Vacinas em tempos de dupla pandemia: vacina contra a COVID-19 em pessoas com VIH

As pessoas com VIH (PWH) podem apresentar um risco aumentado de doenças relacionadas com a COVID-19 ou de mortalidade após a infecção por SARS-CoV-21-5, e as vacinas contra a COVID-19 desempenharão um papel significativo no combate à pandemia. Atualmente, existem duas vacinas de mRNA a serem utilizadas em Ontário (Pfizer-BioNTech, Moderna), ambas com regime de duas doses6,7. Embora os dados até agora não sugiram quaisquer preocupações específicas de segurança para as pessoas com HAP, apenas um número limitado de pessoas com HAP participou em ensaios de vacinas contra a COVID-19 e foram recrutados tardiamente durante dois grandes estudos recentes de aprovação confirmatória. Além disso, a revisão de aprovação de emergência dos ensaios confirmatórios para uma das vacinas não incluiu PWH nos cálculos de segurança e eficácia7,8, incluindo PWH recebendo terapia antirretroviral (TARV) que apresentam viremia de baixo nível contínua, imunossenescência e/ou ativação imunológica persistente . No entanto, as PWH são encorajadas a serem vacinadas imediatamente enquanto a recolha de dados continua.

Uma lacuna significativa no nosso conhecimento - e com base na experiência com vacinas administradas a PWH para outros agentes patogénicos9 - é se as vacinas contra a COVID-19 podem ter algum impacto na inflamação crónica contínua e outras desregulações imunitárias que podem exacerbar a incidência de co-morbilidade ou afectar a dinâmica da reservatório do vírus da imunodeficiência humana (HIV). Portanto, compreender como as vacinas contra a COVID-19 afectam a activação imunitária e os reservatórios de VIH em PWH é de suma importância e pode ter implicações para 38 milhões de PWH em todo o mundo. Além disso, a imunossenescência prematura relatada anteriormente em PWH, juntamente com a heterogeneidade da reconstituição imunológica após o início da TARV, sugere que será crucial determinar se as vacinas contra a COVID-19 podem induzir respostas imunitárias protetoras e robustas, tanto a curto como a longo prazo, particularmente em subgrupos específicos com imunocompetência diminuída. Elucidar o efeito das vacinas contra a COVID-19 na activação imunitária e no reservatório do VIH, bem como a eficácia da vacina na PWH, é fundamental, mas é pouco provável que seja avaliado pelos patrocinadores da vacina.

Esperamos que a nossa população de estudo não seja incluída na administração prioritária das vacinas contra a COVID-19 em Ontário. Nossa população-alvo são PWH com mais de 55 anos de idade, muitas vezes com comorbidades, aos quais provavelmente será oferecida a vacinação dentro de uma janela mais oportuna e em um prazo conveniente para esta pesquisa direcionada.

Risco de COVID-19 em pessoas com HIV (PWH)

Embora os dados sobre o risco de COVID-19 em pessoas com VIH (PWH) sejam limitados, as evidências emergentes sugerem que as PWH podem sofrer um risco aumentado de doenças relacionadas com a COVID-19 ou de mortalidade após a infecção por SARS-CoV-2. Por exemplo, um estudo observacional prospetivo realizado no Reino Unido mostrou que, após ajuste para diversas variáveis, incluindo sexo, etnia, idade e comorbilidades selecionadas, o estado seropositivo permaneceu significativamente associado a um risco aumentado de mortalidade no dia 28 entre indivíduos hospitalizados por COVID-19. 195. Outro estudo do Reino Unido também mostrou que as pessoas com HAP apresentam risco aumentado de mortalidade por COVID-19 após ajuste para idade, sexo, privação, etnia, tabagismo e obesidade (taxa de risco ajustada 2,59; IC 95% 1,74-3,84)3. Da mesma forma, um estudo de coorte populacional da África do Sul também demonstrou que o VIH está associado à mortalidade por COVID-19 com uma taxa de risco ajustada de 2,14 (IC 95% 1,70-2,70)10. É importante notar, no entanto, que vários potenciais fatores de confusão não foram incluídos nestes estudos, tais como ocupação e marcadores substitutos do controlo do VIH11.

