIKÓW Wszyscy uczestnicy zostaną wybrani spośród pracowników Oddziału Stomatologicznego i Szczękowo-Twarzowego, Kliniki Dnia Kobiet i Szkoły Stomatologicznej Aberdeen w kampusie Foresterhill. Zespół badawczy zidentyfikuje kwalifikujących się uczestników do badania, przeglądając ich dokumentację elektroniczną. Sreedevi P.U uzyska zgodę Caldicott Guardian, aby uzyskać bezpośredni dostęp do dokumentacji klinicznej pacjentów do celów badań przesiewowych. Pacjentki ze zdiagnozowanym liszajem płaskim jamy ustnej lub jamy ustnej i sromu i pochwy zostaną włączone do badania wyłącznie po potwierdzeniu biopsji. Rozpoznanie liszaja płaskiego zostanie postawione na podstawie zaakceptowanych wyników badań klinicznych i histopatologicznych. Aby spełnić kryteria kwalifikacyjne, pacjenci muszą być poddawani miejscowej terapii steroidowej w ramach planu leczenia liszaja płaskiego.

WERYFIKACJA KWALIFIKACJI Pacjenci uczęszczający do rutynowych klinik będą sprawdzani pod kątem kwalifikowalności poprzez przegląd ich dokumentacji elektronicznej. W tym miejscu podkreślamy, że żadne dane badawcze nie będą rejestrowane z dokumentacji medycznej/stomatologicznej uczestnika, dopóki nie uzyskamy od niego pisemnej świadomej zgody. Kwalifikacja pacjentów zostanie sprawdzona pod kątem wcześniej zdefiniowanych kryteriów włączenia/wyłączenia poprzez przegląd dokumentacji klinicznej i histopatologicznej pacjentów, u których zespół badań klinicznych zdiagnozował liszaj płaski.

ZGODA UCZESTNIKÓW

Potencjalnie kwalifikujący się pacjenci zostaną powiadomieni za pośrednictwem pakietu informacyjnego dotyczącego badania wysłanego pocztą. Pakiet informacyjny dotyczący badania naukowego będzie zawierał: zaproszenie, kartę informacyjną pacjenta (PIS), formularz zwrotny i opłaconą z góry kopertę, w której pacjent będzie mógł powiadomić zespół badawczy, czy chce wziąć udział w badaniu. Jeśli pacjent jest zainteresowany wzięciem udziału, zespół badawczy skontaktuje się z nim telefonicznie w celu umówienia wizyty na dedykowanej sesji badawczej. W tym momencie pisemna świadoma zgoda zostanie uzyskana od potencjalnie kwalifikujących się pacjentów po ustnej dyskusji na temat charakteru badania i udzieleniu odpowiedzi na wszelkie pytania pacjenta. Świadoma zgoda pacjentów z liszajem płaskim jamy ustnej zostanie uzyskana przez dr Sreedevi P.U, a pielęgniarka badawcza wymieniona we wniosku będzie zaangażowana w uzyskiwanie zgody pacjentów z chorobą sromu i pochwy. Pacjenci otrzymają zgodę na następujące aspekty:

1. Przegląd ich dokumentacji medycznej i dentystycznej
2. Analiza zapisu histologicznego związanego z rozpoznaniem liszaja płaskiego
3. Dostarczenie dodatkowych informacji dotyczących czynników żywiciela potencjalnie wpływających na progresję liszaja płaskiego, jeśli nie są one jeszcze dostępne w dokumentacji pacjenta.
4. Wypełnienie kwestionariusza dotyczącego poziomu stresu.
5. Badanie wewnątrzustne
6. Pobieranie próbek (krew, ślina, wymazy)
7. Badanie sromu i pochwy oraz pobieranie próbek (w stosownych przypadkach)
8. Wizyta kontrolna po leczeniu.
9. Przechowywanie i wykorzystywanie ich próbek do etycznie sprawdzonych i zatwierdzonych przyszłych badań.
10. Aby kontaktować się z zespołem badawczym w sprawie przyszłych etycznie zatwierdzonych badań.

OCENY STUDIÓW

Następujące informacje kliniczne zostaną zapisane dla wszystkich pacjentów, jeśli nie są jeszcze dostępne w dokumentacji medycznej/stomatologicznej pacjenta:

1. Historia dentystyczna / medyczna obejmuje przeszłe i obecne stany dentystyczne i medyczne.
2. Historia społeczna obejmuje palenie tytoniu, spożycie alkoholu i poziom stresu. Do oceny odczuwanego poziomu stresu u pacjentów z liszajem płaskim posłuży 10-itemowa Skala Odczuwanego Stresu (PSS-10). Jest to skala samoopisowa, która mierzy stopień, w jakim sytuacje z ostatniego miesiąca życia respondenta oceniane są jako nieprzewidywalne, niekontrolowane i przeciążające.

3. Ocena zdrowia jamy ustnej

   Pacjenci zrekrutowani do badania zostaną poddani częściowej ocenie stanu zdrowia jamy ustnej, mającej na celu zebranie następujących informacji:

