Lichen Planuksen ensilinjan hoitovasteen kliiniset ja molekyyliset korrelaatiot

OSALLISTUJIEN VALINTA JA ILMOITTAUTUMINEN

OSALLISTUJIEN TUNNISTAMINEN Kaikki osallistujat valitaan Foresterhillin kampuksen suu- ja leukahoitoyksikön, naistenpäiväklinikan ja Aberdeenin hammaskoulun hoitajista. Tutkimusryhmä tunnistaa tutkimukseen kelvolliset osallistujat seulomalla heidän sähköisiä tietueitaan. Sreedevi P.U:lle haetaan Caldicott Guardianin hyväksyntää saadakseen suoran pääsyn potilaiden kliinisiin asiakirjoihin seulontatarkoituksiin. Potilaat, joilla on diagnosoitu suun tai suun ja vulvovaginaalinen lichen planus, otetaan mukaan tutkimukseen vasta biopsian vahvistuksen jälkeen. Lichen planus -diagnoosi tehdään hyväksyttyjen kliinisten ja histopatologisten löydösten perusteella, jotta kelpoisuuskriteerit täyttyvät, potilaiden on saatava paikallista steroidihoitoa osana jäkälän hoitosuunnitelmaa.

KELPOISUUDEN SELVITYS Rutiiniklinikoilla käyvien potilaiden kelpoisuus seulotaan heidän sähköisten asiakirjojensa perusteella. Tässä korostamme, että mitään tutkimustietoja ei tallenneta osallistujien lääketieteellisistä/hammaslääketieteellisistä tiedoista ennen kuin meillä on heiltä kirjallinen tietoinen suostumus. Potilaiden kelpoisuus tarkistetaan ennalta määritettyjen sisällyttämis-/poissulkemiskriteerien mukaisesti tarkastelemalla kliinisiä ja histopatologisia tietueita potilaista, joilla kliininen tutkimusryhmä on diagnosoinut lichen planus.

SUOSTUVAT OSALLISTUJAT

Mahdollisiin kelpoisiin potilaisiin otetaan yhteyttä postitse lähetettävän tutkimustietopaketin kautta. Tutkimustietopaketti sisältää: kutsukirjeen, potilastietolomakkeen (PIS), palautuslomakkeen ja ennakkoon maksetun kirjekuoren, jolla potilas voi ilmoittaa tutkimusryhmälle, haluaako hän osallistua vai ei. Jos potilas on kiinnostunut osallistumaan, tutkimusryhmä ottaa häneen puhelimitse yhteyttä sopiakseen vierailusta erityisellä tutkimusistunnossa. Tässä vaiheessa mahdollisesti kelpoisilta potilailta hankitaan kirjallinen tietoinen suostumus sen jälkeen, kun on käyty suullista keskustelua tutkimuksen luonteesta ja vastattu kaikkiin potilaan kysymyksiin. Tohtori Sreedevi P.U hankkii tietoisen suostumuksen potilailta, joilla on suun lichen planus, ja tässä hakemuksessa nimetty tutkimussairaanhoitaja osallistuu suostumuksen saamiseen potilailta, joilla on vulvovaginaalinen sairaus. Potilaille annetaan suostumus seuraavista seikoista:

1. Tarkista heidän lääketieteelliset ja hammaslääkäritiedot
2. Lichen planus -diagnoosin histologisten tietueiden analyysi
3. Lisätietojen tarjoaminen isäntätekijöistä, jotka voivat mahdollisesti aiheuttaa jäkälän etenemistä, ellei niitä ole jo saatavilla potilasrekisterissä.
4. Stressitasoihin liittyvän kyselyn täyttäminen.
5. Suunsisäinen tutkimus
6. Näytteenotto (veri, sylki, vanupuikko)
7. Vulvovaginaalinen tutkimus ja näytteenotto (tarvittaessa)
8. Hoidon jälkeinen seuranta-aika.
9. Niiden näytteiden säilytys ja käyttö eettisesti tarkistettuihin ja hyväksyttyihin tuleviin tutkimuksiin.
10. Tutkimusryhmä ottaa sinuun yhteyttä tulevia eettisesti hyväksyttyjä tutkimuksia varten.