Entretanto, outros estudos sugerem um papel mais matizado que o VIH pode desempenhar nos resultados da COVID-19. Por exemplo, embora um estudo realizado em Nova Iorque tenha demonstrado que uma proporção mais elevada de PCH sofreu hospitalização, admissão na unidade de cuidados intensivos (UCI) e/ou morte devido à COVID-19 em comparação com indivíduos seronegativos para o VIH, os autores comentaram que a maioria das PCH que tiveram resultados ruins relacionados à COVID-19 e tiveram contagem de CD4 mais baixa (< 500 células/uL)12. Da mesma forma, um estudo multinacional descobriu que uma contagem de CD4 mais baixa (< 200 células/mm3) está associada a resultados graves, definidos por admissão na UCI, ventilação mecânica ou morte13. Outro estudo de coorte multicêntrico envolvendo três países europeus conduziu uma análise multivariada para mostrar que o único fator associado à COVID-19 grave é uma contagem atual de CD4 inferior a 350 células/uL (aOR 2,85; IC 95% 1,26-6,44), e com mortalidade, um baixo nadir na contagem de células T CD44. Em suma, a imunodeficiência pode ser um possível factor de risco para a gravidade da doença COVID-19 em PWH no contexto da supressão viral. A prevenção mediada por vacinas da infecção por SARS-CoV-2 e/ou doença grave com COVID-19 é essencial nesta população vulnerável.

As vacinas contra a COVID-19 desempenharão um papel significativo no combate à pandemia. Atualmente, existem duas vacinas de mRNA a serem utilizadas em Ontário (Pfizer-BioNTech, Moderna), ambas com regime de duas doses.

A recomendação atual do Comitê Consultivo Nacional de Imunização (NACI) afirma que "nenhum sinal de segurança preocupante foi observado até o momento em participantes não imunossuprimidos com uma condição imunocomprometida (por exemplo, infecção estável por HIV) incluída nos ensaios clínicos" e que "as pessoas que vivem com HIV considerados imunocompetentes podem ser vacinados"15. No entanto, o número de PWH recrutados nestes ensaios até à data é muito pequeno. Há também algumas sugestões de que a idade avançada e a imunossenescência associada podem ter implicações importantes, conforme evidenciado pelos resultados dos ensaios de eficácia reduzida da vacina com um amplo intervalo de confiança em participantes mais velhos (com mais de 65 anos). Na medida em que os PWH mais velhos são frequentemente caracterizados como suscetíveis a sinais acelerados ou acentuados de envelhecimento e imunossenescência, esses resultados sublinham a necessidade de avaliar mais claramente os efeitos da vacina neste grupo. Caso contrário, a eficácia da vacina em determinados subconjuntos de PWH, incluindo aqueles com viremia contínua de baixo nível, imunossenescência e/ou activação imunitária persistente, é largamente desconhecida.

Imunogenicidade Neste momento, presume-se que as vacinas que podem provocar respostas robustas e duradouras das células T e células B sejam correlatos imunológicos de proteção em indivíduos vacinados16. Tanto as vacinas Pfizer-BioNTech como Moderna descreveram a imunogenicidade nos seus ensaios anteriores.

Os dados sobre imunogenicidade e potenciais correlatos de proteção são limitados neste momento e faltam em PWH, especialmente em subgrupos com restauração imunológica subótima. Dadas as lacunas na análise de aprovação de vacinas para PWH, é importante estabelecer perfis de imunogenicidade em PWH que recebem vacinas.

Ativação imunológica persistente em PWH

Apesar dos incríveis avanços na eficácia da TARV, a supressão viral com a TARV é muitas vezes insuficiente para atenuar completamente a elevada activação imunitária presente na PWH. É importante ressaltar que a ativação imunológica persistente e/ou inflamação surgiram como preditores independentes de morbidade e mortalidade em PWH tratados com TARV. Os principais marcadores de ativação imunológica e inflamação no contexto da infecção pelo HIV incluem os níveis plasmáticos de IL-6 e proteína C reativa (PCR), bem como o marcador de coagulação D-dímero e o marcador de ativação de monócitos solúveis sCD1420-22. Outro marcador de inflamação amplamente utilizado é a ativação de células T, definida pela expressão de CD38 e HLA-DR23.

A activação imunitária tem evidentemente um impacto negativo na morbilidade e mortalidade dos PWH, mas também tem sido associada ao reservatório do VIH24. As implicações das vacinas contra a COVID-19 na activação imunitária e, por sua vez, no reservatório de VIH das PWH tratadas com TAR permanecem obscuras. Dada a falta de evidências nas vacinas contra a COVID-19, a nossa compreensão atual do seu impacto potencial na PWH só pode ser extrapolada a partir de estudos anteriores sobre vacinas não-COVID-19.

