Проспективное исследование лекарственно-устойчивых патогенов среди реципиентов печени, кишечника и мультивисцеральных трансплантатов

Методы:

День 1 — это когда пациенты госпитализируются в отделение интенсивной терапии трансплантатов (ОИТ) после трансплантации печени, кишечника или мультивисцеральной трансплантации. Образцы кала (в случае пациентов с ректальными мешками и/или диареей) на наличие устойчивых к цефотаксиму грамотрицательных палочек следует получать в течение 24 часов после поступления в отделение интенсивной терапии, а затем еженедельно до выписки из больницы или выделения МЛУ P. aeruginosa и БЛРС-K. pneumoniae, в зависимости от того, что произойдет раньше. В то время как пациенты интубированы, эндотрахеальные аспираты также будут получать еженедельно. Мазки из носа на MRSA будут взяты в течение 24 часов после поступления в отделение интенсивной терапии, а затем еженедельно до выписки из больницы или выделения MRSA, в зависимости от того, что наступит раньше.

Если в дни, когда должен быть собран стул, стула не будет, будет взят ректальный мазок. Кроме того, если эндотрахеальную трубку вытянуть, дальнейшие эндотрахеальные аспираты не будут получены. Образцы будут получены только в том случае, если они доступны. Если мазок, полученный в первый день, положителен на изучаемые микроорганизмы, дальнейшие образцы не берутся.

Тестирование на беременность не проводится, поскольку все потенциальные пациенты, перенесшие трансплантацию, не должны быть беременны. Беременные женщины или женщины, которые в настоящее время кормят ребенка грудью, не будут допущены к участию в этом исследовании.

После выделения лекарственно-устойчивого микроорганизма (MDR P. aeruginosa, ESBL K. pneumoniae и/или MRSA) однократно берут мазки кожи из паховой и подключичной областей. У пациента больше не будут брать мазки, но он/она будет находиться под клиническим наблюдением, чтобы определить влияние микроорганизма на клинический исход пациента.

Культуры, полученные по усмотрению лечащего врача, будут рассмотрены, и если P. aeruginosa, ESBL-K. pneumoniae или MRSA будут выделены из лаборатории диагностической микробиологии и сохранены в лаборатории доктора Патерсона для дальнейшего анализа молекулярных механизмов резистентности. Эти образцы будут выброшены после того, как диагностическая лаборатория завершит идентификацию и тестирование чувствительности.

Также будет собираться следующая информация: демографические данные (адрес, дата рождения и т. д.), которые включают возраст, пол, рост, вес и состояние при рождении, предыдущие отчеты, связанные с состоянием участника, результаты лабораторных исследований, текущий прием лекарств, и любые другие предшествующие медицинские проблемы/анамнез, история предшествующей госпитализации, причина трансплантации, история предшествующей трансплантации, использованная иммуносупрессия, полученные противомикробные препараты, другие выполненные операции, продолжительность искусственной вентиляции легких, потребность в диализе, доступные микробиологические исследования, упрощенная острая физиологическая оценка (SAPS) при поступлении, продолжительность пребывания в отделении интенсивной терапии. Эта информация будет получена из медицинских записей и/или субъекта и станет частью протокола исследования.

Пациент будет находиться на стационарном лечении в Медицинском центре Университета Питтсбурга, и каждое посещение будет занимать около 30 минут. Пациента осмотрит член исследовательской группы.

Хранение образцов организма

Биологические образцы будут находиться под контролем главного исследователя этого исследовательского проекта. В целях защиты конфиденциальности все личные идентификаторы (например, имя, номер социального страхования и дата рождения) будут удалены (обезличены) и заменены определенным кодовым номером. Информация, связывающая эти кодовые номера с личностью соответствующих субъектов, будет храниться в отдельном безопасном месте. Исследователи этого исследования будут хранить образцы неопределенно долго. Все образцы будут предоставлены обезличенными. Если субъект отказывается от участия и предоставляет письменный запрос, собранные и еще не обработанные образцы будут уничтожены. Все образцы будут храниться в лаборатории доктора Патерсона в Scaife Hall, Room 812, 3550 Terrace Street, Pittsburgh, PA.

Пациент завершает исследование после выписки пациента из больницы.

Лабораторные методы:

Мазки на P. aeruginosa и ESBL-K. pneumoniae будут высевать на агар с цетримидом и питательный агар с добавлением цефотаксима, ванкомицина и амфотерицина В. Тестирование чувствительности к противомикробным препаратам будет проводиться с использованием дисково-диффузионного теста и Е-теста. Скрининг БЛРС будет проводиться с использованием двухдискового диффузионного теста и Е-теста с цефотаксимом-цефотаксимом/клавулановой кислотой и цефтазидимом-цефтазидимом/клавулановой кислотой.

Мазки на MRSA будут засеяны в хромогенную среду, селективную в отношении MRSA.

С целью изучения молекулярных механизмов, ответственных за развитие устойчивости к противомикробным препаратам среди изолятов P. aeruginosa, была проведена количественная ПЦР в реальном времени на генах, кодирующих общие насосы оттока, ПЦР на мутации в генах gyrA, gyrB и parC, определяющих устойчивость к хинолонам, и ПЦР на будут проводиться бета-лактамазы.

Гель-электрофорез в импульсном поле (PFGE) будет проводиться на изолятах каждого отдельного пациента, чтобы определить, являются ли изоляты генотипически сходными. PFGE также будет проводиться для всех изолятов MDR P. aeruginosa, чтобы определить, принадлежат ли они к одному или нескольким клонам в отделении интенсивной терапии.