OPINTOJEN ARVIOINTI

Seuraavat kliiniset tiedot tallennetaan kaikista potilaista, jos ne eivät ole jo saatavilla potilaan lääketieteellisistä/hammastieteellisistä tiedoista:

1. Hammaslääketieteellinen historia sisältää menneet ja nykyiset hammas- ja lääketieteelliset sairaudet.
2. Yhteiskunnalliseen historiaan kuuluvat tupakointitilanne, alkoholinkäyttö ja stressitasot. 10-kohtaista koettu stressiasteikkoa (PSS-10) käytetään arvioimaan koettu stressitaso potilailla, joilla on jäkälä. Se on itseraportointiasteikko, joka mittaa sitä, missä määrin vastaajan elämän viimeisen kuukauden tilanteet on arvioitu ennakoimattomiksi, hallitsemattomiksi ja ylikuormitettaviksi.

3. Suun terveyden arviointi

   Tutkimukseen rekrytoidut potilaat läpikäyvät osittaisen suun terveyden arvioinnin, jonka tarkoituksena on tallentaa seuraavat tiedot:

   • Suuhygienian tila Arvioidaan suorittamalla yksinkertaistettu suuhygieniaindeksi (OHI-S), joka koostuu kahdesta osasta, Debris Index-Simplified (DI-S) ja Calculus Index-Simplified (CI-S).
   • Parodontaalin perustutkimus Parodontaalin perustutkimus on rutiiniseulontatutkimus, joka tehdään parodontaalin terveyden arvioimiseksi. Siihen kuuluu periodontaalisten kudosten tutkiminen verenvuodon, plakin ja hammaskiven kertymien sekä mahdollisten läsnä olevien periodontaalisten taskujen syvyyden arvioimiseksi. Parodontologian perustutkimus tehdään British Society of Periodontologyn ohjeiden mukaisesti.
   • Lichen Planus -sairauden vakavuuspisteet Se pisteytetään sairauden esiintymispaikan, taudin aktiivisuuden ja kivun perusteella käyttäen parasta pisteytysjärjestelmää, joka on tunnistettu suorittamalla systemaattinen tarkastelu.
   • Yksityiskohtaiset tiedot määrätystä paikallisesta steroidihoidosta lichen planus -jäkälälle: kortikosteroidin tyyppi, koostumus, käyttötiheys, hoidon kesto.
4. Vulvovaginaalinen tutkimus Potilaille, joilla on diagnosoitu vulvo-emättimen jäkälä, tehdään vulvatutkimus sairauden vakavuuden arvioimiseksi. Emätinsairautta sairastaville naisille tehdään tähystystutkimus taudin vakavuuden arvioimiseksi ja emättimen eritteiden pyyhkäisynäytteen keräämiseksi.
5. NÄYTTEEN KERÄÄMINEN Paikallisen steroidihoidon aloittaneilta potilailta otetaan näytteitä (sylki, veri, vanupuikkoja emättimestä) mikrobiomi- ja immuunimarkkerianalyysien avulla. Osallistujien on otettava toinen näyte paikallisen steroidihoidon päätyttyä noin kahden kuukauden kuluttua ensimmäisestä käynnistään.

Sylki: Tätä tutkimusta varten keräämme kaksi stimuloimatonta kokosylkipaastonäytettä, yhden näytteen tulehdus-/immuunitekijöiden tutkimukseen ja toisen mikrobiomitutkimuksia varten. Suun kudoksia kolonisoivien mikrobipopulaatioiden koostumusta mahdollisesti häiritsevien muuttujien määrän vähentämiseksi kelvollisia potilaita pyydetään olemaan käyttämättä antibakteerista suuvettä 48 tuntiin ennen käyntiä. Potilaita pyydetään myös mieluiten käymään aamuklinikoilla, jotta näytteet voidaan ottaa ennen kuin osallistujat syövät aamiaisen.