Vacinas não-COVID-19 e seu efeito na PWH

Existem várias vacinas não-COVID-19 que são recomendadas para PWH adultos no Canadá, incluindo aquelas contra gripe, tétano/difteria/tosse convulsa, pneumonia/doenças pneumocócicas, doença meningocócica, hepatite B e papilomavírus humano. Notavelmente, foi demonstrado anteriormente que algumas destas vacinas induzem transitoriamente a activação imunitária e/ou afectam o reservatório do VIH. Por exemplo, um estudo envolvendo a administração da vacina contra influenza em PWH em TARV com carga viral suprimida mostrou que a transcrição do RNA do HIV pode ocorrer na semana seguinte à vacinação9. Os autores também observaram uma maior ativação imunológica (conforme definido pela expressão de CD38 e HLA-DR) durante as quatro semanas após a vacinação. Da mesma forma, outro estudo que investigou o efeito da vacina pneumocócica em PWH tratados com TARV com cargas virais suprimidas observou um aumento transitório nos níveis plasmáticos de RNA do HIV pós-vacinação, que retornaram a níveis indetectáveis ​​dentro de quatro semanas25. Além disso, trabalhos anteriores de alguns dos co-investigadores deste actual pedido de subvenção também demonstraram que a vacina contra a gripe pode aumentar desproporcionalmente a carga proviral do VIH em células T CD4+ específicas da gripe de PWH tratados com TARV com cargas virais suprimidas, sugerindo a capacidade de vacinação afetar o reservatório do HIV26.

Uma lacuna significativa no nosso conhecimento é se as vacinas contra a COVID-19, especialmente com a sua nova plataforma baseada em mRNA, podem ter algum impacto na inflamação crónica contínua e outras desregulações imunitárias que podem exacerbar a incidência de co-morbilidade ou afectar a dinâmica do reservatório do VIH em PWH.

Uma lacuna significativa no nosso conhecimento é se as vacinas contra a COVID-19 podem induzir respostas imunitárias protetoras e robustas, tanto a curto como a longo prazo, particularmente em subgrupos específicos com imunocompetência diminuída e bem descrita. Esta é uma questão crítica a ser abordada, uma vez que agências, incluindo a NACI, expressaram preocupações em torno da eficácia no contexto da imunodeficiência. A recomendação atual do NACI afirma que "atualmente, não há dados sobre a vacinação contra COVID-19 em indivíduos imunossuprimidos" e que, uma vez que "o grau relativo de imunodeficiência em indivíduos imunocomprometidos é variável dependendo da condição subjacente, a progressão de doenças e uso de medicamentos que suprimem a função imunológica... o equilíbrio entre benefícios e riscos deve ser feito caso a caso". Além disso, há sugestões de que a imunossenescência e a idade avançada podem ter implicações importantes, conforme evidenciado por uma eficácia reduzida com um amplo intervalo de confiança com ambas as vacinas em participantes com mais de 65 anos. Outra lacuna significativa no nosso conhecimento é que não sabemos se as vacinas contra a COVID-19 podem ter algum impacto na inflamação crónica contínua e outras desregulações imunitárias que podem exacerbar a incidência de co-morbilidade ou afectar a dinâmica do reservatório do VIH. É importante ressaltar que nenhuma destas lacunas de conhecimento será provavelmente avaliada pelos patrocinadores da vacina.

OBJETIVOS DO ESTUDO Avaliar o efeito das vacinas COVID-19 na geração de resposta imune específica para SARS-CoV-2, induzindo a ativação imunológica sistêmica e afetando os reservatórios virais do HIV em PWH.

Hipóteses:

Primária: A PWH apresentará uma resposta imunitária diminuída às vacinas contra a COVID-19 em termos de robustez e durabilidade da resposta imunitária.

Secundário: As vacinas COVID-19 afetarão negativamente a ativação imunológica e os reservatórios de HIV em PWH.

ANÁLISE ESTATÍSTICA As características iniciais serão examinadas para avaliar a comparabilidade dos participantes nos braços do estudo. Variáveis ​​contínuas como idade e contagem de células T CD4+ serão descritas em termos de medianas e intervalos interquartis. Variáveis ​​categóricas como gênero e raça serão descritas com proporções.

As análises entre grupos HIV positivos e HIV negativos usarão o teste t de Student para 2 amostras ou o teste de Wilcoxon se houver desvio da normalidade. Intervalos de confiança bilaterais de 95% serão obtidos realizando transformações logarítmicas de títulos calculando o intervalo de confiança de 95% com referência à distribuição t de Student e, em seguida, exponenciando os limites dos intervalos de confiança. Serão feitas tentativas para procurar tendências entre os subgrupos de VIH listados acima.

