Profilowanie metabolomiczne w oparciu o jądrowy rezonans magnetyczny u pacjentów z fibromialgią

1. Pełna nazwa badania: Profilowanie metabolomiczne u pacjentów z fibromialgią w oparciu o rezonans magnetyczny jądrowy

2. Cel i znaczenie badania (cel główny, cele drugorzędne, jeśli występują):

   Oznaczanie i oznaczanie ilościowe metabolitów i aktywności enzymów metodą NMR u pacjentów z fibromialgią, zmiany wartości cytrynianów, izocytrynianów, alfa ketoglutaranów, alfa ketoglutaranów, sukcynylo-CoA, fumaranów, jabłczanów, glutaminianów, G-6 PD, fosfoglukonianów, aldehydu glicerynowego 3P i szczawiooctanów, szczególnie w metabolizmie energetycznym u tych pacjentów i ocena ich przydatności klinicznej.

3. Spodziewane korzyści i zagrożenia związane z badaniem:

   Fibromialgię definiuje się jako przewlekły zespół o nieznanej przyczynie, charakteryzujący się rozległym bólem ciała, zmęczeniem, zaburzeniami snu, zaburzeniami funkcji poznawczych i lękiem, a możliwe przyczyny obejmują czynniki genetyczne, neurologiczne, psychologiczne, związane ze snem i immunologiczne. Choroba występuje 6–9 razy częściej u kobiet. Rozpoznanie fibromialgii, którą od czasu opublikowania w 1990 roku kryteriów klasyfikacyjnych Amerykańskiego Kolegium Reumatologicznego (ACR) określa się jako zespół prawdziwy, jest trudne ze względu na subiektywizm objawów, fakt, że ocena opiera się na doniesień oraz brak obiektywnych badań diagnostycznych potwierdzających diagnozę. Kryteria diagnostyczne fibromialgii, która została po raz pierwszy opisana w XIX wieku i jest najczęstszą zaraz po chorobie zwyrodnieniowej chorobą reumatyczną, ulegają ciągłym zmianom. Oprócz trudności w rozpoznaniu choroby, fizjopatologia nie jest w pełni poznana i nie określono konkretnego celu leczenia.

   Liczba badań metabolomicznych w analizie surowicy i moczu pacjentów z fibromialgią jest ograniczona i aby wypełnić tę lukę, użyjemy urządzenia Bruker 500 MHertz NMR z doświadczonym zespołem do zbadania oznaczania metabolitu i kwantyfikacji, aktywności enzymu, a zwłaszcza metabolizmem energii u Pacjenci z fibromialgią. Zatem zostanie zbadane, czy istnieje predyspozycja do chorób zwyrodnieniowych lub proliferacyjnych z powodu przyspieszenia lub zmniejszenia metabolizmu energii u pacjentów z fibromialgią. Zgodnie z naszym przeglądem literatury nie ma badań badających zarówno enzymów, jak i metabolitów razem u pacjentów z fibromialgią.

   W opublikowanych pracach badaczy NMR jest często stosowany do analizy struktury. Z drugiej strony, ilościowa metoda NMR (qNMR) jest w fazie rozwoju, aby rozszerzyć zakres metabolitów, które może wykryć w płynach ustrojowych (w celu wychwytywania substancji o niskim stężeniu). qNMR rozpoczęto od bardzo starych badań, a podtechniki są optymalizowane w celu zapewnienia wysokiej czułości. Wraz z rozwojem technologii spektrum to będzie się poszerzać i w przyszłości na podstawie jednego odniesienia będzie można oznaczyć setki metabolitów. Choć sprzęt NMR jest dostępny na ograniczonej liczbie uniwersytetów w naszym kraju, w wyniku naszych badań ustaliliśmy, że nie ma grupy zajmującej się analizami ilościowymi. Naszym celem jest wykorzystanie naszej wiedzy teoretycznej w praktyce dzięki doświadczeniu i wiedzy pracowników Wydziału Lekarskiego Uniwersytetu Bezmi Alem Vakıf.

   Jako punkt wyjścia do naszych badań qNMR wybraliśmy chorobę fibromialgii, w przypadku której liczba próbek docierających codziennie do naszego szpitala jest dość duża. Ponadto odkryliśmy, że badania kliniczne na ten temat są dość ograniczone. Pod tym względem badacze są wyjątkowi, ponieważ zapewniają całościowe profilowanie metaboliczne u pacjentów z fibromialgią i dostarczają danych dotyczących dorosłych.

