Биомаркеры вариабельности CYP2D6 и CYP3A4 в педиатрии

Это предложение представляет собой продолжение предыдущих и продолжающихся лонгитюдных исследований для характеристики относительного вклада фармакогенетики и онтогенеза в изменчивость активности CYP2D6 и CYP3A4 между рождением и подростковым возрастом. В частности, общая цель исследовательской программы состоит в том, чтобы проверить гипотезу о том, что генетическая изменчивость, а не онтогенез, является основным источником изменчивости активности CYP2D6 и CYP3A4 в подростковом возрасте. Это исследование расширит нашу текущую серию продольных исследований фенотипирования и будет поперечным исследованием детей в возрасте 7-15 лет, изученным семь раз с интервалом в 6 месяцев.

Дети будут набраны из больниц и клиник Children's Mercy, Северного кампуса Children's Mercy Hospital и Южного кампуса Children's Mercy.

Субъекты, участвующие в этом исследовании, будут состоять из 220 детей и подростков в возрасте от 7 до 15 лет с гендерным и этническим распределением, репрезентативным для пациентов, обслуживаемых Детской больницей милосердия (CMH; с репрезентативного 12-месячного периода), следующим образом. : белый, 59,6%; афроамериканцы, 31,9%; латиноамериканцы, 4,9%; азиаты, 0,6%; коренные американцы, 0,1%; Другое, 2,9%. Распределение по полу: 44,4% женщин и 55,6% мужчин. Будет набрано равное количество педиатрических пациентов, которые соответствуют критериям DSM-IV для первичного диагноза СДВГ или СДВ (~33%), и контрольной группы того же возраста и пола (~67%). Пациенты представляют собой популяцию детей, которые могут разумно рассчитывать на лечение лекарством, выведение которого из организма в первую очередь зависит от CYP2D6. Примером является атомоксетин, также известный как Strattera®. Каждому пациенту будет предложено пригласить друга для участия в исследовании фенотипирования с ним, предоставив в качестве эталона популяцию без СДВГ. Дополнительные посещения для фенотипирования будут проводиться каждые шесть месяцев (всего 7 посещений). Обоснование: при допущении 10%-ного коэффициента отсева для второго визита ожидается, что размер выборки обеспечит примерно 25 пациентов и 25 контрольных пациентов (всего 50 субъектов) в каждом начальном 2-летнем интервале возраста: от 7,0 до 9,0 лет, от 9,1 до 11,0 лет, от 11,1 до 13,0 лет и от 13,1 до 15,0 лет.

Субъекты будут зачислены с информированного разрешения/согласия и будут изучаться амбулаторно с использованием ресурсов, предоставленных Педиатрическим клиническим исследовательским отделом, расположенным в отделении клинической фармакологии и медицинской токсикологии в Детской больнице милосердия. Что касается группы СДВГ, к участию допускаются пациенты, получавшие атомоксетин на момент включения в исследование. Хотя исследования in vitro показывают, что атомоксетин ингибирует активность CYP2D6 примерно на 50%, in vivo не наблюдается никакого эффекта, поскольку фармакокинетика однократной дозы дезипрамина, субстрата CYP2D6, не изменилась после четырехдневного приема атомоксетина в дозе 60 мг два раза в день. Таким образом, мы не ожидаем существенного влияния на биотрансформацию ДМ. Кроме того, если в течение шестимесячного интервала между визитами для фенотипирования пациентам с СДВГ будут назначены лекарства, которые являются известными ингибиторами CYP2D6, им будет разрешено продолжить исследование; будут зарегистрированы доза и дата начала приема этих препаратов, а также будет определено влияние ингибитора на фенотип CYP2D6 (соотношение метаболитов в моче и эндогенный биомаркер). Эти точки данных будут исключены из онтогенеза и корреляционного анализа генотип-фенотип.

Предварительный визит. (продолжительность около 1 часа) Во время скринингового визита предполагаемым субъектам (и их родителям) будет предоставлено описание предлагаемого исследования. После того, как на все их вопросы будут даны ответы, им будет предоставлена ​​копия формы разрешения/согласия для ознакомления и подписания. Затем субъекты проанализируют свою историю болезни и использование лекарств, включая использование безрецептурных и растительных лекарственных средств. Все субъекты будут подвергнуты полному медицинскому осмотру врачом, включая основные показатели жизнедеятельности (артериальное давление, частота сердечных сокращений, частота дыхания, температура, рост и вес) и оценку полового развития по стадии Таннера. Развитие груди будет оцениваться при визуальном осмотре. Волосы на лобке будут оцениваться путем визуального осмотра. Объем яичек будет измеряться путем прямого сравнения с шариками орхидометра. Стадию по Таннеру будет оценивать врач, соответствующий полу. Кровь будет взята иглой для биохимического анализа сыворотки, функциональных тестов печени и гематологической панели; часть также будет сохранена для анализа ДНК (всего примерно 2 чайные ложки крови). Моча будет собрана для анализа мочи с помощью Micro. На место можно нанести обезболивающий крем, чтобы свести к минимуму дискомфорт. Женщинам детородного возраста будет проводиться анализ мочи на беременность.

