Метаболомное профилирование на основе ядерного магнитного резонанса у пациентов с фибромиалгией

1. Полное название исследования: Метаболомное профилирование на основе ядерного магнитного резонанса у пациентов с фибромиалгией.

2. Цель и важность исследования (основная цель, второстепенные цели, если таковые имеются):

   Определение и количественная оценка метаболитов и активности ферментов с помощью ЯМР у пациентов с фибромиалгией, изменения значений цитрата, изоцитрата, альфа-кетоглутарата, альфа-кетоглутарата, сукцинил-КоА, фумарата, малата, глутамата, G-6 PD, фосфоглюконата, глицеральдегида 3 P и оксалоацетата, особенно энергетического метаболизма у этих пациентов и оценка их клинической полезности будет быть расследованы.

3. Ожидаемые преимущества и риски исследования:

   Фибромиалгия определяется как хронический синдром неизвестной причины, характеризующийся широко распространенной болью в теле, утомляемостью, нарушением сна, нарушением когнитивных функций и тревогой, а возможные причины включают генетические, неврологические, психологические, связанные со сном и иммунологические факторы. Заболевание встречается у женщин в 6-9 раз чаще. Диагностика фибромиалгии, которая была определена как истинный синдром после публикации классификационных критериев Американского колледжа ревматологов (ACR) в 1990 году, затруднена из-за субъективности симптомов, а также того факта, что оценка основывается на индивидуальной оценке пациента. отчетов и отсутствие объективных диагностических тестов для подтверждения диагноза. Диагностические критерии фибромиалгии, которая была впервые описана в XIX веке и является наиболее распространенным ревматическим заболеванием после остеоартрита, постоянно меняются. Помимо сложности диагностики заболевания, физиопатология до конца не изучена и конкретная цель лечения не определена.

   Количество метаболомических исследований в анализах сыворотки и мочи пациентов с фибромиалгией ограничено, и чтобы восполнить этот пробел, мы будем использовать ЯМР-устройство Bruker 500 МГц с опытной командой для изучения определения и количественного определения метаболитов, активности ферментов и особенно энергетического метаболизма у пациентов с фибромиалгией. Пациенты с фибромиалгией. Таким образом, будет исследовано, существует ли предрасположенность к дегенеративным или пролиферативным заболеваниям из-за ускорения или снижения энергетического обмена у пациентов с фибромиалгией. Согласно нашему обзору литературы, исследований, изучающих одновременно ферменты и метаболиты у пациентов с фибромиалгией, не проводилось.

   В опубликованных работах исследователей ЯМР часто используется для анализа структуры. С другой стороны, количественный ЯМР (qNMR) находится в стадии разработки с целью расширения диапазона метаболитов, которые он может обнаружить в жидкостях организма (для улавливания низких концентраций веществ). qNMR начался с очень старых исследований, а дополнительные методы оптимизируются для обеспечения высокой чувствительности. С развитием технологий этот спектр будет расширяться, и в будущем сотни метаболитов можно будет определять с помощью одного эталона. Хотя оборудование ЯМР доступно в ограниченном числе университетов нашей страны, в результате наших исследований мы установили, что нет группы, занимающейся количественным анализом. В рамках нашего проекта мы стремимся применить наши теоретические знания на практике, используя опыт и знания преподавателей медицинского факультета Университета Безми Алема Вакифа.

   В качестве отправной точки для наших исследований qNMR мы выбрали фибромиалгию, при которой количество ежедневных образцов, поступающих в нашу больницу, довольно велико. Кроме того, мы обнаружили, что клинические исследования по этому вопросу весьма ограничены. В этом смысле исследователи уникальны тем, что они предоставят целостное метаболическое профилирование пациентов с фибромиалгией и предоставят данные о взрослых.

   Наиболее важной проблемой метода ЯМР являются высокие затраты при установке устройства, тогда при низких эксплуатационных затратах желаемые анализы можно выполнить легко и с небольшими затратами при наличии справочных материалов и программного обеспечения, необходимого для анализа данных. Мы стремимся провести количественный анализ метаболитов в жидкостях организма на устройстве ЯМР, которое уже установлено и в настоящее время работает в Университете Безми Алема Вакифа. В качестве отправной точки мы выбрали фибромиалгию, количественный ЯМР-анализ которой в литературе встречается очень редко. Что касается процедуры подготовки/анализа проб для количественного ЯМР-анализа, планируется изучить сыворотку и мочу, которые являются первыми стандартизированными пробами жидкости организма, а также пробы, принадлежащие популяции пациентов и здоровых добровольцев. По пикам, полученным в спектре ЯМР, будет произведена идентификация метаболитов и проведен количественный анализ этих метаболитов с помощью программного обеспечения, которое будет предоставлено для исследования.

4. Тип, объем и дизайн планируемого исследования:

   В этом проспективном исследовании с участием двух групп идентификация метаболитов будет проводиться в соответствии с пиками, полученными в спектре ЯМР у 50 пациентов с клинически диагностированной фибромиалгией и 50 здоровых добровольцев, и его цель - провести количественный анализ этих метаболитов с помощью программного обеспечения, которое будет предоставлено. для учебы.

5. Количество пациентов и добровольцев, которые будут включены в исследование, их квалификация и обоснование отбора:

   Исследования будут проводиться с 1 января 2024 г. по 1 декабря 2024 г. с участием 50 пациентов с диагнозом фибромиалгия в возрасте от 18 до 65 лет, соответствующих критериям включения и исключения исследователей, и 50 здоровых добровольцев. Предварительный анализ мощности исследования был выполнен с использованием «G. Программа Power-3.1.9.2". Средние значения в расчетах: одноранговый критерий Уилкоксона (один случай выборки), размер эффекта 0,50, альфа 0,05, мощность 0,90, количество групп 1, количество измерений: 2, общая выборка рассчитана как 38. Всего в исследование планировалось включить 38 пациентов.