   Najważniejszym problemem związanym z techniką NMR są wysokie koszty podczas instalacji urządzenia, wówczas przy niskich kosztach eksploatacji pożądane analizy można wykonać łatwo i niewielkim kosztem w obecności materiałów referencyjnych i oprogramowania wymaganego do analizy danych. Naszym celem jest ilościowe oznaczenie metabolitów w płynach ustrojowych na urządzeniu NMR, które zostało już zainstalowane i działa na Uniwersytecie Bezmi Alem Vakıf. Jako punkt wyjścia wybraliśmy chorobę fibromialgii, dla której ilościowa analiza NMR jest bardzo rzadka w literaturze. W zakresie procedury przygotowania/analizy próbek do ilościowych analiz NMR planowane jest badanie surowicy i moczu, które stanowią pierwsze standaryzowane próbki płynów ustrojowych, a także próbek należących do populacji pacjentów i zdrowych ochotników. Na podstawie pików uzyskanych w widmie NMR zostanie przeprowadzona identyfikacja metabolitów i oznaczenie ilościowe tych metabolitów za pomocą oprogramowania dostarczonego do badania.

4. Rodzaj, zakres i projekt planowanego badania:

   W tym prospektywnym badaniu dwugrupowym identyfikacja metabolitów zostanie przeprowadzona na podstawie pików uzyskanych w widmie NMR u 50 pacjentów z klinicznie zdiagnozowaną fibromialgią i 50 zdrowych ochotników, a jego celem będzie wykonanie ilościowego oznaczenia tych metabolitów za pomocą dostarczonego oprogramowania na studia.

5. Liczba pacjentów i ochotników, którzy zostaną włączeni do badania, ich kwalifikacje i uzasadnienie wyboru:

   Śledczy zostaną przeprowadzeni między 1 stycznia 2024 r. A 1 grudnia 2024 r. Z 50 pacjentami z rozpoznaniem fibromialgii w wieku 18–65 lat, którzy spełniają kryteria włączenia i wykluczenia badaczy i 50 zdrowych wolontariuszy. Wcześniejszą analizę mocy badania przeprowadzono przy użyciu „G. Program Power-3.1.9.2 ". Średnie w obliczeniach: Wilcoxon Singed-Rank Test (jeden przypadek próbki) Rozmiar efektu 0,50, alfa 0,05, moc 0,90, liczba grup 1, liczba miar: 2, całkowita próbka obliczono na 38. W badaniu planowano uwzględnić 38 pacjentów

6. Parametry do analizy:

   Pomiar poziomu cytrynianu, izocytrynianu, alfa ketoglutaranu, sukcynylo-CoA, fumaranu, jabłczanu, glutaminianu, G-6 PD, fosfoglukonianu, aldehydu glicerynowego 3P i szczawiooctanu techniką NMR

7. Gdzie i przez kogo będą sprawdzane parametry: Badanie przeprowadzi specjalista dr Hatice Kübra Aşık w przychodni Kliniki Medycyny Fizykalnej i Rehabilitacji Prywatnego Szpitala Beykent. Doktor Hatice Kübra Aşık, a badania biochemiczne przeprowadzi prof. dr Yıldız Atamer na Oddziale Biochemii Prywatnego Szpitala Beykent.

8. Które z parametrów, które należy zastosować w badaniu, są rutynowe dla tej grupy chorób, a które są specyficzne dla badania:

   Pomiar poziomu cytrynianu, izocytrynianu, alfa ketoglutaranu, sukcynylo-CoA, fumaranu, jabłczanu, glutaminianu, G-6 PD, fosfoglukonianu, aldehydu glicerynowego 3P i szczawianu techniką NMR nie jest rutynowy dla tej choroby, ale będzie badany w tej grupie do celów badań naukowych

9. Przewidywany czas trwania prac, daty rozpoczęcia i zakończenia: 1 marca 2024 r. - 1 grudnia 2024 r.

10. Kryteria włączenia, wykluczenia i wycofania:

    Kryteria włączenia:

    Pacjentki w wieku 18-65 lat Pacjenci z klinicznymi dolegliwościami związanymi z fibromialgią (rozległy ból, osłabienie, zmęczenie, problemy ze snem, stany lękowe, ograniczenie ruchu itp.) wśród pacjentów zgłaszających się do poradni ambulatoryjnej

