Gymnema Sylvestre vs Berberina nell'espressione genica dell'obesità delle adipochine (GS VS BBR A)

Supervisione dello studio Uno studio di analisi comparativa, descrittiva, osservativa, longitudinale e prospettica è stato condotto nell'ambito del Programma completo di cura dell'obesità e del sovrappeso presso la Scuola Superiore di Medicina. Questo studio è stato condotto nel pieno rispetto delle linee guida di buona pratica clinica e della Dichiarazione di Helsinki. Lo studio è stato registrato presso il Comitato di Ricerca ed Etica della Scuola Superiore di Medicina (ESM.CE-01/7-12-2015). Tutti i pazienti hanno firmato il consenso informato e le informazioni sono state protette tramite una lettera di riservatezza.

Pazienti Abbiamo incluso 50 pazienti messicani di entrambi i sessi, di età superiore a 18 anni, con un indice di massa corporea (BMI) superiore a 30 KG (chilogrammo)/M2 (grado di obesità I, II e III), senza una precedente diagnosi di diabete mellito, ma con almeno due fattori di rischio per la malattia (anamnesi di genitori o fratelli, età superiore a 40 anni, abitudini di vita sedentarie, ipertensione arteriosa controllata, glicemia a digiuno < 126 mg/dL o emoglobina glicata < 6,5%). I principali criteri di esclusione includevano (i) pazienti in gravidanza, (ii) diabetici e (iii) pazienti con reazione allergica a qualsiasi componente degli integratori. Il primo gruppo di studio, gruppo A (25 pazienti) è stato trattato con GS alla dose di due capsule da 200 mg prima di colazione, mentre nel secondo gruppo, gruppo B (25 pazienti) è stato trattato con BBR alla dose di una compressa da 500 mg tre volte al giorno prima di ogni pasto. In entrambi i gruppi il trattamento è durato 3 mesi.

Procedure e risultati dello studio I parametri antropometrici, fisiologici e biochimici sono stati misurati in due sessioni, prima e dopo il trattamento. Le misurazioni antropometriche riguardavano peso corporeo, altezza, vita e circonferenza dei fianchi, oltre all'analisi corporea utilizzando Inbody 770. Come misura fisiologica, è stata considerata solo la pressione sanguigna utilizzando gli anomanometri WelchAllyn con bracciale per pazienti obesi. Per quanto riguarda i parametri biochimici, sono stati misurati la glicemia a digiuno, il profilo lipidico (colesterolo totale, trigliceridi, HDL, LDL), l'insulina basale e l'HbA1c. L'aderenza al trattamento e la presenza di effetti avversi è stata registrata utilizzando un registro che indicava l'ora in cui le compresse erano state ingerite e se avevano avuto effetti avversi quel giorno.

Inoltre, sono stati prelevati campioni di sangue intero da 50 pazienti, 25 avevano ricevuto il trattamento con GS (gruppo A) e 25 avevano ricevuto il trattamento con BBR (gruppo B). L'estrazione del tRNA (acido ribonucleico di trasferimento) è stata effettuata utilizzando la tecnica TRIzol®Reagent, che consiste in una miscela di isocianato di guanidina e fenolo-cloroformio. Una volta isolato l'RNA totale, questo è stato sospeso in acqua priva di RNasi per evitare la possibile degradazione del campione prima di procedere con la trascrizione inversa. L'estrazione e l'integrità del tRNA è stata verificata mediante elettroforesi su gel di agarosio. La purezza finale dei campioni è stata calcolata in base all'assorbanza ottenuta con una misurazione a 260-280. L'amplificazione del cDNA (DNA complementare) è stata eseguita utilizzando il kit di sintesi "First Strand cDNA transcription" per rtPCR di Roche. È stata eseguita una procedura di reazione a catena della polimerasi in tempo reale (RT-PCR) per determinare l'espressione relativa dell'mRNA (acido ribonucleico messaggero) dei geni studiati, utilizzando sonde della libreria del trascrittoma umano (Human Universal Probe Library), un sistema LightCycler nano termociclatore e una miscela di reazione di tipo TaqMan, tutti del marchio Roche Diagnostics (Roche Diagnostics GmbH(Gesellschaft mit beschränkter Haftung), Mannheim, Germania). Le sequenze oligo dei primer (senso e antisenso) sono state disegnate con il software ProbeFinder (Apelin, NM_017413.4, F, 5' gaa agt ggg gga tgg cta ag 3', R, 5' ccc acc cac tac cct ctt ct 3', Omentin, NM_017625.2, F, 5´ tga ggg tca ccg gat gta ac 3´, R, 5´ gga ctg gcc tct gga aag ta 3´, Resistin, NM_001193374.1, F, 5' cca ccg aga ggg atg aaa g 3', R, 5' ttc ttc cat gga gca cag g 3' e Visfatin, NM_005746.2, F, 5' aag gga tgg aac tac att ctt gag 3', R, 5' ctg tgt ttt cca ccg tga ag 3'. La miscela di reazione è stata preparata secondo il protocollo del produttore. Ogni campione è stato analizzato in duplicato e i dati ottenuti sono stati analizzati con il software LightCycler nano.

Analisi statistica La distribuzione dei dati quantitativi è stata eseguita da Shapiro Wilk. Il confronto delle frequenze è stato effettuato con X2, mentre il confronto delle medie basali tra i gruppi è stato effettuato con il t-test di Student. Le medie finali sono state confrontate con il test t di Student quando non sono state riscontrate differenze statistiche nel confronto basale, mentre nei parametri con differenze significative nella misurazione basale sono stati applicati un aggiustamento della covariata (misure ripetute ANOVA) e il test di Bonferroni per confrontare le medie finali tra gruppi. L'analisi autocontrollata è stata eseguita con il t test per dati appaiati. Le analisi sono state eseguite con il software GraphPad Prism, versione 8.0.0 per Windows (software GraphPad, San Diego, CA, USA) e il software SPSS, versione 19 (IBM Corp. rilasciato nel 2015. IBM SPSS Statistics per Windows, versione 19.0. Armonk, NY (New York), USA: IBM Corp). Un valore di p<0,05 è stato considerato come significatività statistica.