Амплификация гена альфа-топоизомеразы II и сверхэкспрессия белка, предсказывающая эффективность эпирубицина (TOP)

Клиническая оценка topo II a как прогностического маркера. Предварительные результаты клинического исследования свидетельствуют о том, что полная ремиссия после лечения антрациклинами распространенного рака молочной железы наблюдается только в случае амплификации гена topo II a (7 полных ремиссий, все у пациенток с topo II а ген амплифицируется опухолями, полных ремиссий нет у пациентов с нормальным или делетированным topo II а геном).

Кроме того, наша группа проанализировала прогностическую ценность topo II a в популяции больных раком молочной железы с положительными узлами, которых случайным образом лечили либо антрациклинами, либо CMF (бельгийское совместное исследование). В первом исследовании topo II a оценивали с помощью иммуногистохимии, которая позволяет обнаружить экспрессию белка topo II a. Результаты этого исследования показали, что пациенты, получающие наибольшую пользу от антрациклинов, были теми, у которых белок topo II иммуноокрашен более чем в 10% опухолевых клеток. Основные результаты этого исследования следует рассматривать как порождающие гипотезы из-за ограниченного числа обследованных пациентов (около пятидесяти в каждой группе исследования) и потому, что уровни белка topo II a зависят от амплификации генов, а также от скорости пролиферации опухоли. Следовательно, экспрессия белка topo II a не обязательно отражает статус гена topo II a.

Второе исследование, проведенное нашей группой, было основано на той же серии пациентов, что и в первом исследовании, но на этот раз гены HER-2 и topo IIa оценивались с помощью флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), что позволяет выявление генных аберраций. Основные результаты второго исследования вполне согласовывались с доклиническими данными, предполагающими, что только опухоли с амплификацией HER-2/topo II a проявляют большую чувствительность к антрациклинам, в то время как эффективность этих же агентов при амплификации HER-2/topo II a неамплифицированных опухолей сравнима с эффективностью других препаратов или схем, таких как CMF.

Тем не менее, хотя результаты, представленные в этом исследовании, в некоторой степени подтверждают гипотезу о том, что топо II а является маркером, предсказывающим эффективность антрациклинов, нельзя сделать окончательных выводов из-за довольно ограниченного числа обследованных пациентов и ретроспективного характера исследования. анализы.

Настоящий протокол исследования: при поддержке данных «in vitro» и предварительных данных «in vivo», кратко изложенных выше, это исследование предназначено для проспективной проверки значения амплификации гена topo II альфа и гиперэкспрессии белка для прогнозирования эффективности антрациклинов. Насколько нам известно, это единственное проспективное исследование в мире, в котором делается попытка выяснить прогностическую ценность этого интересного биологического маркера. Это исследование может иметь важные практические последствия для ежедневного клинического ведения пациентов с ранним раком молочной железы, поскольку, если исследование подтвердит, что амплификация гена topo II a и/или гиперэкспрессия белка связаны с высокой эффективностью антрациклинов, тогда как topo II представляет собой нормальный/удаленный ген. и низкое содержание белка связаны со скромной эффективностью, будет сделан важный шаг вперед в направлении «приспособления» антрациклина.

Практическим преимуществом этого подхода будет использование антрациклинов в первую очередь у пациентов, которые должны получить наибольшую пользу, тем самым избавляя от долговременной токсичности, связанной с антрациклинами (т. вторичный острый миелоидный лейкоз, сердечная дисфункция и аменорея/бесплодие у женщин фертильного возраста) тем пациентам, у которых не ожидается значительного повышения противоопухолевой активности.

Для достижения этой амбициозной цели пациенты с ранним раком молочной железы с опухолями размером не менее 2 см (определяемые с помощью УЗИ молочной железы) будут оцениваться на экспрессию гена и белка topo II a. Для этой цели перед лечением будет проведена биопсия (tru-cut), а ген topo II a будет оценен на фиксированных образцах с помощью FISH. Использование тройного зонда позволит одновременно оценить статус гена HER-2. Белок Topo II a будет оцениваться с помощью иммуногистохимии (IHC). После этого все пациенты, независимо от статуса гена и белка topo II a, будут получать монотерапию эпирубицином. хирургия рака молочной железы, в основном из-за отрицательности рецептора эстрогена (ER). Следовательно, у этой группы пациентов не будет избыточного лечения антрациклинами. Патологический полный ответ (pCR) на эпирубицин будет коррелировать с статусом гена topo IIa и белка. В исследовании есть две биологические гипотезы: одна для подгруппы пациентов с ER-отрицательными/HER-2-амплифицированными опухолями, другая для подгруппы пациентов с ER-отрицательными/HER-2-неамплифицированными опухолями.