   • Stan higieny jamy ustnej Do oceny poprzez wykonanie Uproszczonego Wskaźnika Higieny Jamy Ustnej (OHI-S), który składa się z dwóch elementów: Uproszczonego Wskaźnika Zanieczyszczeń (DI-S) i Uproszczonego Wskaźnika Kamienia (CI-S).
   • Podstawowe badanie periodontologiczne Podstawowe badanie periodontologiczne to rutynowe badanie przesiewowe przeprowadzane w celu oceny stanu zdrowia przyzębia. Polega na sondowaniu tkanek przyzębia w celu oceny obecności krwawienia przy sondowaniu, złogów płytki nazębnej i kamienia nazębnego oraz głębokości ewentualnych kieszonek dziąsłowych. Podstawowe badanie periodontologiczne zostanie przeprowadzone zgodnie z wytycznymi Brytyjskiego Towarzystwa Periodontologicznego.
   • Ocena ciężkości choroby liszaja płaskiego Zostanie ona oceniona na podstawie miejsca zajęcia, aktywności choroby i bólu przy użyciu najlepszego systemu punktacji zidentyfikowanego w ramach przeglądu systematycznego.
   • Szczegóły przepisanego miejscowego schematu steroidowego dla liszaja płaskiego: rodzaj kortykosteroidu, postać, częstość stosowania, czas trwania leczenia.
4. Badanie sromu i pochwy Pacjentki ze zdiagnozowanym liszajem płaskim sromu i pochwy zostaną poddane badaniu sromu w celu formalnej oceny ciężkości choroby. Zostanie przeprowadzone badanie wziernikowe w celu oceny nasilenia choroby u kobiet z chorobą pochwy oraz pobrania wymazu z pochwy.
5. POBIERANIE PRÓBEK Próbki (śliny, krwi, wymazów z jamy ustnej i pochwy (w stosownych przypadkach) zostaną pobrane od pacjentek, które rozpoczęły miejscowe leczenie sterydami, w celu analizy mikrobiomu i markerów immunologicznych. Uczestnicy będą musieli przejść drugie pobieranie próbek po zakończeniu miejscowego leczenia sterydami, około dwa miesiące po pierwszej wizycie.

Ślina: Do tego badania pobierzemy dwie niestymulowane próbki całej śliny na czczo, jedną próbkę do badania czynników zapalnych/odpornościowych, drugą próbkę do badań mikrobiomu. Aby zmniejszyć liczbę zmiennych, które mogą wpływać na skład populacji drobnoustrojów kolonizujących tkanki jamy ustnej, kwalifikujący się pacjenci zostaną poproszeni o nieużywanie antybakteryjnych płynów do płukania jamy ustnej przez 48 godzin przed wizytą. Pacjenci zostaną również poproszeni o przybycie najlepiej do porannych klinik, aby można było pobrać próbki, zanim uczestnicy zjedzą śniadanie.

Wymazy z jamy ustnej: Dwa wymazy z jamy ustnej (jeden z chorej tkanki, drugi z sąsiadującej zdrowej tkanki). Pacjenci zostaną poinformowani, aby nie używali antybakteryjnych płynów do płukania jamy ustnej przez 48 godzin przed pobraniem wymazów z jamy ustnej. Zostaną również poproszeni o uczęszczanie do porannych klinik, aby zmniejszyć wpływ diety na wyniki pobierania próbek.

Pobieranie próbek z pochwy i sromu: Od wszystkich pacjentek z chorobą pochwy i/lub sromu pobierzemy 1 próbkę popłuczyn z szyjki macicy i pochwy oraz do 3 wymazów reprezentatywnych dla obszarów zdrowych i chorych. Uczestnicy zostaną poproszeni o powstrzymanie się od seksu przez 24 godziny przed umówioną wizytą.

Krew: Próbka krwi (do 40 ml) zostanie również pobrana od pacjentów, od których nie są dostępne podstawowe parametry hematologiczne i biochemiczne (morfologia krwi, hematynika, przypadkowy poziom glukozy we krwi, test czynności wątroby oraz mocznik i elektrolity). Zostanie również pobrana dodatkowa próbka do analizy markerów stanu zapalnego.

Wszystkie próbki zostaną przesłane do Instytutu Nauk Medycznych (University of Aberdeen) w celu analizy mikrobiomu i markerów immunologicznych.

Skrawki histologiczne biopsji wykonanych w ramach rutynowej opieki klinicznej będą pochodzić z Grampian Biorepository do badań patologii cyfrowej.

ANALIZA DANYCH Odpowiedź choroby po zakończeniu miejscowego leczenia sterydami będzie modelowana przy użyciu modelu regresji liniowej. Model dostosuje się do wyjściowych poziomów choroby (mierzonych za pomocą oceny nasilenia liszaja płaskiego) wraz z charakterystyką kliniczną i molekularną oraz oceni związek tych predyktorów z ciężkością liszaja płaskiego po leczeniu. W przypadku, gdy założenia modelu regresji liniowej na obserwowanych danych nie zostaną spełnione, zostaną zbadane alternatywne opcje modelowania, takie jak regresja porządkowa lub model regresji logistycznej.

Różnorodność drobnoustrojów zostanie oceniona za pomocą metod molekularnych i mikrobiologicznych, w tym między innymi sekwencjonowania nowej generacji i typowania sekwencji w wielu locusach. Analiza danych generowanych przez sekwencjonowanie nowej generacji zostanie przeprowadzona na Uniwersytecie w Aberdeen z odniesieniem do bazy danych Human Oral Microbiome Database lub bazy danych CORE.

Analiza odpowiedzi gospodarzy (w tym limfocytów T pomocniczych CD4+ i cytotoksycznych CD8+, ich wydzielanych profili cytokin prozapalnych i przeciwzapalnych oraz ewentualnych swoistych autoprzeciwciał) zostanie przeprowadzona głównie za pomocą RT-PCR, immunoblottingu i cytometrii przepływowej.

Analiza obrazów histopatologicznych będzie miała na celu zarejestrowanie następujących informacji:

• Kwantyfikacja parametrów morfologicznych na poziomie tkankowym i komórkowym
• Kwantyfikacja markerów immunologicznych, takich jak limfocyty T CD4+, Foxp3, limfocyty T CD8+, PD-1, PDL-1 i TLR.

Przetwarzanie i analiza obrazu zostanie przeprowadzona przy użyciu pakietów oprogramowania do analizy obrazu o otwartym dostępie ImageJ i QuPath.