Amplificazione del gene alfa della topoisomerasi II e sovraespressione proteica per prevedere l'efficacia dell'epirubicina (TOP)

Valutazione clinica di topo II a come marcatore predittivo: i risultati preliminari di uno studio clinico suggeriscono che la remissione completa dopo il trattamento con antracicline per carcinoma mammario avanzato si osserva solo in caso di amplificazione genica di topo II a (7 remissioni complete, tutte in pazienti con topo II a II a tumori con amplificazione del gene, nessuna remissione completa nei pazienti con topo II a normale o deleto).

Inoltre, il nostro gruppo ha analizzato il valore predittivo della topo II a in una popolazione di pazienti con carcinoma mammario linfonodale positivo trattate in modo casuale con antracicline o con CMF (Belgian cooperative trial). In un primo studio, il topo II a è stato valutato mediante immunoistochimica, che consente di rilevare l'espressione della proteina topo II a. I risultati di questo studio hanno suggerito che i pazienti che hanno tratto il massimo beneficio dalle antracicline erano quelli in cui la proteina topo II a è immunocolorata in più del 10% delle cellule tumorali. I risultati principali di questo studio dovrebbero essere visti come generatori di ipotesi a causa del numero limitato di pazienti valutati (circa cinquanta in ciascun braccio di studio) e perché i livelli di proteina topo II a dipendono dall'amplificazione genica e dal tasso di proliferazione tumorale. Pertanto, l'espressione della proteina topo II non riflette necessariamente lo stato del gene topo II.

Il secondo studio condotto dal nostro gruppo era basato sulla stessa serie di pazienti valutate nel primo studio, ma, questa volta, entrambi i geni HER-2 e topo II a sono stati valutati mediante ibridazione in situ fluorescente (FISH), che consente la rilevamento di aberrazioni geniche. I risultati principali del secondo studio erano abbastanza coerenti con i dati preclinici che suggeriscono che solo i tumori HER-2 amplificato/topo II a amplificato mostrano una grande sensibilità alle antracicline mentre l'efficacia di questi stessi agenti nei tumori HER-2 amplificato/topo II a tumori non amplificati è paragonabile all'efficacia di altri farmaci o regimi come il CMF.

Tuttavia, sebbene i risultati riportati in questo studio forniscano un ulteriore supporto all'ipotesi del topo II a come marcatore predittivo dell'efficacia delle antracicline, non è possibile trarre conclusioni definitive a causa del numero piuttosto limitato di pazienti valutati e della natura retrospettiva della le analisi.

Il presente protocollo di studio: Supportato da dati "in-vitro" e preliminari "in-vivo", brevemente riassunti sopra, questo studio è progettato per testare in modo prospettico il valore dell'amplificazione del gene topo II alfa e della sovraespressione proteica nel predire l'efficacia delle antracicline. A nostra conoscenza, questo è l'unico studio prospettico al mondo che sta tentando di chiarire in modo prospettico il valore predittivo di questo interessante marcatore biologico. Questo studio potrebbe avere importanti implicazioni pratiche nella gestione clinica quotidiana delle pazienti con carcinoma mammario in fase iniziale perché, se lo studio conferma che topo II un'amplificazione genica e/o una sovraespressione proteica sono associate a un'elevata efficacia delle antracicline, mentre topo II un gene normale/cancellato e basso contenuto proteico sono associati a modesta efficacia, si compirebbe un importante passo avanti nella direzione della "sartoria" delle antracicline.

Il vantaggio pratico di questo approccio sarebbe quello di utilizzare le antracicline principalmente nei pazienti che dovrebbero trarne il massimo beneficio, risparmiando così la tossicità a lungo termine correlata alle antracicline (ad es. leucemia mieloide acuta secondaria, disfunzione cardiaca e amenorrea/sterilità in caso di donne fertili) a quelle pazienti per le quali non si prevede un aumento significativo dell'attività antitumorale.

Per raggiungere questo ambizioso obiettivo, i pazienti con carcinoma mammario in fase iniziale con tumori di almeno 2 cm (definiti dall'ecografia mammaria) saranno valutati per topo II a espressione genica e proteica. A tale scopo, verrà eseguita una biopsia pre-trattamento (tru-cut) e il gene topo II a sarà valutato su campioni fissati mediante FISH. L'uso di una tripla sonda consentirà la valutazione concomitante dello stato del gene HER-2. La proteina Topo II a sarà valutata mediante immunoistochimica (IHC). Successivamente, tutti i pazienti, indipendentemente dallo stato genico e proteico del topo II a, saranno trattati con epirubicina in monoterapia I criteri di eleggibilità consentiranno la partecipazione di pazienti per i quali l'uso di una terapia adiuvante a base di antracicline sarebbe stato molto probabilmente proposto dopo chirurgia del cancro al seno, principalmente a causa della negatività del recettore degli estrogeni (ER). Pertanto, in questo gruppo di pazienti non si verificherà alcun trattamento eccessivo con antracicline. La risposta patologica completa (pCR) all'epirubicina sarà correlata con lo stato del gene topo II a e della proteina. Lo studio ha due ipotesi biologiche, una per il sottogruppo di pazienti con tumori ER negativi/HER-2 amplificati, l'altra per il sottogruppo di pazienti con tumori ER negativi/HER-2 non amplificati.

