Correlati clinici e molecolari della risposta al trattamento di prima linea nel lichen planus

SELEZIONE E ISCRIZIONE DEI PARTECIPANTI

IDENTIFICAZIONE DEI PARTECIPANTI Tutti i partecipanti saranno selezionati tra gli assistenti dell'unità orale e maxillofacciale, della clinica per la giornata della donna e della scuola odontoiatrica di Aberdeen nel campus di Foresterhill. Il team di ricerca identificherà i partecipanti idonei per lo studio esaminando i loro record elettronici. Sarà richiesta l'approvazione di Caldicott Guardian affinché Sreedevi P.U possa ottenere l'accesso diretto alle cartelle cliniche dei pazienti a fini di screening. I pazienti con diagnosi di lichen planus orale o orale e vulvovaginale verranno reclutati nello studio, solo dopo la conferma della biopsia. La diagnosi di lichen planus sarà effettuata sulla base di risultati clinici e istopatologici accettati, per soddisfare i criteri di ammissibilità, i pazienti devono essere sottoposti a terapia steroidea topica come parte del loro piano di gestione per lichen planus.

SCREENING PER L'IDONEITÀ I pazienti che frequentano le cliniche di routine saranno sottoposti a screening per l'idoneità attraverso la revisione delle loro cartelle elettroniche. Qui, sottolineiamo che nessun dato dello studio verrà registrato dalle cartelle cliniche/dentistiche dei partecipanti, fino a quando non avremo un consenso informato scritto da parte loro. L'idoneità dei pazienti sarà verificata per i criteri di inclusione/esclusione predefiniti esaminando le cartelle cliniche e istopatologiche dei pazienti a cui è stato diagnosticato il lichen planus dal team di ricerca clinica.

PARTECIPANTI CONSENSENSI

I pazienti potenzialmente idonei verranno contattati tramite un pacchetto informativo sullo studio di ricerca inviato per posta. Il pacchetto informativo dello studio di ricerca includerà: una lettera di invito, un foglio informativo per il paziente (PIS), una ricevuta di ritorno e una busta prepagata per il paziente per notificare al gruppo di ricerca se desidera o meno partecipare. Se il paziente è interessato a partecipare, verrà contattato telefonicamente dal gruppo di ricerca per fissare una visita in una sessione di studio di ricerca dedicata. A questo punto, il consenso informato scritto sarà ottenuto dai pazienti potenzialmente idonei dopo aver avuto una discussione verbale sulla natura dello studio e aver risposto a qualsiasi domanda il paziente possa avere. Il consenso informato dei pazienti con lichen planus orale sarà ottenuto dal dott. Sreedevi P.U e l'infermiere ricercatore nominato in questa domanda sarà coinvolto nell'ottenimento del consenso dai pazienti con malattia vulvovaginale. I pazienti saranno acconsentiti per i seguenti aspetti:

1. Revisione delle loro cartelle cliniche e dentistiche
2. Analisi della documentazione istologica associata alla diagnosi di lichen planus
3. Fornitura di informazioni aggiuntive relative ai fattori dell'ospite potenzialmente alla progressione del lichen planus se non già disponibili nelle cartelle cliniche del paziente.
4. Compilazione questionario relativo ai livelli di stress.
5. Esame intraorale
6. Prelievo di campioni (sangue, saliva, tamponi)
7. Esame vulvovaginale e campionamento (se pertinente)
8. Appuntamento di follow-up post-trattamento.
9. Conservazione e utilizzo dei loro campioni per studi futuri esaminati e approvati eticamente.
10. Essere contattato dal team di studio per futuri studi eticamente approvati.

VALUTAZIONI DI STUDIO

Le seguenti informazioni cliniche saranno registrate per tutti i pazienti, se non già disponibili attraverso la cartella clinica/dentistica del paziente:

1. L'anamnesi odontoiatrica/medica include le condizioni mediche e odontoiatriche passate e presenti.
2. La storia sociale include lo stato di fumo, il consumo di alcol e i livelli di stress. La PSS-10 (10-item Perceived Stress Scale) sarà utilizzata per valutare il livello di stress percepito nei pazienti con lichen planus. È una scala di autovalutazione che misura il grado in cui le situazioni nell'ultimo mese nella vita del rispondente sono valutate come imprevedibili, incontrollabili e sovraccariche.

