Мочевой NGF как биомаркер острого бактериального цистита

Рецидивирующая ИМП – очень неприятная и популярная проблема в клинической урогинекологической практике. Согласно совместному отчету Международной урогинекологической ассоциации (IUGA)/Международного общества воздержания (ICS) о терминологии дисфункции женского тазового дна, рецидивирующая ИМП определяется как минимум три симптоматических и диагностированных с медицинской точки зрения ИМП в течение предшествующих 12 месяцев. Предыдущие ИМП должны были разрешиться до того, как будет диагностирована следующая ИМП. Рецидивирующая ИМП является одним из наиболее частых диагнозов дисфункции тазового дна у женщин.

Пациенты с рецидивирующей ИМП также могут иметь симптомы раздражения мочевого пузыря. Предыдущие исследования показали, что пациенты с рецидивирующей ИМП имеют повышенный уровень NGF в моче, что свидетельствует о наличии хронического воспаления в мочевом пузыре этих пациентов после разрешения ИМП. Предварительные результаты исследователей показали, что хроническое воспаление, апоптоз уротелиальных клеток и нарушение барьерной функции уротелиальных клеток могут быть основной патофизиологией рецидивирующей ИМП у женщин. Хроническое воспаление может сохраняться в стенке мочевого пузыря после разрешения ИМП, что также может вызвать дисфункцию уротелия и нарушение барьерной функции, и у этих пациентов ИМП будет легко рецидивировать. Эти данные позволяют по-новому взглянуть на клиническое ведение и будущие исследования рецидивирующих инфекций мочевыводящих путей.

Основываясь на этих знаниях, исследователи предположили, что хроническое воспаление может локализоваться в стенке мочевого пузыря, что также может вызывать уротелиальную дисфункцию и нарушение барьерной функции. У этих пациентов с остаточным хроническим воспалением мочевого пузыря может легко рецидивировать ИМП. Если исследователи могут определить полное разрешение хронического воспаления после эпизода острого цистита, возможно ингибировать рецидивирующий цистит путем лечения воспаления противовоспалительными средствами.

Фактор роста нервов (NGF) представляет собой небольшой секретируемый белок, который индуцирует дифференцировку и выживание определенных нейронов-мишеней. Предполагается, что NGF является химическим медиатором вызванных патологией изменений возбудимости афферентных нервов С-волокон и рефлекторной активности мочевого пузыря. Уровни нейротрофических факторов, включая увеличение NGF в мочевом пузыре после травмы спинного мозга (SCI), и повышенные уровни NGF были обнаружены в пояснично-крестцовом отделе спинного мозга и ганглиях задних корешков крыс после SCI. Хроническое введение NGF в мочевой пузырь крыс вызывает гиперактивность мочевого пузыря и увеличивает частоту возбуждения диссоциированных афферентных нейронов мочевого пузыря. Повышенные уровни NGF в моче также были обнаружены у пациентов с ИМП, проявляющих симптомы гиперактивного мочевого пузыря (ГАМП). У пациентов с интерстициальным циститом/синдромом болезненного мочевого пузыря (ИЦ/СБМП) было отмечено увеличение NGF в ткани мочевого пузыря. Недавние исследования были сосредоточены на уровнях NGF в моче при выявлении ГАМП и IC/PBS при дисфункции нижних мочевыводящих путей (LUTD). Имеющиеся данные показали, что уровни белков мочи, таких как NGF и простагландин E2, увеличиваются у пациентов с ГАМП, императивными сенсорными позывами и гиперактивностью детрузора (DO). У пациентов с сухим ГАМП и влажным ГАМП уровень NGF в моче значительно выше по сравнению с контрольной группой и пациентами с повышенной чувствительностью мочевого пузыря. Уровни NGF в моче увеличиваются физиологически в небольших масштабах у нормальных субъектов при позывах к мочеиспусканию, но увеличиваются патологически в больших масштабах у пациентов с ГАМП при небольшом объеме мочевого пузыря и при императивных позывах. Уровни NGF в моче снижаются после антимускариновой терапии и еще больше снижаются после инъекций ботулинического токсина в детрузор при рефрактерном ГАМП. В совокупности уровни NGF в моче, по-видимому, являются потенциальным биомаркером для диагностики ГАМП и лежащего в его основе хронического воспаления.

При некоторых урологических заболеваниях, включая бактериальный цистит, камни нижнего отдела мочеточника и уротелиально-клеточную карциному, могут развиться симптомы накопления, имитирующие ГАМП или ИЦ/СБМП. Уровни NGF в моче также повышены при этих заболеваниях. В предыдущем исследовании исследователи обнаружили, что ИМП может увеличить выработку NGF в моче, связанную с камнями мочевыводящих путей. Пациенты с разрешением ИМП, но также и с персистирующим ГАМП могут иметь высокие уровни NGF в моче. Эти результаты свидетельствуют о том, что NGF в моче является продуктом воспаления в мочевыводящих путях. Таким образом, NGF в моче можно рассматривать как продукт второй линии после повреждения уротелия или изменений в уротелиальной среде, которые инициируют возбуждение сенсорного нерва и вызывают гиперчувствительность мочевого пузыря или DO. Измерение NGF в моче является неинвазивным инструментом для оценки хронического воспалительного статуса и для лонгитюдного сравнения лечения.