6. Параметры для анализа:

   Измерение цитрата, изоцитрата, альфа-кетоглутарата, сукцинил-коа, фумарата, малата, глутамата, G-6 PD, фосфоглуконата, глицеральдегида 3 P и уровней оксалоацетата с помощью ММР Техника.

7. Где и кем будут проверяться параметры: Исследование проведет специалист доктор Хатидже Кюбра Ашик в поликлинике Клиники физической медицины и реабилитации частной больницы Бейкента. Доктор Хатидже Кюбра Ашик и биохимические тесты проведет профессор доктор Йылдыз Атамер в отделении биохимии частной больницы Бейкента.

8. Какие из параметров, которые будут использоваться в исследовании, являются рутинными для данной группы заболеваний, а какие специфичны для исследования:

   Измерение уровней цитрата, изоцитрата, альфа-кетоглутарата, сукцинил-КоА, фумарата, малата, глутамата, G-6 PD, фосфоглюконата, глицеральдегида 3 P и оксалоацетата методом ЯМР не является обычным для этого заболевания, но будет изучено в этой группе в научно-исследовательских целях.

9. Планируемая продолжительность работ, даты начала и окончания: 1 марта 2024 г. – 1 декабря 2024 г.

10. Критерии включения, исключения и отмены:

    Критерии включения:

    Пациентки женского пола в возрасте 18-65 лет Пациенты с клиническими жалобами на фибромиалгию (распространенная боль, слабость, утомляемость, проблемы со сном, тревожность, ограничение движений и др.) среди пациентов, обратившихся в поликлинику

    Критерии исключения:

    Вирусные или бактериальные инфекции, Системные заболевания (сахарный диабет, гипертония, хроническая почечная недостаточность, гипогипертиреоз), Пациенты, принимающие антидепрессанты или лекарства, Пациенты с аномальными результатами лабораторных исследований (скорость оседания эритроцитов, биохимические или серологические показатели и тесты функции щитовидной железы), Курильщики и из исследования были исключены потребители алкоголя, пациенты с ревматическим артритом и системной красной волчанкой.

    Те, кто лечился от опухоли

11. Критерии прекращения исследования. Исследование планируется прекратить после завершения участия в нем 50 пациентов и 50 здоровых добровольцев, необходимых для участия в исследовании.
12. При оценке данных, полученных в результате исследования, следует использовать статистические методы:

Статистика IBM SPSS (статистический пакет для социальных наук) для Windows, версия 25.0. Армонк, штат Нью-Йорк: будет использоваться корпорация IBM. В описательной статистике данных значения среднего и стандартного отклонения будут использоваться в параметрических тестах; медианные значения, минимальные и максимальные значения будут использоваться в непараметрических тестах.

Распределение переменных будет проверено с помощью теста Колмогорова-Смирнова. Парный t-критерий будет использоваться для повторных измерений с нормальным распределением, а критерий Уилкоксона — для данных с ненормально распределенным распределением. Результаты будут оцениваться с доверительным интервалом 95%, а p<0,05 определяется как статистическая значимость.

1. Malatji BG, Meyer H, Mason S, et al. ЯМР -метаболомические исследования выбранных пациентов и контролей на основе диагностического профиля биомаркера для синдрома фибромиалгии. BMC Неврология (2017), 17:88
2. Сюй В.Х., Ли Ч.Х., Чао Ю.М. и др. ASIC3-зависимое метаболомное профилирование сыворотки и мочи на мышиной модели фибромиалгии Scientific Reports, (2019), 9:12123.
3. Кло-Гарсия М., Андрес-Марин Н., Фернандес-Эулат Г. и др. Анализы кишечного микробиома и метаболома сыворотки выявляют молекулярные биомаркеры и измененный метаболизм глутамата при фибромиалгии. ЭБиоМедицина (2019), 46:499-511.
4. Хакшоу К.В., Айкас Д.П., Сигурдсон Г.Т. и др. Метаболический дактилоскопический анализ для диагностики фибромиалгии и других ревматологических заболеваний. Ж. Биол. хим. (2019), 294(7):2555-2568.
5. Сюй В.Х., Хань Д.С., Ку В.К. и др. Метаболомная и протеомная характеристика фенотипов СНГ и боли при фибромиалгии. Eur J Pain, (2022), 26:445-462.
6. Виктория Мензис, Анджела Старквезер, Инвэй Яо и др. Метаболомические различия у женщин с фибромиалгией и без нее. Клин Трансл Научный (2020) 13, 67-77.
7. Бал Ш., Будак Ф. Обзор концепций геномики, протеомики и области их применения. Журнал медицинского факультета Университета Улудаг, 39 (1) 65-69, 2013.
8. Башаран Э., Арас С., Кансаран-Думан Д. Общий обзор и применение геномики, протеомики и метаболомики. Турецкий журнал гигиены и экспериментальной биологии, 2010; 67 (2): 85-96.
9. Доган ХО. Нецелевой метаболомический анализ. Дни биохимии Сиваса, 2–5 ноября 2016 г.
10. Маркес А.П., Санто АСЕ, Берссанети А.А., Мацутани Л.А., Юань СЛК. Распространенность фибромиалгии: обновление обзора литературы. Преподобный Брас Реуматол. 2017;57(4):356-363.
11. Макфарлейн Г.Дж., Крониш С., Дин Л.Е., Ацени Ф., Хойзер В., Флаб Э. и др. EULAR пересмотрела рекомендации по лечению фибромиалгии. Энн Реум Дис. 2017;76(2):318-328.