Gymnema Sylvestre vs Berberyna w ekspresji genów otyłości adipokin (GS VS BBR A)

Nadzór nad badaniem W ramach Programu Kompleksowej Opieki nad Otyłością i Nadwagą w Wyższej Szkole Medycznej przeprowadzono badanie porównawcze, opisowe, obserwacyjne, podłużne i prospektywne. Niniejsze badanie przeprowadzono w pełnej zgodności z wytycznymi dobrej praktyki klinicznej i Deklaracją Helsińską. Badanie zostało zarejestrowane w Komisji ds. Badań i Etyki Wyższej Szkoły Medycznej (ESM.CE-01/7-12-2015). Wszyscy pacjenci podpisali świadomą zgodę, a informacje były chronione pismem o zachowaniu poufności.

Pacjenci Do badania włączono 50 meksykańskich pacjentów obu płci, w wieku powyżej 18 lat, ze wskaźnikiem masy ciała (BMI) większym niż 30 KG(kilogram)/M2 (stopień otyłości I, II i III), bez wcześniejszej diagnozy choroby cukrzyca, ale z co najmniej dwoma czynnikami ryzyka wystąpienia tej choroby (wywiad rodziców lub rodzeństwa, wiek powyżej 40 lat, siedzący tryb życia, kontrolowane nadciśnienie tętnicze, stężenie glukozy we krwi na czczo < 126 mg/dl lub hemoglobina glikowana < 6,5%). Kluczowe kryteria wykluczenia obejmowały (i) kobiety w ciąży, (ii) osoby chore na cukrzycę oraz (iii) osoby z reakcją alergiczną na którykolwiek składnik suplementu. Pierwsza grupa badana, grupa A (25 pacjentów), była leczona GS w dawce dwóch kapsułek 200 mg przed śniadaniem, natomiast w drugiej grupie, grupa B (25 pacjentów) była leczona BBR w dawce jednej tabletki 500 mg trzy razy razy dziennie przed każdym posiłkiem. W obu grupach leczenie trwało 3 miesiące.

Procedury badawcze i wyniki Parametry antropometryczne, fizjologiczne i biochemiczne mierzono podczas dwóch sesji, przed i po leczeniu. Pomiary antropometryczne obejmowały masę ciała, wzrost, obwód talii i bioder, a także analizę ciała za pomocą Inbody 770. Jako miarę fizjologiczną uwzględniono jedynie ciśnienie krwi przy użyciu anomanometrów marki WelchAllyn z mankietem dla pacjentów otyłych. W zakresie parametrów biochemicznych mierzono glikemię na czczo, profil lipidowy (cholesterol całkowity, triglicerydy, HDL, LDL), insulinę bazową i HbA1c. Przestrzeganie leczenia i obecność działań niepożądanych rejestrowano za pomocą dziennika wskazującego czas, w którym tabletki zostały połknięte oraz informację, czy tego dnia wystąpiły jakiekolwiek działania niepożądane.

Dodatkowo pobrano próbki pełnej krwi od 50 pacjentów, 25 otrzymało leczenie GS (grupa A), a 25 otrzymało leczenie BBR (grupa B). Ekstrakcję tRNA (przenoszącego kwasu rybonukleinowego) przeprowadzono przy użyciu techniki TRIzol®Reagent, która składa się z mieszaniny izocyjanianu guanidyny i fenolu-chloroformu. Po wyizolowaniu całkowitego RNA zawieszono go w wodzie wolnej od RNazy, aby uniknąć możliwej degradacji próbki przed przystąpieniem do odwrotnej transkrypcji. Ekstrakcję i integralność tRNA sprawdzono za pomocą elektroforezy w żelu agarozowym. Końcową czystość próbek obliczono na podstawie absorbancji uzyskanej przy pomiarze w temperaturze 260-280. Amplifikację cDNA (komplementarnego DNA) przeprowadzono przy użyciu zestawu do syntezy „First Strand cDNA transkrypcja” do rtPCR firmy Roche. Przeprowadzono procedurę łańcuchowej reakcji polimerazy w czasie rzeczywistym (RT-PCR) w celu określenia względnej ekspresji mRNA (posługowego kwasu rybonukleinowego) badanych genów, przy użyciu sond z biblioteki ludzkich transkryptomów (Human Universal Probe Library), aparatu LightCycler nano termocykler i mieszanina reakcyjna typu TaqMan, wszystkie marki Roche Diagnostics (Roche Diagnostics GmbH (Gesellschaft mit beschränkter Haftung), Mannheim, Niemcy). Sekwencje oligo starterów (sensowny i antysensowny) zaprojektowano za pomocą oprogramowania ProbeFinder (Apelin, NM_017413.4, F, 5’ gaa agt ggg gga tgg cta ag 3’, R, 5’ ccc acc cac tac cct ctt ct 3’, Omentin, NM_017625.2, F, 5' tga ggg tca ccg gat gta ac 3', R, 5' gga ctg gcc tct gga aag ta 3', Resistin, NM_001193374.1, F, 5’ cca ccg aga ggg atg aaa g 3’, R, 5’ ttc ttc cat gga gca cag g 3’ i Wisfatyna, NM_005746.2, F, 5' aag gg tgg aac tac att ctt gag 3', R, 5' ctg tgt ttt cca ccg tga ag 3'. Mieszaninę reakcyjną przygotowano zgodnie z protokołem producenta. Każdą próbkę analizowano dwukrotnie, a uzyskane dane analizowano za pomocą oprogramowania LightCycler nano.

Analiza statystyczna Rozkładu danych ilościowych dokonał Shapiro Wilk. Porównanie częstości przeprowadzono za pomocą X2, natomiast porównanie średnich podstawowych pomiędzy grupami przeprowadzono za pomocą testu t-Studenta. Ostateczne średnie porównano za pomocą testu t-Studenta, gdy w porównaniu podstawowym nie stwierdzono różnic statystycznych, natomiast w przypadku parametrów wykazujących istotne różnice w pomiarze podstawowym zastosowano korektę współzmiennych (ANOVA powtarzanych pomiarów) i test Bonferroniego w celu porównania średnich końcowych pomiędzy grupami. Analizę samokontroli przeprowadzono za pomocą testu t dla par. Do analiz wykorzystano oprogramowanie GraphPad Prism w wersji 8.0.0 dla systemu Windows (GraphPad Software, San Diego, Kalifornia, USA) oraz oprogramowanie SPSS w wersji 19 (IBM Corp. Released 2015). IBM SPSS Statistics dla systemu Windows, wersja 19.0. Armonk, Nowy Jork (Nowy Jork), USA: IBM Corp). Za istotność statystyczną uznano wartość p<0,05.