Важно знать, могут ли уровни NGF в моче также повышаться при остром эпизоде ​​цистита, и его продукция связана с соответствующими симптомами накопления на разных стадиях после лечения антибиотиками. Это исследование предназначено для измерения уровня NGF в моче у пациентов с острым циститом и на разных стадиях после лечения антибиотиками. Если уровни NGF в моче связаны с основным воспалением в стенке мочевого пузыря, исследователи могут использовать его в качестве биомаркера для определения статуса разрешения воспаления и предоставить врачам возможность решить, как долго исследователи должны лечить пациентов с острым циститом.

Материалы и методы

В этом исследовании примут участие 30 пациенток с впервые выявленной ИМП и 30 пациенток с рецидивирующей ИМП (не менее двух предыдущих эпизодов ИМП за последние 12 месяцев), но с недавним острым эпизодом. Десять женщин того же возраста (от 30 до 50 лет) без какой-либо предшествующей истории ИМП или патологии мочевыводящих путей будут приглашены в качестве контрольной группы. Образцы мочи будут собираться у пациентов на исходном уровне, через 7 дней после лечения антибиотиками и через 2 недели, 4 недели, 8 недель и 12 недель после эпизода ИМП. Анализ мочи будет выполняться при каждом посещении, а посев мочи будет выполняться на исходном уровне, а также при посещениях через 2 недели и 3 месяца. Образцы мочи на исходном уровне и через 3 месяца будут взяты у контрольной группы для сравнения.

У всех пациентов должно быть подтверждено наличие ИМП путем обнаружения пиурии в анализе мочи (лейкоциты > 10 в поле зрения при большом увеличении) и положительный результат посева мочи. Кроме того, будет выполнена пленка почек, мочеточников и мочевого пузыря (КУБ) и УЗИ почек, чтобы исключить возможность мочекаменной болезни или другой патологии мочевыводящих путей. Однодневный дневник мочеиспускания будет запрошен при каждом посещении для определения функциональной емкости мочевого пузыря (FBC) и частоты эпизодов в день. Симптомы со стороны мочевого пузыря будут регистрироваться с помощью шкалы симптомов гиперактивности мочевого пузыря (OABSS) и визуальной аналоговой шкалы боли (ВАШ). Кроме того, урофлоуметрия, включая максимальную скорость потока (Qmax), объем мочеиспускания и остаточный объем мочи (PVR), также будет измеряться при посещении 2. Образцы мочи на исходном уровне и при каждом посещении после лечения будут собираться при комфортно наполненном мочевом пузыре и отправляться на исследование. Измерения NGF. Антибиотики (цефалексин 500 мг каждые 6 часов) в течение 1–2 недель будут начаты на исходном уровне до тех пор, пока анализ мочи не станет отрицательным, а посев мочи — отрицательным. Затем для профилактики ИМП на 3 месяца после полного разрешения острого цистита случайным образом назначат антимикробный препарат (Бактар ​​800 мг h.s.) или противовоспалительный препарат (Целекоксиб 200 мг QD). Все пациенты будут находиться под наблюдением в течение одного года, чтобы контролировать возникновение рецидивов ИМП.

Все образцы мочи будут собираться при полном мочевом пузыре и естественном мочеиспускании. Измерение уровней NGF в моче будет выполняться методом ELISA. Образцы мочи не разбавлены. Выделенную мочу сразу же помещают на лед и центрифугируют при 3000 g в течение 10 мин при 4°С. Супернатант разделяют на аликвоты в пробирках объемом 1,5 мл и хранят в морозильной камере при -80°С. Одновременно берут 3 мл мочи для измерения уровня креатинина в моче. Концентрацию NGF в моче определяют с помощью системы Emax ImmunoAssay System (Promega, Madison, Wisconsin, USA) со специфичным и высокочувствительным набором ELISA с минимальной чувствительностью 7,8 пг/мл. Количество NGF в образцах мочи падает ниже пределов обнаружения NGF. Анализ NGF извлекают из стандартной кривой NGF. Все образцы будут анализироваться в трех повторностях, уровни NGF в моче без постоянного значения в трех измерениях будут повторяться, а значения будут усреднены. Общие уровни NGF в моче дополнительно нормализуются по концентрации креатинина в моче (уровень NGF/Cr). Уровни NGF/Cr сравнивают во всех подгруппах.

Статистический анализ будет выполняться с помощью парного t-критерия для парных данных в последовательные моменты времени. Критерий Манна-Уитни будет использоваться для непараметрического анализа между различными подгруппами. Значение P менее 0,05 считается значимым.

Ожидаемые результаты

Исследователи предположили, что пациенты с рецидивирующей ИМП могут иметь постоянно повышенный уровень NGF в моче по сравнению с пациентами с впервые возникшей ИМП. Уровни NGF в моче будут оставаться повышенными у пациентов с персистирующими симптомами ГАМП после эпизода острого цистита и могут быть постоянно выше, чем в контрольной группе, через 3 месяца. Пациенты, получавшие противовоспалительные средства, могли иметь более низкие уровни NGF в моче через 3 месяца визита по сравнению с теми, кто принимал противомикробные препараты. Частота рецидивов ИМП в течение следующего года может быть выше у пациентов, получающих противомикробные препараты, чем у пациентов, получающих противовоспалительные средства.