    Kryteria wykluczenia:

    Infekcje wirusowe lub bakteryjne, Choroby ogólnoustrojowe (cukrzyca, nadciśnienie, przewlekła niewydolność nerek, niedoczynność tarczycy) Pacjenci przyjmujący leki przeciwdepresyjne lub inne leki, Pacjenci z nieprawidłowymi wynikami badań laboratoryjnych (szybkość opadania erytrocytów, parametry biochemiczne lub serologiczne oraz badania czynnościowe tarczycy), Palacze i osoby nadużywające alkoholu. Wykluczono pacjentów chorych na reumatyczne zapalenie stawów i toczeń rumieniowaty układowy.

    Ci, którzy otrzymali leczenie z powodu nowotworu

11. Kryteria zakończenia badania: Zakończenie badania planuje się po zgromadzeniu 50 pacjentów i 50 zdrowych ochotników wymaganych do udziału w badaniu.
12. Przy ocenie danych, które mają zostać uzyskane w wyniku badań, należy zastosować metody statystyczne:

IBM SPSS (pakiet statystyczny dla nauk społecznych) Statistics dla systemu Windows, wersja 25.0. Armonk, NY: Wykorzystana zostanie firma IBM Corp. W statystyce opisowej danych w testach parametrycznych zostaną użyte wartości średnie i odchylenia standardowe; W testach nieparametrycznych stosowane będą wartości mediany, wartości minimalne i maksymalne.

Rozkład zmiennych zostanie sprawdzony testem Kołmogorowa-Smirnowa. Dla powtarzanych pomiarów o rozkładzie normalnym zostanie zastosowany test t dla par, natomiast dla danych o rozkładzie normalnym zastosowany zostanie test Wilcoxona. Wyniki zostaną ocenione przy 95% przedziale ufności, a p<0,05 zdefiniowano jako istotność statystyczną.

1. Malatji BG, Meyer H, Mason S i in. Badania metabolomiczne NMR wybranych pacjentów i grupy kontrolnej w oparciu o profil biomarkerów diagnostycznych zespołu fibromialgii. BMC Neurologia (2017), 17:88
2. Hsu W-H, Lee C-H, Chao Y-M i in. Zależne od ASIC3 profilowanie metabolomiczne surowicy i moczu w mysim modelu fibromialgii, raporty naukowe, (2019), 9:12123.
3. Clos-Garcia M, Andrés-Marin N, Fernández-Eulate G, i in. Analizy metabolomów jelit i metabolomu surowicy identyfikują biomarkery molekularne i zmieniły metabolizm glutaminianu w fibromialgii. Ebiomedicine (2019), 46: 499-511.
4. Hackshaw KV, Aykas DP, Sigurdson GT i in. Metaboliczne odciski palców w diagnostyce fibromialgii i innych chorób reumatologicznych. J. Biol. Chem. (2019), 294(7):2555-2568.
5. Hsu W-H, Han D-S, Ku W-C i in. Metabolomiczna i proteomiczna charakterystyka fenotypów sng i bólu w fibromialgii. Eur J. Pain, (2022), 26:445–462.
6. Victoria Menzies, Angela Starkweather, Yingwei Yao i in. Różnice metaboliczne u kobiet z fibromialgią i bez niej. Clin Transl Sci (2020) 13, 67-77.
7. Bal SH, Budak F. Przegląd genomiki, koncepcji proteomiki i obszaru zastosowań w czasopiśmie Wydziału Lekarskiego Uniwersytetu Uludag, 39 (1)65-69, 2013.
8. Başaran E, Aras S, Cansaran-Duman D. Ogólne perspektywy i zastosowania genomiki, proteomiki i metabolomiki.Turkish Journal of Hygiene and Experimental Biology 2010; 67 (2): 85-96.
9. Dogana HO. Nieukierunkowana analiza metabolomiczna. Dni Biochemii Sivasa, 2-5 listopada 2016 r.
10. Marques AP, Santo ASE, Berssaneti AA, Matsutani LA, Yuan SLK. Częstość występowania fibromialgii: aktualizacja przeglądu literatury. Rev Biustonosze Reumatol. 2017;57(4):356-363.
11. Macfarlane GJ, Kronisch C, Dean LE, Atzeni F, Häuser W, Flub E i in. EULAR zrewidował zalecenia dotyczące leczenia fibromialgii. Ann Rheum Dis. 2017;76(2):318-328.