Biomarcadores da Variabilidade CYP2D6 e CYP3A4 em Pediatria

Esta proposta representa uma continuação de estudos longitudinais anteriores e em andamento para caracterizar a contribuição relativa da farmacogenética e da ontogenia para a variabilidade na atividade de CYP2D6 e CYP3A4 entre o nascimento e a adolescência. Especificamente, o objetivo geral do programa de pesquisa é testar a hipótese de que a variabilidade genética, e não a ontogenia, é a principal fonte de variabilidade na atividade de CYP2D6 e CYP3A4 durante a adolescência. Este estudo estenderá nossa série atual de estudos de fenotipagem longitudinal e será um estudo transversal em crianças de 7 a 15 anos, estudados em sete ocasiões, com 6 meses de intervalo.

As crianças serão recrutadas nos Hospitais e Clínicas Children's Mercy, no Campus Northland do Hospital Children's Mercy e no Campus Sul da Children's Mercy.

Os participantes deste estudo consistirão em um total de 220 crianças e adolescentes de 7 a 15 anos de idade com uma distribuição étnica e de gênero representativa da população de pacientes atendida pelo Children's Mercy Hospital (CMH; de um período representativo de 12 meses) como segue : Branco, 59,6%; afro-americanos, 31,9%; hispânicos, 4,9%; asiáticos, 0,6%; nativos americanos, 0,1%; Outros, 2,9%. A distribuição por gênero é de 44,4% feminino e 55,6% masculino. Um número igual de pacientes pediátricos que atendem aos critérios do DSM-IV para um diagnóstico primário de TDAH ou DDA (~33%) e controles pareados por idade e sexo (~67%) serão recrutados. Os pacientes representam uma população de crianças que podem razoavelmente esperar serem tratadas com um medicamento que depende principalmente do CYP2D6 para sua eliminação do corpo. Um exemplo é a atomoxetina, também conhecida como Strattera®. Cada paciente será solicitado a convidar um amigo para participar do estudo de fenotipagem com ele, fornecendo uma população sem TDAH como referência. Visitas adicionais de fenotipagem ocorrerão a cada seis meses (totalizando 7 visitas). Justificativa: Assumindo uma taxa de atrito de 10% para a segunda visita, espera-se que o tamanho da amostra forneça aproximadamente 25 pacientes e 25 controles (50 indivíduos no total) em cada faixa etária inicial de 2 anos: 7,0 a 9,0 anos, 9,1 a 11,0 anos, 11,1 a 13,0 anos e 13,1 a 15,0 anos.

Os indivíduos serão inscritos por meio de permissão/consentimento informado e serão estudados como pacientes ambulatoriais utilizando recursos fornecidos pela Unidade de Pesquisa Clínica Pediátrica localizada na Divisão de Farmacologia Clínica e Toxicologia Médica do Children's Mercy Hospital. Para o grupo TDAH, os pacientes em tratamento com atomoxetina no momento da inscrição no estudo poderão participar. Embora estudos in vitro indiquem que a atomoxetina inibe a atividade do CYP2D6 em aproximadamente 50%, não parece haver nenhum efeito in vivo, pois a farmacocinética de dose única do substrato do CYP2D6, a desipramina, não foi afetada por quatro dias de atomoxetina 60 mg b.i.d. Assim, não esperamos nenhum efeito substancial na biotransformação do DM. Além disso, se durante o intervalo de seis meses entre as visitas de fenotipagem, os pacientes com TDAH receberem prescrição de medicamentos inibidores conhecidos do CYP2D6, eles poderão continuar no estudo; a dose e a data de início desses medicamentos serão registradas e o efeito do inibidor no fenótipo CYP2D6 (taxa de metabólitos urinários e biomarcador endógeno) será determinado. Esses pontos de dados serão excluídos da análise de ontogenia e correlação genótipo-fenótipo

Visita pré-estudo. (cerca de 1 hora de duração) Em uma visita de triagem, os possíveis participantes (e seus pais) receberão uma descrição do estudo proposto. Depois que todas as suas perguntas forem respondidas, eles receberão uma cópia do formulário de permissão/consentimento para revisar e assinar. Os Sujeitos terão seu histórico médico e uso de medicamentos revisados, incluindo o uso de medicamentos não prescritos e fitoterápicos. Todos os indivíduos passarão por um exame físico completo por um médico, incluindo sinais vitais (pressão arterial, frequência cardíaca, frequência respiratória, temperatura, altura e peso) e uma avaliação do desenvolvimento puberal pelo estágio de Tanner. O desenvolvimento das mamas será avaliado por inspeção visual. Os pelos pubianos serão avaliados por inspeção visual. O volume testicular será medido por comparação direta com as contas do orquidômetro. O estadiamento de Tanner será avaliado por um médico adequado ao gênero. O sangue será coletado por picada de agulha para química sérica, testes de função hepática e um painel de hematologia; uma porção também será retida para teste de DNA (aproximadamente 2 colheres de chá de sangue no total). A urina será coletada para um exame de urina com Micro. Um creme anestésico pode ser aplicado no local para minimizar o desconforto. Um teste de gravidez de urina será realizado para mulheres em idade reprodutiva.