• medicação nos últimos 6 meses (esteróides tópicos são permitidos)
• Para participantes HIV negativos: condições imunocomprometidas ou sob medicação que suprima a resposta imunológica

DESENHO DO ESTUDO Este é um estudo observacional prospectivo e não randomizado para examinar a imunogenicidade da vacina SARS-CoV-2, ativação imunológica e reservatórios de HIV em pessoas com infecção por HIV em comparação com indivíduos HIV-negativos, naqueles com 55 anos ou mais.

Como o Canadá está atualmente a lançar vacinas contra a COVID-19, as duas vacinas mais iminentes são as vacinas de mRNA. Estas são a vacina Pfizer-BioNTech COVID-19 administrada com 3 semanas de intervalo e a vacina Moderna COVID-19 administrada com 4 semanas de intervalo. Dados os requisitos únicos de armazenamento destas vacinas, espera-se que a vacina Moderna seja utilizada principalmente em clínicas de cuidados primários, como a Maple Leaf Medical Clinic, em Toronto. No entanto, o protocolo também permitirá o estudo observacional de indivíduos que recebem a vacina Pfizer-BioNTech, se esta também estiver disponível. Prevemos a disponibilidade geral de ambas as vacinas para a população de cuidados primários até 1 de março de 2021. A vacinação ocorrerá de acordo com as diretrizes clínicas e de saúde pública. As vacinas COVID-19 não serão administradas como parte deste estudo de pesquisa.

Duração do estudo: Este é um estudo longitudinal de local único onde 75 participantes no total são acompanhados durante 48 semanas com coleta de sangue e amostragem de saliva. As avaliações serão feitas na triagem, na linha de base e em 8 momentos adicionais durante o estudo. Detalhes sobre visitas de triagem e acompanhamento estão descritos na seção 4.4 Amostragem.

Plano de recrutamento

Um total de 75 participantes serão recrutados para o estudo. O coordenador da pesquisa clínica realizará a revisão dos prontuários com a supervisão do Investigador Principal para entrar em contato com potenciais participantes do estudo que atendam aos critérios de elegibilidade. A divisão dos braços do estudo é descrita aqui:

• Pessoas com resposta imunológica PWH (n= 35): carga viral indetectável por mais de 1 ano, CD4 >500/uL, proporção CD4/CD8 >1, incluindo indivíduos com nadir histórico e baixo de CD4

• PWH imunes não respondedores (n= 10): carga viral indetectável, CD4 <350/uL ou razão CD4/CD8 <0,75 por mais de 1 ano

• Viremia de baixo nível de PWH (n= 10): viremia de baixo nível (<1.000 cópias/mL) por mais de 1 ano, qualquer CD4, qualquer relação CD4/CD8

• Controle HIV negativo (n= 20): idade e sexo pareados

À medida que a inscrição avança, tentaremos aumentar o número nos braços PWH Imune não respondedores e PWH com viremia de baixo nível, conforme apropriado e viável.

Triagem Os participantes serão avaliados para avaliar o interesse em participar do ensaio clínico e a adequação do estudo com base nos critérios de inclusão e exclusão. A pesquisa em bases de dados também se concentrará na otimização da diversidade demográfica com base na raça/etnia e sexo/género. Os participantes que tenham interesse no estudo e que atendam aos critérios de inclusão e exclusão receberão o termo de consentimento para análise e quaisquer dúvidas serão respondidas. A visita de triagem ocorrerá 90 dias antes da visita inicial.

Exames de sangue de rotina serão realizados na consulta de triagem, incluindo hematologia, bioquímica, infecções sexualmente transmissíveis e proteína C reativa. Além dos exames de sangue de rotina, serão realizados em participantes HIV positivos: contagem de CD4, carga viral, proporção CD4/CD8. Além dos exames de sangue de rotina, serão realizados em participantes HIV negativos: Teste de HIV.