1. 1-я гипотеза: пациенты с ER-отрицательными/амплифицированными опухолями HER-2: в этой подгруппе пациентов ген topo II a будет амплифицироваться примерно в 40% случаев. Мы предполагаем, что в амплифицированных опухолях topo II a будет наблюдаться трехкратное увеличение скорости pCR, в отличие от скорости pCR в опухолях с topo II a нормальным или делетированным геном.
2. Вторая гипотеза: пациенты с ER-отрицательными/неамплифицированными опухолями HER-2: в этой подгруппе пациентов почти не будет обнаружено аберраций гена topo II a на основании предыдущих данных, обсуждавшихся выше. Однако недавние данные, представленные C. Sotiriou et al. с использованием микрочипов кДНК, позволяют предположить, что в этой подгруппе ER-отрицательных HER-2-отрицательных опухолей, также определяемой как базальноподобная подгруппа, можно выделить две отдельные подгруппы (т.е. базальноподобные 1 и 2). В то время как базальноподобные опухоли 1 демонстрируют высокую скорость пролиферации и высокие уровни topo II a РНК, базальноподобные опухоли 2 имеют умеренно-низкую скорость пролиферации и нормальные уровни topo II a РНК. Мы предполагаем, что сверхэкспрессия РНК topo II a в базальноподобных 1 опухолях не связана с амплификации гена topo II a, поскольку в этой подгруппе опухолей не сообщается о сопутствующей амплификации гена HER-2. Вторая гипотеза исследования состоит в том, что в ER-негативных/неамплифицированных опухолях HER-2 со сверхэкспрессией белка topo II будет наблюдаться 2,5-кратное увеличение скорости pCR, в отличие от скорости pCR в опухолях с низким содержанием белка topo II a.

Образец опухоли, взятый во время биопсии перед лечением, будет заморожен и использован для выполнения микрочипов на основе олигонуклеотидов (Affymetrix). Этот метод позволяет оценить тысячи генов и в конечном итоге дает нам генетический профиль опухоли. Гомогенные генетические профили (генетические кластеры), которые могут быть идентифицированы, будут коррелировать с эффективностью монотерапии эпирубицином. Эта корреляция позволит нам обратиться к вторичной конечной точке этого исследования, которая заключается в идентификации других генов или, в конечном итоге, генетического профиля, играющего роль в определении чувствительности к антрациклинам. Среди генов, которые могут влиять на чувствительность к антрациклинам, р-53, по-видимому, заслуживает особого внимания. Действительно, данные «in vitro» предполагают, что, по крайней мере, некоторые опухоли с мутацией р-53 плохо чувствительны к антрациклинам, в первую очередь потому, что антрациклин-индуцированный апоптоз предотвращается. Интересно, что опухоли с мутацией p-53 часто обнаруживают амплификацию гена HER-2 и, следовательно, амплификацию гена topo II a (23). Соответственно, мутации р-53 могут препятствовать ответу на антрациклины даже в опухолях, несущих амплификацию гена topo II а. Эта гипотеза также будет изучена в настоящем исследовании, поскольку мутации p-53 будут оцениваться с помощью секвенирования ДНК, а эффективность эпирубицина в амплифицированных и неамплифицированных опухолях topo II a будет коррелировать со статусом p-53.

Кроме того, пациентам с воспалительным раком молочной железы будет назначено интенсивное введение эпирубицина (100 мг/м2/2 недели). Мы сохраняем тот же препарат, что и при раннем раке молочной железы, но используем несколько более агрессивный режим с более высокой плотностью доз. Показана целесообразность введения эпирубицина в дозе 100 мг/м2 каждые две недели с поддержкой фактора роста гранулоцитов в неоадъювантной, метастатической и адъювантной терапии с приемлемой токсичностью. Этот неоадъювантный режим эпирубицина может быть дополнен адъювантной химиотерапией, такой как схемы на основе таксанов, поскольку было предложено, чтобы последовательный подход (антрациклины и таксаны) превосходил схему антрациклинов при LABC.