Correlatos clínicos e moleculares da resposta ao tratamento de primeira linha no líquen plano

SELEÇÃO E INSCRIÇÃO DO PARTICIPANTE

IDENTIFICANDO OS PARTICIPANTES Todos os participantes serão selecionados entre os atendentes da Unidade Oral e Maxilofacial, Women's Day Clinic e Aberdeen Dental School no Foresterhill Campus. A equipe de pesquisa identificará os participantes elegíveis para o estudo por triagem por meio da revisão de seus registros eletrônicos. A aprovação do Caldicott Guardian será solicitada para Sreedevi P.U obter acesso direto aos registros clínicos do paciente para fins de triagem. Pacientes com diagnóstico de líquen plano oral ou oral e vulvovaginal serão recrutadas para o estudo, somente após confirmação por biópsia. O diagnóstico de líquen plano será feito com base em achados clínicos e histopatológicos aceitos. Para atender aos critérios de elegibilidade, os pacientes devem estar em tratamento com esteroides tópicos como parte de seu plano de tratamento para o líquen plano.

TRIAGEM PARA ELEGIBILIDADE Os pacientes atendidos em clínicas de rotina serão avaliados para elegibilidade por meio da revisão de seus registros eletrônicos. Aqui, enfatizamos que nenhum dado do estudo será registrado nos prontuários médicos/odontológicos dos participantes, até que tenhamos um consentimento informado por escrito deles. A elegibilidade dos pacientes será verificada para critérios de inclusão/exclusão predefinidos, revisando os registros clínicos e histopatológicos dos pacientes que foram diagnosticados com líquen plano pela equipe de pesquisa clínica.

PARTICIPANTES DE CONSENTIMENTO

Os pacientes potencialmente elegíveis serão contatados por meio de um pacote de informações do estudo de pesquisa enviado pelo correio. O pacote de informações do estudo de pesquisa incluirá: uma carta convite, uma Folha de Informações do Paciente (PIS), uma guia de devolução e um envelope pré-pago para que o paciente notifique a equipe de pesquisa se deseja ou não participar. Se o paciente estiver interessado em participar, ele será contatado por telefone pela equipe de pesquisa para agendar uma visita em uma sessão de estudo de pesquisa dedicada. Neste ponto, o consentimento informado por escrito será obtido de pacientes potencialmente elegíveis após uma discussão verbal sobre a natureza do estudo e responder a quaisquer perguntas que o paciente possa ter. O consentimento informado de pacientes com líquen plano oral será obtido pelo Dr. Sreedevi P.U e a enfermeira pesquisadora nomeada neste requerimento estará envolvida na obtenção do consentimento de pacientes com doença vulvovaginal. Os pacientes serão consentidos nos seguintes aspectos:

1. Revisão de seus registros médicos e odontológicos
2. Análise dos registros histológicos associados ao diagnóstico de líquen plano
3. Fornecimento de informações adicionais relacionadas a fatores do hospedeiro potencialmente para a progressão do líquen plano, se ainda não estiverem disponíveis nos registros do paciente.
4. Preenchimento de questionário relacionado aos níveis de estresse.
5. exame intraoral
6. Coleta de amostras (sangue, saliva, zaragatoas)
7. Exame vulvovaginal e amostragem (quando relevante)
8. Consulta de acompanhamento pós-tratamento.
9. Armazenamento e uso de suas amostras para estudos futuros eticamente revisados ​​e aprovados.
10. Para ser contatado pela equipe de estudo para futuros estudos aprovados eticamente.

AVALIAÇÕES DO ESTUDO

As seguintes informações clínicas serão registradas para todos os pacientes, caso ainda não estejam disponíveis nos registros médicos/odontológicos do paciente:

1. A história médica/odontológica inclui condições médicas e dentais passadas e atuais.
2. A história social inclui tabagismo, consumo de álcool e níveis de estresse. A Escala de Estresse Percebido de 10 itens (PSS-10) será usada para avaliar o nível de estresse percebido nos pacientes com líquen plano. É uma escala de autorrelato que mede o grau em que as situações do último mês de vida do respondente são avaliadas como imprevisíveis, incontroláveis ​​e sobrecarregadas.