Amostragem:

Visite amostras de pesquisa de hora e data

1. Triagem* Até 90 dias antes da consulta inicial
2. Linha de base Até 24 horas antes da vacina 13 tubos de sangue (113,5mL), saliva

1ª dose da vacina COVID-19 (procedimento clínico; não faz parte deste estudo de pesquisa) 3 Acompanhamento 1 10 dias após a 1ª vacina 7 tubos de sangue (62,5mL) 4 Acompanhamento 2 21 dias após a 1ª vacina 7 tubos de sangue ( 62,5mL) 5 Acompanhamento 3 28 dias após a 1ª vacina 13 tubos de sangue (113,5mL), saliva 2ª dose da vacina COVID-19 (procedimento clínico; não faz parte deste estudo de pesquisa) 6 Acompanhamento 4 7 dias após a 2ª vacina 7 tubos de sangue (62,5mL), saliva 7 Acompanhamento 5 14 dias após a 2ª vacina 7 tubos de sangue (62,5mL) 8 Acompanhamento 6 28 dias após a 2ª vacina 7 tubos de sangue (62,5mL) 9 Acompanhamento 7 24 semanas após a 1ª vacina 13 tubos de sangue (113,5mL), saliva 10 Acompanhamento 8* 48 semanas após a 1ª vacina 13 tubos de sangue (113,5mL)

A figura acima descreve todas as visitas de estudo e amostras coletadas em cada visita. Os participantes deverão fornecer cópia do cartão de vacinação confirmando que receberam a vacina COVID-19. A visita inicial (V1) é definida como a coleta de amostras até 24 horas antes de receber a primeira dose da vacina COVID-19. Todas as outras visitas subsequentes ocorrerão +/- 3 dias dos dias indicados. Ressalta-se que a V3 (visita vacinal pós-primária de 21 dias) deve ocorrer antes do recebimento da 2ª dose da vacina, independentemente de os participantes receberem a vacina Moderna ou Pfizer-BioNTech.

Caso o participante não receba o reforço na data agendada, todos os horários pós-reforço serão ajustados de acordo com o horário da dose de reforço. Por exemplo, se um participante recebesse seu reforço Moderna 35 dias pós-prime, em vez do horário programado de 28 dias pós-prime, por motivos fora de seu controle, os pontos de tempo V4 e V5 seriam ajustados de acordo. Permitiremos um atraso para o reforço neste estudo para que um participante permaneça no protocolo do estudo, pois espera-se que a imunidade ainda deva ser obtida com um reforço em um momento tardio. Além disso, se a segunda dose for adiada por mais de 2 semanas (ou seja, (a atual pressão de Ontário para adiar a segunda dose em até 16 semanas), adicionaremos uma consulta antes da segunda dose programada (até 7 dias antes da segunda dose). As visitas do estudo serão, portanto, revisadas para pessoas com > 2 semanas de atraso na segunda dose da seguinte forma:

Visite amostras de pesquisa de hora e data

1. Triagem* Até 90 dias antes da consulta inicial
2. Linha de base Até 24 horas antes da vacina 13 tubos de sangue (113,5mL), saliva

1ª dose da vacina COVID-19 (procedimento clínico; não faz parte deste estudo de pesquisa) 3 Acompanhamento 1 10 dias após a 1ª vacina 7 tubos de sangue (62,5mL) 4 Acompanhamento 2 21 dias após a 1ª vacina 7 tubos de sangue ( 62,5mL) 5 Acompanhamento 3 28 dias após a 1ª vacina 7 tubos de sangue (62,5mL), saliva 6 Acompanhamento 4 7 dias antes do atraso da 2ª vacina 13 tubos de sangue (113,5mL), saliva 2ª dose da vacina COVID-19 (procedimento clínico; não faz parte deste estudo de pesquisa) 7 Acompanhamento 5 7 dias após a 2ª vacina 7 tubos de sangue (62,5mL), saliva 8 Acompanhamento 6 14 dias após a 2ª vacina 7 tubos de sangue (62,5mL) 9 Acompanhamento 7 28 dias após a 2ª vacina 7 tubos de sangue (62,5mL) 10 Acompanhamento 8 24 semanas após a 1ª vacina 13 tubos de sangue (113,5mL), saliva 11 Acompanhamento 9* 48 semanas após a 1ª vacina 13 tubos de sangue (113,5mL)

Dado o número frequente de coletas de sangue, os participantes ainda serão convidados a permanecer no estudo caso faltem às visitas.

É possível que seja oferecida a alguns participantes uma terceira dose de reforço da vacina, de acordo com as novas recomendações feitas pelas agências de vacinas de Ontário e do Canadá, devido ao potencial declínio da vacina em 6 meses ou outra imunossupressão subjacente (por exemplo, quimioterapia). Se um participante receber uma dose de reforço, ele será convidado a fornecer uma coleta de sangue (7 tubos de sangue) e saliva dentro de 7 dias após o terceiro reforço e 1 e 3 meses depois. Se essas visitas estiverem próximas dos mesmos pontos de tempo das visitas de acompanhamento já agendadas no gráfico acima em uma semana, então usaremos essa coleta de sangue também como visitas de acompanhamento.

