Topoisomeraasi II alfageenin monistuminen ja proteiinien yliekspressio ennustavat epirubisiinin tehoa (TOP)

Topo II a:n kliininen arviointi ennustavana markkerina: Kliinisen tutkimuksen alustavat tulokset viittaavat siihen, että pitkälle edenneen rintasyövän antrasykliinihoidon jälkeen täydellinen remissio havaitaan vain topo II a:n geenin monistumisen tapauksessa (7 täydellistä remissiota, kaikki topopotilailla IIa-geenin monistetut kasvaimet, ei täydellisiä remissioita potilailla, joilla on normaali tai deletoitu topo IIa -geeni).

Lisäksi ryhmämme on analysoinut topo II a:n ennustavaa arvoa solmukohtapositiivisten rintasyöpäpotilaiden populaatiossa, joita on hoidettu satunnaisesti joko antrasykliineillä tai CMF:llä (Belgian yhteistyötutkimus). Ensimmäisessä tutkimuksessa topo II a arvioitiin immunohistokemialla, mikä mahdollistaa topo II a -proteiinin ilmentymisen havaitsemisen. Tämän tutkimuksen tulokset viittaavat siihen, että potilaat, jotka saivat eniten hyötyä antrasykliineistä, olivat ne, joiden topo II a -proteiini immunovärjäytyy yli 10 %:ssa kasvainsoluista. Tämän tutkimuksen tärkeimmät havainnot tulisi nähdä hypoteeseja luovina, koska arvioituja potilaita on rajoitettu määrä (noin viisikymmentä kussakin tutkimushaarassa) ja koska topo II a -proteiinitasot riippuvat geenin monistumisesta sekä kasvaimen lisääntymisnopeudesta. Siksi topo II a -proteiinin ilmentyminen ei välttämättä heijasta topo II a -geenin tilaa.

Toinen ryhmämme suorittama tutkimus perustui samaan potilassarjaan, joka arvioitiin ensimmäisessä tutkimuksessa, mutta tällä kertaa sekä HER-2- että topo II a -geenit arvioitiin fluoresenssi in situ -hybridisaatiolla (FISH), joka mahdollistaa geenipoikkeamien havaitseminen. Toisen tutkimuksen tärkeimmät havainnot olivat melko yhdenmukaisia ​​prekliinisten tietojen kanssa, jotka viittaavat siihen, että vain HER-2:lla monistetut/topo IIa:lla monistetut kasvaimet osoittavat suurta herkkyyttä antrasykliineille, kun taas näiden samojen aineiden tehokkuus HER-2:ssa amplifioitunut/topo IIa. ei-amplifioituneiden kasvainten tehokkuus on verrattavissa muiden lääkkeiden tai hoito-ohjelmien, kuten CMF:n, tehoon.

Vaikka tässä tutkimuksessa raportoidut tulokset antavat lisätukea hypoteesille topo II a:sta antrasykliinien tehokkuutta ennustavana markkerina, lopullisia johtopäätöksiä ei voida tehdä, koska arvioituja potilaita on melko vähän ja koska lääke on retrospektiivinen. analyysit.

Tämä tutkimusprotokolla: "in vitro"- ja alustavien "in-vivo"-tietojen tukemana, lyhyesti tiivistettynä yllä, tämä tutkimus on suunniteltu testaamaan topo II alfageenin monistumisen ja proteiinin yli-ilmentymisen arvoa antrasykliinien tehokkuuden ennustamisessa. Tietojemme mukaan tämä on ainoa mahdollinen tutkimus maailmanlaajuisesti, joka yrittää selventää tämän mielenkiintoisen biologisen markkerin ennustusarvoa. Tällä tutkimuksella voi olla tärkeitä käytännön vaikutuksia varhaisten rintasyöpäpotilaiden päivittäiseen kliiniseen hoitoon, koska jos tutkimus vahvistaa, että topo II:n geenin monistuminen ja/tai proteiinin yli-ilmentyminen liittyvät antrasykliinien korkeaan tehokkuuteen, kun taas topo II on normaali/deletoitu geeni. ja alhainen proteiinipitoisuus liittyy vaatimattomaan tehoon, tärkeä askel eteenpäin antrasykliinin "räätälöinnin" suuntaan saavutettaisiin.

Tämän lähestymistavan käytännön etu olisi käyttää antrasykliinejä ensisijaisesti potilailla, joiden oletetaan saavan suurimman hyödyn, mikä säästää pitkäaikaista antrasykliiniin liittyvää toksisuutta (ts. sekundaarinen akuutti myelooinen leukemia, sydämen toimintahäiriö ja amenorrea/steriiliys hedelmällisillä naisilla) potilaille, joiden kasvainten vastaisen aktiivisuuden ei odoteta lisääntyvän merkittävästi.

Tämän kunnianhimoisen tavoitteen saavuttamiseksi varhaisvaiheessa olevilta rintasyöpäpotilailta, joilla on vähintään 2 cm kasvaimet (määritetty rintojen ultraäänellä), arvioidaan topo II a -geenin ja proteiinin ilmentyminen. Tätä tarkoitusta varten suoritetaan esikäsittelybiopsia (tru-cut) ja FISH arvioi topo II a -geenin kiinteistä näytteistä. Kolmoiskoettimen käyttö mahdollistaa HER-2-geenin tilan samanaikaisen arvioinnin. Topo II a -proteiini arvioidaan immunohistokemialla (IHC). Jälkeenpäin kaikkia potilaita hoidetaan topo II a -geenistä ja proteiinista riippumatta yksittäisellä epirubisiinilla. Kelpoisuuskriteerit mahdollistavat sellaisten potilaiden osallistumisen, joille antrasykliinipohjaisen adjuvanttihoidon käyttöä olisi todennäköisimmin ehdotettu rintasyövän leikkaus, pääasiassa estrogeenireseptorin (ER) negatiivisuuden vuoksi. Siksi tässä potilasryhmässä ei tapahdu ylihoitoa antrasykliineillä. Patologinen täydellinen vaste (pCR) epirubisiinille korreloi topo II a -geenin ja proteiinin tilan kanssa. Tutkimuksessa on kaksi biologista hypoteesia, yksi potilaiden alaryhmälle, joilla on ER-negatiivisia/HER-2-amplifioituja kasvaimia, ja toinen potilaiden alaryhmälle, joilla on ER-negatiivisia/HER-2-vahvistumattomia kasvaimia.