Vanupuikko suussa: Kaksi vanupuikkoa (yksi sairaasta kudoksesta, toinen viereisestä terveestä kudoksesta). Potilaita kehotetaan olemaan käyttämättä antibakteerista suuvettä 48 tuntiin ennen suupyyhkäisyä. Heitä pyydetään myös osallistumaan aamuklinikoihin vähentääkseen ruokavalion vaikutusta näytteenottotuloksiin.

Vulvovaginaalinen näytteenotto: Kaikilta potilailta, joilla on emättimen ja/tai emättimen sairaus, keräämme yhden kohdunkaulan ja emättimen huuhtelunäytteen ja enintään 3 vanupuikkoa, jotka edustavat terveitä ja sairaita alueita. Osallistujia pyydetään pidättäytymään seksistä 24 tuntia ennen tapaamista.

Veri: Verinäyte (enintään 40 ml) otetaan myös potilailta, joilta ei ole saatavilla lähtötilanteen hematologisia ja biokemiallisia parametreja (koko verenkuva, hematiini, satunnainen verensokeri, maksan toimintakoe ja urea & elektrolyytit). Lisäksi kerätään lisänäyte tulehdusmerkkiaineiden analysointia varten.

Kaikki näytteet siirretään Aberdeenin yliopiston lääketieteelliseen instituuttiin mikrobiomi- ja immuunimarkkerianalyysiä varten.

Osana rutiininomaista kliinistä hoitoa otettavien biopsioiden histologiset leikkeet hankitaan Grampian Biorepositorysta digitaalisen patologian tutkimuksia varten.

TIETOJEN ANALYYSI Taudin vaste paikallisen steroidihoidon päätyttyä mallinnetaan käyttäen lineaarista regressiomallia. Malli mukautuu perussairauteen (mitattu käyttämällä lichen planus vakavuuspisteitä) sekä kliinisiä ja molekyyliominaisuuksia ja arvioi näiden ennustajien suhdetta jäkälän vaikeusasteeseen hoidon jälkeen. Mikäli lineaarisen regressiomallin oletukset havaittujen tietojen perusteella eivät täyty, tutkitaan vaihtoehtoisia mallinnusvaihtoehtoja, kuten ordinaalista regressiomallia tai logistista regressiomallia.

Mikrobien monimuotoisuutta arvioidaan molekyyli- ja mikrobilähestymistapoilla, mukaan lukien, mutta ei yksinomaan, seuraavan sukupolven sekvensointi ja monilokussekvenssityypitys. Seuraavan sukupolven sekvensoinnilla tuotetun datan analyysi tehdään Aberdeenin yliopistossa Human Oral Microbiome Database- tai CORE-tietokantaan viitaten.

Isännän vasteiden analyysi (mukaan lukien CD4+-auttaja- ja CD8+-sytotoksiset T-solut, niiden erittämät pro-inflammatoriset ja anti-inflammatoriset sytokiiniprofiilit ja kaikki spesifiset autovasta-aineet) suoritetaan pääasiassa RT-PCR:llä, immunoblottauksella ja virtaussytometrialla.

Histopatologisten kuvien analyysin tarkoituksena on tallentaa seuraavat tiedot:

• Morfologisten parametrien kvantifiointi kudos- ja solutasolla
• Immuunimarkkerien, kuten CD4+T-solut, Foxp3, CD8+T-solut, PD-1, PDL-1 ja TLR:t, kvantifiointi.

Kuvankäsittely ja analyysi suoritetaan käyttämällä avoimen pääsyn kuva-analyysiohjelmistopaketteja ImageJ ja QuPath.