Тестирование ДНК, именуемое «генотипированием», будет проводиться с использованием комбинации технологий, разработанных для обнаружения вариаций на уровне отдельных нуклеотидов (включая полиморфизмы, вставки и делеции) до более крупных генных делеций, реаранжировок, гибридных структур и вариаций числа копий с использованием установленных методов. в Лаборатории экспериментальной фармакологии и экспериментальной терапии. По мере внедрения технологии секвенирования следующего поколения существующие технологии будут заменены секвенированием следующего поколения из-за его способности оценивать всю область гена, а не отдельные участки.

День исследования 1 (продолжительность около 5 часов) В течение примерно одной недели после визита перед исследованием испытуемые будут допущены в исследовательский блок. Ребенок должен воздержаться от еды за 2 часа до запланированного визита. Перед дозированием субъекты полностью опорожняют мочевой пузырь и сдают чистый образец мочи. Затем каждому субъекту будет дана однократная доза 0,5 мг/кг DM в виде робитуссина от кашля (7,5 мг/5 мл; без спирта, со вкусом фруктового пунша). Вся моча, произведенная в течение 4-часового периода исследования, будет собрана. Моча будет сохранена для анализа DM и его трех метаболитов, а также для метаболомических анализов. Через час после введения испытуемым будет предложено небольшое количество еды, которую они выберут из стандартного больничного меню. Тест на беременность будет проводиться для женщин детородного возраста. Субъектов попросят обеспечить дыхание (вдох и выдох) в течение десяти минут с помощью ручного непрямого калориметра (т. MedGen/Body Gem: также известный как «GEM») с зажимом на носу. Измерения, полученные для скорости метаболизма в состоянии покоя, будут проводиться до введения дозы и через 4 часа после ее введения.

Субъектов будут спрашивать, как они себя чувствуют во время исследования и перед отъездом домой.

День исследования 2-7 (продолжительность около 5 часов) Остальные посещения будут происходить каждые 6 месяцев после дня исследования 1; учебные сессии будут отложены на 1-2 недели, если испытуемые страдают от гриппоподобных симптомов. Ребенок должен воздержаться от еды за 2 часа до запланированного визита. Для женщин тест на беременность будет проводиться с использованием образца мочи перед введением дозы DM.

Затем у субъектов будет рассмотрена их история болезни и использование лекарств, включая использование безрецептурных и растительных лекарственных средств. Субъектам будет предоставлен полный медицинский осмотр врачом, включая основные показатели жизнедеятельности (артериальное давление, частота сердечных сокращений, частота дыхания, температура, рост и вес) и оценку полового развития по стадии Таннера. Развитие груди будет оцениваться при визуальном осмотре. Волосы на лобке будут оцениваться путем визуального осмотра. Объем яичек будет измеряться путем прямого сравнения с шариками орхидометра. Стадию по Таннеру будет оценивать врач, соответствующий полу.

Субъекты будут допущены к учебному блоку. Перед дозированием субъекты полностью опорожняют мочевой пузырь и сдают чистый образец мочи. Затем каждому субъекту будет дана однократная доза 0,5 мг/кг DM в виде робитуссина от кашля (7,5 мг/5 мл; без спирта, со вкусом фруктового пунша). Вся моча, произведенная в течение 4-часового периода исследования, будет собрана. Моча будет сохранена для анализа DM и его трех метаболитов, а также для метаболомических анализов. Через час после введения испытуемым будет предложено небольшое количество еды, которую они выберут из стандартного больничного меню. Тест на беременность будет проводиться для женщин детородного возраста. Субъектов попросят обеспечить дыхание (вдох и выдох) в течение десяти минут с помощью ручного непрямого калориметра (т. MedGen/Body Gem: также известный как «GEM» с зажимом на носу. Измерения, полученные для скорости метаболизма в состоянии покоя, будут проводиться до дозирования. Субъектов будут спрашивать, как они себя чувствуют во время исследования и перед отъездом домой.