O teste de DNA, referido como "genotipagem", será conduzido por uma combinação de tecnologias projetadas para detectar variações de nível de nucleotídeo único (incluindo polimorfismos, inserções e deleções), para maiores deleções de genes, rearranjos, estruturas híbridas e variações no número de cópias usando métodos estabelecidos no Laboratório de Farmacologia do Desenvolvimento e Terapêutica Experimental. À medida que a tecnologia de sequenciamento de próxima geração se estabelece, as tecnologias existentes serão substituídas pelo sequenciamento de próxima geração por sua capacidade de avaliar toda a região do gene em vez de locais individuais.

Dia de estudo 1 (cerca de 5 horas de duração) Aproximadamente uma semana após a visita pré-estudo, os participantes serão admitidos na unidade de estudo. A criança deve abster-se de comer 2 horas antes da visita agendada. Antes da dosagem, os indivíduos esvaziarão completamente suas bexigas e fornecerão uma amostra de urina em branco. Cada indivíduo receberá então uma dose única de 0,5 mg/kg de DM como Robitussin Tosse (7,5 mg/5 ml; sem álcool, sabor de ponche de frutas). Toda a urina produzida durante o período de estudo de 4 horas será coletada. A urina será retida para análise de DM e seus três metabólitos, e para análises metabolômicas. Uma hora após a dosagem, os indivíduos receberão uma pequena refeição que selecionarão no menu padrão do hospital. Um teste de gravidez será realizado para mulheres em idade reprodutiva. Os indivíduos serão solicitados a fornecer respirações (inspiratórias e expiratórias) por dez minutos com um calorímetro indireto portátil (ou seja, MedGen/Body Gem: também conhecido como "GEM") com um clipe no nariz. As medições obtidas para as taxas metabólicas em repouso ocorrerão antes da administração e 4 horas após a administração.

Os participantes serão questionados sobre como estão se sentindo durante o estudo e antes de irem para casa.

Dia de estudo 2-7 (cerca de 5 horas de duração) As visitas restantes ocorrerão a cada 6 meses após o Dia de estudo 1; as sessões de estudo serão adiadas por 1-2 semanas se os sujeitos estiverem sofrendo de sintomas semelhantes aos da gripe. A criança deve abster-se de comer 2 horas antes da visita agendada. Para mulheres, um teste de gravidez será realizado usando a amostra de urina pré-dose antes da dosagem de DM.

Os indivíduos terão seu histórico médico e uso de medicamentos revisados, incluindo o uso de remédios sem receita e fitoterápicos. Os indivíduos passarão por um exame físico completo por um médico, incluindo sinais vitais (pressão arterial, frequência cardíaca, frequência respiratória, temperatura, altura e peso) e uma avaliação do desenvolvimento puberal pelo estágio de Tanner. O desenvolvimento das mamas será avaliado por inspeção visual. Os pelos pubianos serão avaliados por inspeção visual. O volume testicular será medido por comparação direta com as contas do orquidômetro. O estadiamento de Tanner será avaliado por um médico adequado ao gênero.

Os sujeitos serão admitidos na unidade de estudo. Antes da dosagem, os indivíduos esvaziarão completamente suas bexigas e fornecerão uma amostra de urina em branco. Cada indivíduo receberá então uma dose única de 0,5 mg/kg de DM como Robitussin Tosse (7,5 mg/5 ml; sem álcool, sabor de ponche de frutas). Toda a urina produzida durante o período de estudo de 4 horas será coletada. A urina será retida para análise de DM e seus três metabólitos, e para análises metabolômicas. Uma hora após a dosagem, os indivíduos receberão uma pequena refeição que selecionarão no menu padrão do hospital. Um teste de gravidez será realizado para mulheres em idade reprodutiva. Os indivíduos serão solicitados a fornecer respirações (inspiratórias e expiratórias) por dez minutos com um calorímetro indireto portátil (ou seja, MedGen/Body Gem: também conhecido como "GEM" com um clipe no nariz. As medições obtidas para as taxas metabólicas de repouso ocorrerão antes da dosagem. Os participantes serão questionados sobre como estão se sentindo durante o estudo e antes de irem para casa.