Prospectieve studie van geneesmiddelresistente pathogenen bij ontvangers van lever-, darm- en multiviscerale transplantaties

methoden:

Dag 1 is wanneer patiënten worden opgenomen op de Transplant Intensive Care (ICU) na een lever-, darm- of multiviscerale transplantatie. Ontlastingsmonsters (in het geval van patiënten met rectumzakken en/of diarree) voor cefotaxim-resistente gramnegatieve staven zouden binnen 24 uur na opname op de IC worden afgenomen en daarna wekelijks tot ontslag uit het ziekenhuis of isolatie van MDR P. aeruginosa en ESBL- K. pneumoniae, wat het eerst voorkomt. Terwijl patiënten worden geïntubeerd, zouden ook wekelijkse endotracheale aspiraten worden verkregen. Neusuitstrijkjes voor MRSA zouden binnen 24 uur na opname op de IC worden verkregen en daarna wekelijks tot ontslag uit het ziekenhuis of isolatie van MRSA, afhankelijk van wat zich het eerst voordoet.

Als er geen stoelgang is op de dagen dat ontlasting moet worden verzameld, wordt een rectaal uitstrijkje verkregen. Bovendien, als de endotracheale tube wordt getrokken, zullen er geen verdere endotracheale aspiraten worden verkregen. Monsters worden alleen verkregen indien beschikbaar. Als het op dag 1 verkregen uitstrijkje positief is voor de onderzochte organismen, worden er geen monsters meer genomen.

Er zullen geen zwangerschapstesten plaatsvinden, aangezien niet alle potentiële patiënten die een transplantatie ondergaan, zwanger mogen zijn. Zwangere vrouwen, of vrouwen die momenteel borstvoeding geven, mogen niet deelnemen aan dit onderzoek.

Zodra een geneesmiddelresistent organisme (MDR P. aeruginosa, ESBL K. pneumoniae en/of MRSA) is geïsoleerd, zullen eenmalig huiduitstrijkjes van de lies en subclavia worden afgenomen. Er worden geen uitstrijkjes meer afgenomen van de patiënt, maar hij/zij zal klinisch worden gevolgd om de impact van het organisme op het klinische resultaat van de patiënt te bepalen.

Kweken verkregen naar goeddunken van de behandelend arts zullen worden beoordeeld en als P. aeruginosa, ESBL-K. pneumoniae of MRSA worden geïsoleerd, worden ze verzameld in het diagnostisch microbiologisch laboratorium en opgeslagen in het laboratorium van Dr. Paterson voor verdere analyse van moleculaire mechanismen van resistentie. Deze monsters zouden zijn weggegooid zodra de identificatie- en gevoeligheidstests zijn voltooid door het diagnostisch laboratorium.

De volgende informatie wordt ook verzameld: demografische gegevens (adres, geboortedatum, etc.) waaronder leeftijd, geslacht, lengte, gewicht en geboortestaat, eerdere rapporten in verband met de toestand van de deelnemer, laboratoriumresultaten, huidig ​​medicatiegebruik, en eventuele andere eerdere medische problemen/voorgeschiedenis, voorgeschiedenis van eerdere opname, reden voor transplantatie, voorgeschiedenis van eerdere transplantatie, gebruikte immunosuppressie, ontvangen antimicrobiële middelen, andere uitgevoerde operaties, duur van mechanische beademing, vereiste voor dialyse, beschikbare microbiologische onderzoeken, vereenvoudigde acute fysiologische score (SAPS) bij opname, duur IC-verblijf. Deze informatie wordt verkregen uit het medisch dossier en/of de proefpersoon en wordt onderdeel van het onderzoeksdossier.

De patiënt wordt opgenomen in het University of Pittsburgh Medical Center en elk bezoek duurt ongeveer 30 minuten. De patiënt wordt gezien door een lid van het onderzoeksteam.

Monsteropslag van het organisme

De biologische monsters zullen onder controle staan ​​van de hoofdonderzoeker van dit onderzoeksproject. Om de vertrouwelijkheid te beschermen, worden alle persoonlijke identificatiegegevens (d.w.z. naam, burgerservicenummer en geboortedatum) verwijderd (geanonimiseerd) en vervangen door een specifiek codenummer. De informatie die deze codenummers koppelt aan de identiteit van de overeenkomstige proefpersonen, wordt op een aparte, veilige locatie bewaard. De onderzoekers van dit onderzoek zullen de monsters voor onbepaalde tijd bewaren. Alle monsters worden geanonimiseerd verstrekt. Als een proefpersoon zich terugtrekt en het verzoek schriftelijk indient, worden verzamelde en nog niet verwerkte monsters vernietigd. Alle monsters worden bewaard in het laboratorium van Dr. Paterson in Scaife Hall, Room 812, 3550 Terrace Street, Pittsburgh, PA.

De patiënt heeft het onderzoek voltooid zodra de patiënt uit het ziekenhuis wordt ontslagen.

Laboratoriummethoden:

Wattenstaafjes voor P. aeruginosa en ESBL-K. pneumoniae zal worden geplant op cetrimide-agar en voedingsagar aangevuld met cefotaxim, vancomycine en amfotericine B. Antimicrobiële gevoeligheidstests zullen worden uitgevoerd met behulp van schijfdiffusietest en E-test. ESBL-screening wordt uitgevoerd met behulp van een dubbele schijfdiffusietest en een E-test met cefotaxim-cefotaxim/clavulaanzuur en ceftazidim-ceftazidim/clavulaanzuur.

Swabs voor MRSA zullen worden geplant in een chromogene media die selectief zijn voor MRSA.

Om de moleculaire mechanismen te bestuderen die verantwoordelijk zijn voor de ontwikkeling van antimicrobiële resistentie onder de P. aeruginosa-isolaten, kwantitatieve real-time PCR op genen die coderen voor gemeenschappelijke effluxpompen, PCR voor mutaties in chinolonresistentie bepalende regio's gyrA, gyrB en parC genen en PCR voor beta-lactamases zullen worden uitgevoerd.

Pulsed-field gelelektroforese (PFGE) zal worden uitgevoerd op de isolaten van elke afzonderlijke patiënt, om te bepalen of de isolaten genotypisch vergelijkbaar zijn. PFGE zal ook worden gedaan in alle MDR P. aeruginosa-isolaten om te bepalen of ze behoren tot een enkele of meerdere klonen binnen de ICU.