Atribuição de números de identificação do participante Cada participante que consentir receberá um número de identificação de participante (PID) exclusivo, que identifica o participante para todos os procedimentos relacionados ao estudo. Os PIDs são uma combinação de um número de local de quatro dígitos mais um número de participante de três dígitos começando com 001 (por exemplo, 3001-001). Uma vez atribuídos, os PIDs não podem ser reutilizados por nenhum motivo.

Avaliações clínicas:

Visita de triagem: Os participantes serão avaliados para avaliar o interesse em participar do estudo e a adequação para o estudo com base nos critérios de inclusão e exclusão. Os participantes que tenham interesse no estudo e que atendam aos critérios de inclusão e exclusão receberão o termo de consentimento para análise e quaisquer dúvidas serão respondidas. As avaliações clínicas incluirão um histórico médico (a ser conduzido pelo coordenador da pesquisa por meio de revisão de prontuários com a supervisão do Investigador Principal) e exames de sangue de rotina, além de carga viral, contagem de CD4, proporção de CD4/CD8 para participantes HIV-positivos e teste de HIV para Participantes HIV negativos. O histórico de medicação concomitante e o regime de cART serão documentados em cada visita. A documentação da infecção por COVID-19 também será avaliada: Isso está documentado como ocorrendo em participantes que apresentaram pelo menos dois dos seguintes sintomas: febre (temperatura ≥38°C), calafrios, mialgia, dor de cabeça, dor de garganta ou novo distúrbio olfatório ou gustativo , ou como ocorrendo naqueles que apresentavam pelo menos um sinal ou sintoma respiratório (incluindo tosse, falta de ar ou evidência clínica ou radiográfica de pneumonia) e pelo menos um esfregaço nasofaríngeo, esfregaço nasal ou amostra de saliva (ou amostra respiratória, se o participante estivesse hospitalizado) positiva para SARS-CoV-2 pelo teste de reação em cadeia da polimerase com transcriptase reversa (RT-PCR). Demografia: As informações demográficas (data de nascimento, sexo, raça) serão registradas na triagem.

Vacinação: Os participantes receberão vacinas COVID-19 de acordo com as especificações padrão fornecidas pelos fabricantes das vacinas. A vacinação não é uma visita de estudo de pesquisa, mas sim administrada de acordo com as diretrizes clínicas e de saúde pública. A vacina com maior probabilidade de ser administrada devido aos requisitos de disponibilidade e armazenamento será a vacina Moderna COVID-19, que será administrada no dia 0 e na semana 4 (28 dias depois). Também é possível que esteja disponível a vacina Pfizer-BioNTech COVID-19, que será administrada pelo prestador de cuidados primários no dia 0 e na semana 3 (21 dias depois). A data da vacinação e o produto da vacina (Moderna ou Pfizer-BioNTech) serão documentados.

COLETA DE AMOSTRAS:

Como este é um estudo observacional, apenas amostras e informações clínicas serão coletadas.

Linha de base (V2):

Até 24 horas antes do recebimento da vacinação, serão obtidos: Confirmação do regime cART; Uma amostra de saliva usando um tubo de saliva deve ser entregue ao participante e devolvida ao coordenador do estudo clínico após um minuto; Punção venosa de 1 tubo SST, 2 tubos EDTA e 10 tubos ACD (113,5 ml de sangue)

Dia 10 Pós-prime (V3):

Avaliação de medicamentos concomitantes novos ou contínuos, incluindo regime de cART; Avaliação se desenvolveu infecção por COVID-19; Punção venosa de 1 tubo SST, 2 tubos EDTA e 4 ACD (62,5 ml de sangue); Informe-se sobre a reatogenicidade imediata da vacina

Dia 21 Pós-prime (V4):

Avaliação de medicamentos concomitantes novos ou contínuos, incluindo regime de cART; Avaliação se desenvolveu infecção por COVID-19; Punção venosa de 1 tubo SST, 2 tubos EDTA e 4 ACD (62,5 ml de sangue)

Dia 28 Pós-prime (V5):

Avaliação de medicamentos concomitantes novos ou contínuos, incluindo regime de cART; Uma amostra de saliva usando um tubo de saliva deve ser entregue ao participante e devolvida ao coordenador do estudo clínico após um minuto; Punção venosa de 1 tubo SST, 2 tubos EDTA e 10 tubos ACD (113,5 ml de sangue)

Dia 7 Pós-reforço (V6 ou V7 se a segunda dose for atrasada):