3. Avaliação da Saúde Bucal

   Os pacientes recrutados para o estudo passarão por uma avaliação parcial de saúde bucal com o objetivo de registrar as seguintes informações:

   • Estado de higiene oral A avaliar pela realização do Índice de Higiene Oral Simplificado (OHI-S) que tem duas componentes, o Índice de Detritos Simplificado (DI-S) e o Índice de Cálculo Simplificado (CI-S).
   • Exame periodontal básico Um exame periodontal básico é uma investigação de triagem de rotina realizada para avaliar a saúde periodontal. Envolve a sondagem dos tecidos periodontais para avaliar a presença de sangramento à sondagem, depósitos de placa e cálculo e a profundidade de quaisquer bolsas periodontais que possam estar presentes. O exame periodontal básico será conduzido de acordo com as diretrizes da Sociedade Britânica de Periodontologia.
   • Escore de gravidade da doença do líquen plano Será pontuado com base no local de envolvimento, atividade da doença e dor usando o melhor sistema de pontuação identificado por meio da realização de uma revisão sistemática.
   • Detalhe do regime de esteróides tópicos prescritos para o líquen plano: tipo de corticosteróide, formulação, frequência de aplicação, duração do tratamento.
4. Exame vulvovaginal Pacientes diagnosticados com líquen plano vulvovaginal serão submetidos a um exame vulvar para pontuar formalmente a gravidade da doença. Um exame especular será realizado para avaliar a gravidade da doença para aquelas mulheres com doença vaginal e para coletar swab de secreções vaginais.
5. COLETA DE AMOSTRAS Amostras (saliva, sangue, swabs orais e vaginais (quando aplicável) serão coletadas dos pacientes que iniciaram o tratamento com esteróides tópicos, visando análises de microbioma e marcadores imunológicos. Os participantes precisarão passar por uma segunda amostragem após a conclusão do tratamento com esteroides tópicos aproximadamente dois meses após a primeira visita.

Saliva: Para este estudo, coletaremos duas amostras de saliva total não estimulada em jejum, uma amostra para o estudo de fatores inflamatórios/imunes, outra amostra para estudos de microbioma. Para reduzir o número de variáveis ​​que podem interferir na composição das populações microbianas que colonizam os tecidos bucais, os pacientes elegíveis serão solicitados a não usar enxaguatórios bucais antibacterianos por 48 horas antes da consulta. Os pacientes também serão solicitados a comparecer preferencialmente às clínicas matinais para que as amostras possam ser coletadas antes dos participantes tomarem o café da manhã.

Swabs orais: Dois swabs orais (um de tecido afetado, um de tecido saudável adjacente). Os pacientes serão aconselhados a não usar enxaguatórios bucais antibacterianos por 48 horas antes dos esfregaços orais. Eles também serão solicitados a comparecer às clínicas matinais para reduzir a influência da dieta nos resultados da amostragem.

Amostragem vulvovaginal: Para todos os pacientes que apresentam doença vaginal e/ou vulvar, coletaremos 1 amostra de lavagem cérvico-vaginal e até 3 zaragatoas representativas de áreas saudáveis ​​e doentes. Os participantes serão solicitados a se abster de sexo por 24 horas antes da consulta.

Sangues: Uma amostra de sangue (até 40 ml) também será coletada de pacientes cujos parâmetros hematológicos e bioquímicos basais (hemograma completo, hematínicos, glicemia aleatória, teste de função hepática e uréia e eletrólitos) não estão disponíveis. Uma amostra adicional também será coletada para análise de marcadores inflamatórios.

Todas as amostras serão transferidas para o Instituto de Ciências Médicas (Universidade de Aberdeen) para análise de microbioma e marcadores imunológicos.

As seções histológicas de biópsias realizadas como parte do atendimento clínico de rotina serão provenientes do Grampian Biorepository para estudos de patologia digital.

ANÁLISE DE DADOS A resposta à doença após a conclusão do tratamento com esteroides tópicos será modelada usando um modelo de regressão linear. O modelo ajustará os níveis basais da doença (medidos usando o escore de gravidade do líquen plano) juntamente com as características clínicas e moleculares e avaliará a relação desses preditores com a gravidade do líquen plano após o tratamento. Caso as suposições para o modelo de regressão linear nos dados observados não sejam atendidas, serão exploradas opções alternativas de modelagem, como regressão ordinal ou modelo de regressão logística.

A diversidade microbiana será avaliada por abordagens moleculares e microbianas, incluindo, mas não exclusivamente, sequenciamento de próxima geração e tipagem de sequência multilocus. A análise dos dados gerados pelo sequenciamento de próxima geração será realizada na Universidade de Aberdeen, com referência ao banco de dados do Microbioma Oral Humano ou ao banco de dados CORE.

A análise das respostas do hospedeiro (incluindo CD4+ helper e células T citotóxicas CD8+, seus perfis de citocinas pró-inflamatórias e anti-inflamatórias secretadas e quaisquer autoanticorpos específicos) será realizada principalmente por RT-PCR, imunotransferência e citometria de fluxo.

A análise das imagens histopatológicas terá como objetivo registrar as seguintes informações:

• Quantificação de parâmetros morfológicos nos níveis tecidual e celular
• Quantificação de marcadores imunes como CD4+Tcells, Foxp3, CD8+T cells, PD-1, PDL-1 e TLRs.

O processamento e a análise das imagens serão realizados usando os pacotes de software de análise de imagem de acesso aberto ImageJ e QuPath.