1. Ipotesi: Pazienti con tumori ER negativi/HER-2 amplificati: In questo sottogruppo di pazienti, il gene topo II sarà amplificato in circa il 40% dei casi. Ipotizziamo che nei tumori topo II amplificati si osserverà un aumento di tre volte del tasso di pCR, rispetto al tasso di pCR nei tumori con topo II un gene normale o deleto.
2. 2a ipotesi: Pazienti con tumori ER negativi/HER-2 non amplificati: in questo sottogruppo di pazienti, quasi nessuna aberrazione del gene topo II sarà trovata sulla base dei dati precedenti discussi sopra. Tuttavia, dati recenti riportati da C. Sotiriou et al utilizzando microarray di cDNA, suggeriscono che in questo sottoinsieme di tumori ER-negativi HER-2 negativi, definito anche come sottoinsieme basale, possono essere identificati due sottogruppi distinti (es. di tipo basale 1 e 2). Mentre i tumori di tipo basale 1 mostrano un alto tasso di proliferazione e alti livelli di topo II a RNA, i tumori di tipo basale 2 hanno un tasso di proliferazione moderato-basso e livelli normali di topo II a RNA. Ipotizziamo che la topo II a sovraespressione di RNA nei tumori di tipo basale 1 non sia correlata all'amplificazione del gene topo II a perché in questo sottogruppo di tumori non è riportata alcuna concomitante amplificazione del gene HER-2. La seconda ipotesi di studio è che nei tumori ER negativi/HER-2 non amplificati con sovraespressione proteica topo II a, si osserverà un aumento di 2,5 volte del tasso di pCR, rispetto al tasso di pCR nei tumori con basso contenuto proteico di topo II a.

Un campione di tumore prelevato al momento della biopsia pre-trattamento sarà congelato e utilizzato per eseguire microarrays a base di oligonucleotidi (Affymetrix). Questa tecnica consente la valutazione di migliaia di geni e alla fine ci fornisce il profilo genetico del tumore. I profili genetici omogenei (cluster genetici) che potrebbero essere identificati, saranno correlati con l'efficacia dell'epirubicina come singolo agente. Questa correlazione ci permetterà di affrontare l'end-point secondario di questo studio, che è l'identificazione di altri geni o eventualmente di un profilo genetico che gioca un ruolo nella determinazione della sensibilità alle antracicline. Tra i geni che potrebbero interferire con la sensibilità alle antracicline, il p-53 sembra meritare particolare attenzione. In effetti, i dati "in vitro" suggeriscono che almeno alcuni tumori mutati di p-53 sono scarsamente sensibili alle antracicline, principalmente perché l'apoptosi indotta da antracicline è prevenuta. È interessante notare che i tumori con mutazione di p-53 mostrano frequentemente l'amplificazione del gene HER-2 e quindi l'amplificazione del gene topo II a (23). Di conseguenza, le mutazioni di p-53 potrebbero ostacolare la risposta alle antracicline anche nei tumori portatori di amplificazione del gene topo II. Questa ipotesi sarà anche esplorata nel presente studio, poiché le mutazioni di p-53 saranno valutate mediante sequenziamento del DNA e l'efficacia dell'epirubicina nei tumori topo II a amplificati e non amplificati sarà correlata con lo stato di p-53.

Inoltre, i pazienti con carcinoma mammario infiammatorio saranno trattati con una somministrazione densa di epirubicina (100 mg/m2/2 settimane). Manteniamo lo stesso farmaco del carcinoma mammario in fase iniziale, ma usiamo un regime leggermente più aggressivo con una densità di dose più elevata. La fattibilità della somministrazione di epirubicina 100 mg/m2 ogni due settimane con il supporto del fattore di crescita dei granulociti è stata dimostrata in contesti neoadiuvanti, metastatici e adiuvanti con tossicità accettabile. Questo regime di epirubicina neoadiuvante può essere completato dalla chemioterapia adiuvante, come i regimi a base di taxani, poiché l'approccio sequenziale (antracicline e taxani) è stato suggerito superiore al regime di antracicline nei LABC.