Avaliação de medicamentos concomitantes novos ou contínuos, incluindo regime de cART; Avaliação se desenvolveu infecção por COVID-19; Amostra de saliva; Punção venosa de 1 tubo SST, 2 tubos EDTA e 4 ACD (62,5 ml de sangue); Informe-se sobre a reatogenicidade imediata da vacina

Dia 14 Pós-reforço (V7 ou V8 se a segunda dose for atrasada):

Avaliação de medicamentos concomitantes novos ou contínuos, incluindo regime de cART; Avaliação se desenvolveu infecção por COVID-19; Punção venosa de 1 tubo SST, 2 tubos EDTA e 4 ACD (62,5 ml de sangue)

Dia 28 Pós-reforço (V8 ou V9 se a segunda dose for atrasada):

Avaliação de medicamentos concomitantes novos ou contínuos, incluindo regime de cART; Avaliação se desenvolveu infecção por COVID-19; Punção venosa de 1 tubo SST, 2 tubos EDTA e 4 ACD (62,5 ml de sangue)

Semana 24 Pós-primária (V9 ou V10 se a segunda dose for atrasada):

Avaliação de medicamentos concomitantes novos ou contínuos, incluindo regime de cART; Avaliação se desenvolveu infecção por COVID-19; Amostra de saliva; Punção venosa de 1 tubo SST, 2 tubos EDTA e 10 tubos ACD (113,5 ml de sangue)

Semana 48 Pós-primária (V10 ou V11 se a segunda dose for atrasada):

Avaliação de medicamentos concomitantes novos ou contínuos, incluindo regime de cART; Avaliação se desenvolveu infecção por COVID-19; Punção venosa de 1 tubo SST, 2 tubos EDTA e 10 tubos ACD (113,5 ml de sangue)

Se a segunda dose for adiada por mais de 2 semanas, uma visita de estudo adicional será agendada imediatamente (até 3 dias) antes da segunda dose. Esta visita será a visita nº 6, onde um total de 1 tubo SST, 2 EDTA e 10 tubos ACD (113,5ml sangue) serão coletados além da amostra de saliva. Todas as visitas subsequentes serão ajustadas de acordo, de modo que o V6 original se torne V7, V7->V8 e assim por diante, terminando com V10->V11.

Projetos de pesquisa:

A saliva e um subconjunto de amostras de sangue irão para a Universidade de Toronto. As amostras enviadas para a Universidade de Toronto e hospitais afiliados serão processadas centralmente no laboratório Ostrowski no prédio de Ciências Médicas da Universidade de Toronto e armazenadas no laboratório Ostrowski. As amostras para o NIH serão enviadas diretamente da Maple Leaf Medical Clinic para o laboratório Chun no NIH, Bethesda, MD, EUA. Os testes de saliva serão feitos pelo laboratório Gommerman da Universidade de Toronto. Os ensaios sorológicos serão realizados pelo laboratório Gingras do Hospital Mount Sinai, afiliado à Universidade de Toronto. Ensaios de neutralização e respostas imunes de células T ao COVID-19 serão realizados no laboratório Ostrowski. O ensaio IPDA será feito no laboratório Ostrowski em colaboração com Brad Jones (Universidade Cornell). As amostras enviadas ao NIH serão armazenadas no laboratório Chun e o laboratório Chun realizará ensaios de reservatório viral e ensaios de ativação imunológica. O laboratório Moir realizará estudos imunológicos de células B. Todos os laboratórios possuem ampla experiência no gerenciamento de amostras humanas, desde o processamento até o armazenamento. Todas as amostras que saem da Maple Leaf Clinic são desidentificadas.

Os seguintes ensaios serão realizados nos seguintes laboratórios:

Grupo do Dr. Mario Ostrowski:

O laboratório Ostrowski desenvolveu experiência no desenvolvimento de um ensaio interno de microneutralização do vírus SARS-CoV-2 vivo. Além disso, seu laboratório forneceu estudos pré-clínicos sobre o desenvolvimento de uma vacina canadense de mRNA contra a COVID-19 em colaboração com a Providence Therapeutics no Canadá27. O laboratório realiza rotineiramente ensaios de neutralização do SARS-CoV-2 para vários investigadores. O laboratório também caracterizou as respostas imunes das células T na infecção por COVID-19 e usará ensaios ELISPOT de células T para determinar as respostas imunes das células T aos antígenos da vacina28. O laboratório é principalmente um laboratório de HIV e, em colaboração com o Dr. R. Brad Jones da Universidade Cornell, realizará os ensaios de DNA proviral intacto. O laboratório Jones tem vasta experiência na concepção de um ensaio interno cujo protocolo ele compartilhará na Universidade de Toronto, para agilizar a análise de dados. Ambos publicaram este ensaio29. Os seguintes ensaios serão realizados na S0, S24, S48: Título de neutralização para SARS-CoV-2 (ensaio de microneutralização por redução de placa); ELISPOT de células T para SARS-CoV-2 IPDA (ensaio de DNA proviral intacto).