1. st hypoteesi: Potilaat, joilla on ER-negatiivisia/HER-2-amplifioituja kasvaimia: Tässä potilaiden alaryhmässä topo II a -geeni monistuu noin 40 %:ssa tapauksista. Oletamme, että topo II a monistuneissa kasvaimissa havaitaan kolminkertainen pCR-nopeuden nousu, toisin kuin pCR-nopeudessa kasvaimissa, joissa topo II on normaali tai deletoitu geeni.
2. nd hypoteesi: Potilaat, joilla on ER-negatiivisia/HER-2-vahvistumattomia kasvaimia: Tässä potilaiden alaryhmässä topo II a -geenipoikkeavuuksia ei havaita lähes lainkaan edellä käsiteltyjen tietojen perusteella. Viimeaikaiset tiedot, jotka C. Sotiriou et al ovat raportoineet käyttämällä cDNA-mikrosiruja, viittaavat kuitenkin siihen, että tässä ER-negatiivisten HER-2-negatiivisten kasvainten alajoukossa, joka määritellään myös peruskaltaiseksi alajoukoksi, voidaan tunnistaa kaksi erillistä alaryhmää (ts. basaalin kaltaiset 1 ja 2). Vaikka basaalimaisilla 1-kasvaimilla on korkea proliferaationopeus ja korkea topo II a RNA:n taso, basaalimaisilla 2-kasvaimilla on kohtalainen tai alhainen lisääntymisnopeus ja normaalit tasot topo II a RNA:ta. Oletamme, että topo II a RNA:n yli-ilmentyminen basaalimaisissa 1-kasvaimissa ei liity topo II a -geenin monistumiseen, koska samanaikaista HER-2-geenin monistumista ei raportoida tässä kasvainten alajoukossa. Toinen tutkimushypoteesi on, että ER-negatiivisissa/HER-2-amplifioimattomissa kasvaimissa, joissa on topo II:n proteiinin yli-ilmentymistä, havaitaan 2,5-kertainen pCR-nopeuden nousu, toisin kuin pCR-nopeus kasvaimissa, joissa on alhainen topo II a -proteiinipitoisuus.

Esikäsittelybiopsian yhteydessä otettu kasvainnäyte jäädytetään ja sitä käytetään oligonukleotidipohjaisten mikrosirujen (Affymetrix) suorittamiseen. Tämä tekniikka mahdollistaa tuhansien geenien arvioinnin ja lopulta antaa meille kasvaimen geneettisen profiilin. Homogeeniset geneettiset profiilit (geneettiset klusterit), jotka voidaan tunnistaa, korreloidaan yhden aineen epirubisiinin tehon kanssa. Tämä korrelaatio antaa meille mahdollisuuden käsitellä tämän tutkimuksen toissijaista päätepistettä, joka on muiden geenien tunnistaminen tai mahdollisesti geneettinen profiili, jolla on rooli antrasykliinien herkkyyden määrittämisessä. Geeneistä, jotka voivat häiritä herkkyyttä antrasykliineille, p-53 näyttää ansaitsevan erityistä huomiota. Itse asiassa "in vitro" -tiedot viittaavat siihen, että ainakin jotkut p-53-mutatoidut kasvaimet ovat huonosti herkkiä antrasykliineille, pääasiassa siksi, että antrasykliinin aiheuttama apoptoosi estetään. Mielenkiintoista on, että p-53-mutatoidut tuumorit osoittavat usein HER-2-geenin monistumista ja siksi topo II:n geenin monistumista (23). Vastaavasti p-53-mutaatiot voisivat haitata vastetta antrasykliineille jopa kasvaimissa, jotka kantavat topo II:n geenin monistumista. Tätä hypoteesia tutkitaan myös tässä tutkimuksessa, koska p-53-mutaatiot arvioidaan DNA-sekvensoinnilla ja epirubisiinin tehokkuus topo II a monistuneissa ja monistumattomissa kasvaimissa korreloi p-53-statuksen kanssa.

Lisäksi potilaita, joilla on tulehduksellinen rintasyöpä, hoidetaan tiheällä epirubisiinin annolla (100 mg/m2/2 viikkoa). Säilytämme saman lääkkeen kuin varhaisen rintasyövän hoidossa, mutta käytämme hieman aggressiivisempaa hoitoa korkeammalla annostiheydellä. Epirubisiinin 100 mg/m2 antamisen kahden viikon välein granulosyyttien kasvutekijätuen kanssa on osoitettu neoadjuvantti-, metastaatti- ja adjuvanttiasetuksissa, joiden toksisuus on hyväksyttävää. Tämä neoadjuvantti epirubisiinihoito voidaan täydentää adjuvanttikemoterapialla, kuten taksaanipohjaisilla hoito-ohjelmilla, koska peräkkäisen lähestymistavan (antrasykliinit ja taksaanit) on ehdotettu olevan parempi kuin antrasykliinit LABC:ssä.