3. Valutazione della salute orale

   I pazienti reclutati per lo studio saranno sottoposti a una valutazione parziale della salute orale volta a registrare le seguenti informazioni:

   • Stato di igiene orale Da valutare eseguendo l'indice di igiene orale semplificato (OHI-S) che ha due componenti, il Debris Index-Simplified (DI-S) e il Calculus Index-Simplified (CI-S).
   • Esame parodontale di base Un esame parodontale di base è un'indagine di screening di routine effettuata per valutare la salute parodontale. Si tratta di sondare i tessuti parodontali per valutare la presenza di sanguinamento al sondaggio, depositi di placca e tartaro e la profondità di eventuali tasche parodontali eventualmente presenti. L'esame parodontale di base sarà condotto secondo le linee guida della British Society of Periodontology.
   • Punteggio di gravità della malattia del lichen planus Sarà valutato in base al sito di coinvolgimento, all'attività della malattia e al dolore utilizzando il miglior sistema di punteggio identificato conducendo una revisione sistematica.
   • Dettaglio del regime steroideo topico prescritto per il lichen planus: tipo di corticosteroide, formulazione, frequenza di applicazione, durata del trattamento.
4. Esame vulvovaginale I pazienti con diagnosi di lichen planus vulvo-vaginale saranno sottoposti a un esame vulvare per valutare formalmente la gravità della malattia. Verrà eseguito un esame speculum per valutare la gravità della malattia per quelle donne con malattia vaginale e per raccogliere il tampone delle secrezioni vaginali.
5. RACCOLTA DEI CAMPIONI I campioni (saliva, sangue, tamponi orali e prelievo vaginale (ove applicabile) verranno raccolti dalle pazienti che hanno iniziato il trattamento con steroidi topici, finalizzato all'analisi del microbioma e dei marcatori immunitari. I partecipanti dovranno sottoporsi a un secondo campionamento dopo il completamento del trattamento con steroidi topici circa due mesi dopo la loro prima visita.

Saliva: per questo studio, raccoglieremo due campioni di saliva intera non stimolati a digiuno, un campione per lo studio dei fattori infiammatori/immunitari, un altro campione per gli studi sul microbioma. Per ridurre il numero di variabili che possono interferire con la composizione delle popolazioni microbiche che colonizzano i tessuti orali, ai pazienti idonei verrà chiesto di non utilizzare collutori antibatterici per 48 ore prima della visita. Ai pazienti verrà inoltre chiesto di frequentare preferibilmente le cliniche mattutine in modo che i campioni possano essere raccolti prima che i partecipanti facciano colazione.

Tamponi orali: due tamponi orali (uno dal tessuto interessato, uno dal tessuto sano adiacente). Ai pazienti verrà consigliato di non utilizzare collutori antibatterici per 48 ore prima dei tamponi orali. Verrà inoltre chiesto loro di partecipare alle cliniche mattutine per ridurre l'influenza della dieta sui risultati del campionamento.

Prelievo vulvovaginale: per tutte le pazienti che presentano patologie vaginali e/o vulvali, raccoglieremo 1 campione di lavaggio cervico-vaginale e fino a 3 tamponi rappresentativi di aree sane e malate. Ai partecipanti verrà chiesto di astenersi dal sesso per 24 ore prima del loro appuntamento.

Sangue: verrà prelevato anche un campione di sangue (fino a 40 ml) da pazienti dai quali non sono disponibili parametri ematologici e biochimici di base (emocromo completo, ematinici, glicemia casuale, test di funzionalità epatica e urea ed elettroliti). Sarà inoltre raccolto un ulteriore campione per l'analisi dei marcatori infiammatori.

Tutti i campioni saranno trasferiti all'Institute of Medical Sciences (Università di Aberdeen) per l'analisi del microbioma e dei marcatori immunitari.

Le sezioni istologiche delle biopsie condotte come parte delle cure cliniche di routine proverranno dal Grampian Biorepository per gli studi di patologia digitale.

ANALISI DEI DATI La risposta alla malattia dopo il completamento del trattamento con steroidi topici sarà modellata utilizzando un modello di regressione lineare. Il modello si adatterà ai livelli basali della malattia (misurati utilizzando il punteggio di gravità del lichen planus) insieme alle caratteristiche cliniche e molecolari e valuterà la relazione di questi predittori con la gravità del lichen planus dopo il trattamento. Nel caso in cui le ipotesi per il modello di regressione lineare sui dati osservati non siano soddisfatte, verranno esplorate opzioni di modellazione alternative come la regressione ordinale o il modello di regressione logistica.

La diversità microbica sarà valutata mediante approcci molecolari e microbici inclusi, ma non esclusivamente, il sequenziamento di nuova generazione e la tipizzazione di sequenze multi-locus. L'analisi dei dati generati dal sequenziamento di nuova generazione sarà effettuata presso l'Università di Aberdeen con riferimento al database del microbioma orale umano o al database CORE.

L'analisi delle risposte dell'ospite (comprese le cellule CD4+ helper e CD8+ citotossiche, i loro profili di citochine pro-infiammatorie e antinfiammatorie secrete, ed eventuali autoanticorpi specifici) sarà effettuata principalmente mediante RT-PCR, immunoblotting e citometria a flusso.

L'analisi delle immagini istopatologiche sarà finalizzata alla registrazione delle seguenti informazioni:

• Quantificazione dei parametri morfologici a livello tissutale e cellulare
• Quantificazione di marcatori immunitari quali cellule CD4+T, Foxp3, cellule CD8+T, PD-1, PDL-1 e TLR.

L'elaborazione e l'analisi delle immagini saranno condotte utilizzando i pacchetti software di analisi delle immagini ad accesso aperto ImageJ e QuPath.