Grupo do Dr. Tae-Wook Chun:

O programa do Dr. Chun concentra-se em 1) delinear o papel dos reservatórios virais na patogênese da doença pelo HIV; 2) examinar os fatores virais e hospedeiros que contribuem para a manutenção dos reservatórios do HIV; e 3) desenvolver estratégias terapêuticas destinadas a alcançar um controlo virológico duradouro em indivíduos infectados na ausência de terapia anti-retroviral. O laboratório do Dr. Chun realizará múltiplos ensaios de reservatórios virais do HIV, extensa fenotipagem imunológica de células T e perfil de biomarcadores solúveis.

Grupo da Dra. Susan Moir:

O foco principal do programa de pesquisa do Dr. Moir é estudar o papel das células B na patogênese da doença pelo HIV, com o objetivo final de preencher lacunas no conhecimento sobre a imunidade humoral contra o vírus. Este conhecimento é fundamental para o desenvolvimento de uma vacina eficaz baseada em anticorpos e para o avanço das intervenções imunoterapêuticas em indivíduos infectados pelo VIH. Moir se concentrará principalmente na fenotipagem longitudinal de células B/plasmablastos e nas respostas específicas de antígeno e na fenotipagem de células B/memória e nas respostas específicas de antígeno.

Grupo da Dra. Jennifer Gommerman:

Gommerman lidera uma equipe da COVID-19 que está investigando as respostas da mucosa salivar ao SARS-CoV-2 e, em particular, a resposta da IgA, que é considerada crucial para proteger contra a infecção e o transporte do vírus. Sua equipe usará amostras de saliva coletadas para testar a resposta de IgA ao SARS-CoV-2 S e RBD. Seu laboratório desenvolveu ensaios sensíveis e específicos internamente para determinar a imunidade da mucosa ao vírus SARS-CoV-230. Não se sabe se as atuais vacinas contra a COVID-19 induzem alguma imunidade ao nível das mucosas. Os seguintes ensaios serão realizados nos S0, 5, 24: IgA salivar para SARS-CoV-2 S, RBD e NP.

Grupo da Dra. Anne-Claude Gingras:

Anne-Claude Gingras é especialista em interação de proteínas e estudos de alto rendimento e seu grupo desenvolveu testes de pico de SARS-CoV-2 e domínio de ligação ao receptor (RBD) e ELISA de proteína de nucleocapsídeo (IgG, IgA, IgM) em uma plataforma robótica que pode ser ampliado para testar milhares de amostras por dia. Ela também desenvolveu um ensaio substituto baseado em ELISA que pode prever a capacidade de neutralização do soro para SARS-CoV-2 e otimizou um ensaio de neutralização de picos baseado em lentivírus30,31. Os seguintes ensaios serão realizados em todos os momentos e triagem: IgG sérico para SARS-CoV-2, nucleocapsídeo e domínio RBD. A presença destes anticorpos no início do estudo indicará SARS-CoV-2 anterior e será um critério de exclusão. As vacinas contra a COVID apenas induzem anticorpos contra a proteína spike do SARS-CoV-2 e os respondedores devem desenvolver anticorpos contra a spike e RBD, mas não contra a nucleocápside. Anticorpos para o nucleocapsídeo indicariam resposta imune à infecção e não à vacina.

Revisão do REB e aprovação - condução do estudo O centro obterá aprovação para o protocolo do estudo e formulário de consentimento antes do início do estudo do Conselho de Ética em Pesquisa da Universidade de Toronto REB. O REB revisará toda a documentação apropriada do estudo para salvaguardar os direitos, a segurança e o bem-estar dos participantes. O estudo será realizado somente após a aprovação ética ter sido obtida. Uma cópia do protocolo (incluindo alterações ao protocolo), todas as versões dos formulários de consentimento informado, outras informações a serem preenchidas pelos participantes, como instrumentos de pesquisa ou questionários, e quaisquer materiais de publicidade/recrutamento propostos devem ser revisados ​​e aprovados pelo REB de cada participante centro antes da implementação do ensaio.